- •По клинической лабораторной диагностике
- •По клинической лабораторной диагностике
- •Раздел 1. Организация лабораторной службы. Тема: Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.
- •5.1.Организация лабораторной службы.
- •5.2. Приказы и постановления мз рб и нормативных документов, регулирующих деятельность клинической лабораторной службы.
- •Раздел 2. Общеклинические лабораторные исследования. Тема: Исследование физических и химических свойств мочи, микроскопия мочевого осадка.
- •5.1. Исследование физических свойств мочи.
- •5.2. Определение белка в моче
- •5.3. Определение глюкозы в моче.
- •5.4. Определение кетоновых тел в моче.
- •5.5.Определение билирубина в моче(проба Розина).
- •5.6. Качественное определение уробилиновых тел (реакция Флоранса).
- •5.7. Микроскопическое исследование мочи
- •Тема: Исследование мокроты, цереброспинальной жидкости, транссудатов и экссудатов.
- •5.1. Физические свойства мокроты.
- •5.2. Микроскопическое исследование нативных препаратов мокроты.
- •5.3. Исследование окрашенных препаратов мокроты.
- •5.4.Определение физических свойств ликвора
- •5.5.Определение химических свойств ликвора
- •6. Исследование транссудатов и экссудатов
- •Раздел 3. Лабораторные исследования периферической крови. Тема: Общий клинический анализ крови.
- •5.1.Определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом.
- •5.2. Подсчет количества эритроцитов периферической крови.
- •5.3. Определение цветового показателя.
- •5.4. Определение количества лейкоцитов.
- •Тема: Костно-мозговое кроветворение. Морфология клеток крови.
- •5.1. Микроскопическое исследование клеток периферической крови.
- •Раздел 4. Лабораторные исследования системы иммунитета. Тема: Иммунологические лабораторные исследования.
- •5.1. Подготовка биологического материала для иммунологического исследования.
- •Определение количества т-лимфоцитов в реакции розеткообразования с эритроцитами барана (е-рок)
- •5.3. Определение количества в-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши.
- •5.4.Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов по поглощению зимозана.
- •5.5. Определение базальной и стимулированной метаболической активности нейтрофилов в реакции восстановления нитросинего тетразолия (нст-тест ).
- •Раздел 5. Лабораторные исследования системы гемостаза. Тема: Исследование первичного гемостаза.
- •5.1. Определение длительности кровотечения по Дюке.
- •5.2. Подсчет количества тромбоцитов.
- •Тема: Лабораторная оценка коагуляционного гемостаза.
- •5.1. Определение времени свертывания крови по Ли-Уайту.
- •5.2. Определение ачтв (активированного частичного тромбопластинового времени), кефалин-каолинового времени плазмы.
- •5.3. Протромбиновое время (пв), протромбиновый индекс (пи), протромбиновое отношение (по), международное нормализованное отношение (мно).
- •5.4. Тромбиновое время.
- •5.5. Определение концентрации фибриногена а в плазме.
- •5.6. Определение фибриногена в.
- •5.7. Этаноловый тест.
- •Раздел 6. Биохимические исследования сыворотки крови.
- •5.1. Определение общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (Кингслея—Вейксельбаума)
- •5.2.Определение содержания альбумина в сыворотке (плазме) крови по реакции с бромкрезоловым зеленым
- •5.3. Определение мочевины в сыворотке крови и моче ферментативным методом
- •5.4. Определение креатинина в сыворотке крови и моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера и соавт.)
- •5.5. Кинетический вариант определения креатинина
- •5.1. Колориметрический динитрофенилгидразиновый метод исследования активности аминотрансфераз в сыворотке крови (по Райтману, Френкелю)
- •5.2. Кинетический метод определения активности АсАт
- •5.3. Кинетический метод определения активности АлАт
- •5.4. Определение активности щелочной фосфатазы
- •5.5.Определение активности а-амилазы методом Каравея (микрометод).
- •Тема: Лабораторные исследования углеводного обмена и липидов.
- •5.1. Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.
- •5.2. Определение общего холестерина сыворотки крови, основанный на реакции Либермана—Бурхардта (метод Илька).
- •5.3. Определение уровня холестерина липопротеинов высокой плотности (α-холестерина).
- •5.4. Определение уровня триглицеридов.
- •5.5.Определение содержания глюкозы ферментативным методом
- •5.1. Определение содержания билирубина колориметрическим диазометодом Йендрашика—Клеггорна—Грофа
- •Раздел 7. Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований. Тема: Внутрилабораторный контроль качества.
- •5.1. Внутрилабораторный контроль качества воспроизводимости результатов.
- •Тема: Коллоквиум. Составление аналитического лабораторного заключения.
- •Общие положения
- •Меры предосторожности при оказании медицинской помощи, обслуживании больных, работе с биоматериалом.
- •Мероприятия при ранениях, контактах с кровью, другими биологическими материалами пациентов.
- •Регистрация аварий и наблюдение за пострадавшими
- •Кирпиченок Людмила Николаевна,Скребло Елена Иосифовна, Шилин Владимир Евгеньевич, Тихон Татьяна Владимировна
- •Практикум по клинической лабораторной
- •Диагностике
- •Учебно-методическое пособие
5.2. Подсчет количества эритроцитов периферической крови.
Принцип метода: Подсчет количества форменных элементов крови производят с помощью счетной камеры Горяева и автоматических анализаторов клеток крови.
Камера Горяева — толстое, прямоугольное прозрачное стекло, прорезанное 4-мя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки — 2 боковые и 1 среднюю. Средняя пластинка пересечена поперечной канавкой (бороздкой) на 2 равные части. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. На каждой половине средней пластинки нанесена сетка Горяева. Перед работой притирается покровное шлифованное стекло. Оно должно прикрыть обе боковые и средние пластинки. Появление радужных колец Ньютона свидетельствует о том, что покровное стекло притерто правильно. Между средней пластинкой и покровным стеклом имеется щель. Это и есть камера, в которую заливают разведенную кровь. Глубина камеры 0,1 мм. Сетка Горяева квадратная. Сторона сетки 3 мм, площадь 9 мм2. Сетка, разделена на 225 больших квадратов (15 — по горизонтали, 15 — по вертикали). Часть больших квадратов (через два на третий) разделена на 16 малых. Сторона малого квадрата равна 1/20 мм. Площадь малого квадрата 1/20 х 1/20 = 1/400 мм2. Высота камеры 1/10 мм. Объем крови над малым квадратом 1/400 х 1/10 = 1/4000 мкл (или мм3).Подсчет в камере производят под малым увеличением (объектив 8, окуляр 10 или 15, конденсор опущен, диафрагма прикрыта).
Камеру устанавливают на предметный столик микроскопа. Под малым увеличением находят изображение камеры, устанавливают в поле зрения верхний левый угол сетки. Передвигая стекло левой рукой, последовательно изучают отдельные малые и большие квадраты всей сетки камеры.
Подготовка камеры Горяева к работе. Камеру и шлифованное покровное стекло моют водопроводной водой, насухо вытирают. На участок камеры с нанесенными сетками укладывают шлифованное покровное стекло, осторожно, нажимая большими пальцами на края покровного стекла, его притирают к боковым пластинкам камеры до появления радужных колец (кольца Ньютона). Каплю исследуемой жидкости помешают перед щелью, образующейся между покровным стеклом и счетной камерой. В силу закона капиллярности жидкость заполняет пространство под покровным стеклом над сеткой. При заполнении камеры надо стараться, чтобы исследуемая жидкость не растекалась в борозды камеры и чтобы в камеру не попали пузырьки воздуха. Все это может изменить правильное распределение элементов крови в камере. Равномерность заполнения и распределения форменных элементов крови по сетке камеры проверяют под микроскопом. После заполнения камеру оставляют стоять на 1—2 мин, чтобы элементы крови осели на дно и движение их прекратилось.
Определение количества эритроцитов в камере Горяева
Принцип метода основан на подсчете эритроцитов в строго определенном объеме камеры при постоянном разведении крови.
Реактивы: 0,9% раствор хлорида натрия
Ход определения.
В сухую чистую пробирку отмеривают 4 мл 0,9% раствор хлорида натрия. Пипеткой набирают 0,02 мл крови из пальца, вытирают кончик пипетки фильтровальной бумагой или марлей, выдувают кровь на дно пробирки с разводящей жидкостью (разведение крови в 200 раз). Пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять до момента счета. Подсчет эритроцитов следует провести не позднее 2—3 ч после забора крови. Исключение составляют больные гемолитической и мегалобластной анемиями, у которых эритроциты отличаются хрупкостью и быстро разрушаются, в этом случае эритроциты нужно считать сразу после взятия крови. Нельзя оставлять подсчет эритроцитов на следующий день, так как при хранении эритроциты разрушаются. Готовят камеру Горяева. Шлифованное стекло притирают до появления радужных колец, наличие которых свидетельствует о соблюдении необходимой высоты и объема камеры. Правильное заполнение счетной камеры разведенной кровью обеспечивает точность подсчета форменных элементов. Перед заполнением камеры содержимое пробирки перемешивают несколько раз, вращая пробирку между ладонями. Затем концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной крови на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла. Проверяют равномерность растекания капли, отсутствие пузырьков воздуха. После заполнения камеру нужно положить на стол на 1—2 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится и эритроциты не осядут.
Подсчитывают эритроциты при малом увеличении микроскопа — объектив 8, окуляр 10 или 15 в затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой или при опущенном конденсоре) в 5 больших расчерченных квадратах, расположенных по диагонали. Каждый такой квадрат разделен на 16 малых квадратов, т. е. эритроциты считают в 80 маленьких квадратах. При этом, чтобы не допустить ошибки в подсчете и не посчитать дважды одни и те же эритроциты, в счет включают эритроциты, лежащие внутри квадрата и на 2-х определенных его сторонах (например на левой и нижней линиях).
Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови проводят по формуле:
Х = а × 4000 × 200
80
где X — количество эритроцитов в 1 мкл крови; а — сумма сосчитанных эритроцитов в 80 малых квадратах; 4000 — множитель, приводящий результат к объему в 1 мкл крови, так как объем малого квадрата равен 1/4000 мкл; 200 — разведение крови.
После проведения арифметического действия формула упрощается: X = а × 10 000.
Поэтому число эритроцитов в 1 мкл крови равно количеству эритроцитов, сосчитанных в 80 малых квадратах (5 больших), умноженному на 10 000. Например, в 5 больших квадратах камерыГоряева подсчитано 390 эритроцитов. В 1 мкл крови количество эритроцитов составило 390 х 10000 = 3900000. Чтобы выразить содержание эритроцитов в 1 л крови, нужно количество эритроцитов в миллионах умножить на 1012 , т. е. 3 900 000 эритроцитов в 1 мкл крови = 3,9 х 1012/л.
Возможные источники ошибок.
1. Неточность взятия крови в пипетку.
2. Образование сгустка, который, поглощая часть клеток, приводит к заниженным результатам исследования.
3. Неравномерное заполнение камеры, образование пузырьков воздуха.
4. Неправильное притирание шлифованного покровного стекла (отсутствие радужных колец), что приводит к изменению высоты камеры. Имеет значение толщина покровного стекла, она должна быть не меньше 0,3 мм.
5. Подсчет эритроцитов сразу после заполнения камеры, не выжидая 1 мин. При этом эритроциты не успевают осесть на дно, количество их при счете оказывается заниженным.
6. Подсчет меньшего, чем требуется по методике, количества квадратов.
7. Недоброкачественность разводящей жидкости для эритроцитов.
8. Плохо вымытые камера, пробирка, пипетка, капилляр для взятия крови, недостаточно просушенные пипетки, пробирка.
Нормальное количество эритроцитов в 1 л крови у мужчин 4,0— 5,5 х 1012/л; женщин 3,7- 4,7 х 1012/л.
Клиническое значение.
Увеличение количества эритроцитов выше нормы называют эритроцитозом, снижение — эритроцитопенией. Снижение количества эритроцитов наблюдается при анемиях различной этиологии, увеличении объема плазмы. Повышение количества эритроцитов возникает при симптоматических эритроцитозах, эритремии, наследственных эритроцитозах, уменьшении объема плазмы. На уровень эритроцитов влияют возраст, пол, физическая нагрузка, эмоциональное состояние.