- •По клинической лабораторной диагностике
- •По клинической лабораторной диагностике
- •Раздел 1. Организация лабораторной службы. Тема: Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.
- •5.1.Организация лабораторной службы.
- •5.2. Приказы и постановления мз рб и нормативных документов, регулирующих деятельность клинической лабораторной службы.
- •Раздел 2. Общеклинические лабораторные исследования. Тема: Исследование физических и химических свойств мочи, микроскопия мочевого осадка.
- •5.1. Исследование физических свойств мочи.
- •5.2. Определение белка в моче
- •5.3. Определение глюкозы в моче.
- •5.4. Определение кетоновых тел в моче.
- •5.5.Определение билирубина в моче(проба Розина).
- •5.6. Качественное определение уробилиновых тел (реакция Флоранса).
- •5.7. Микроскопическое исследование мочи
- •Тема: Исследование мокроты, цереброспинальной жидкости, транссудатов и экссудатов.
- •5.1. Физические свойства мокроты.
- •5.2. Микроскопическое исследование нативных препаратов мокроты.
- •5.3. Исследование окрашенных препаратов мокроты.
- •5.4.Определение физических свойств ликвора
- •5.5.Определение химических свойств ликвора
- •6. Исследование транссудатов и экссудатов
- •Раздел 3. Лабораторные исследования периферической крови. Тема: Общий клинический анализ крови.
- •5.1.Определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом.
- •5.2. Подсчет количества эритроцитов периферической крови.
- •5.3. Определение цветового показателя.
- •5.4. Определение количества лейкоцитов.
- •Тема: Костно-мозговое кроветворение. Морфология клеток крови.
- •5.1. Микроскопическое исследование клеток периферической крови.
- •Раздел 4. Лабораторные исследования системы иммунитета. Тема: Иммунологические лабораторные исследования.
- •5.1. Подготовка биологического материала для иммунологического исследования.
- •Определение количества т-лимфоцитов в реакции розеткообразования с эритроцитами барана (е-рок)
- •5.3. Определение количества в-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши.
- •5.4.Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов по поглощению зимозана.
- •5.5. Определение базальной и стимулированной метаболической активности нейтрофилов в реакции восстановления нитросинего тетразолия (нст-тест ).
- •Раздел 5. Лабораторные исследования системы гемостаза. Тема: Исследование первичного гемостаза.
- •5.1. Определение длительности кровотечения по Дюке.
- •5.2. Подсчет количества тромбоцитов.
- •Тема: Лабораторная оценка коагуляционного гемостаза.
- •5.1. Определение времени свертывания крови по Ли-Уайту.
- •5.2. Определение ачтв (активированного частичного тромбопластинового времени), кефалин-каолинового времени плазмы.
- •5.3. Протромбиновое время (пв), протромбиновый индекс (пи), протромбиновое отношение (по), международное нормализованное отношение (мно).
- •5.4. Тромбиновое время.
- •5.5. Определение концентрации фибриногена а в плазме.
- •5.6. Определение фибриногена в.
- •5.7. Этаноловый тест.
- •Раздел 6. Биохимические исследования сыворотки крови.
- •5.1. Определение общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (Кингслея—Вейксельбаума)
- •5.2.Определение содержания альбумина в сыворотке (плазме) крови по реакции с бромкрезоловым зеленым
- •5.3. Определение мочевины в сыворотке крови и моче ферментативным методом
- •5.4. Определение креатинина в сыворотке крови и моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера и соавт.)
- •5.5. Кинетический вариант определения креатинина
- •5.1. Колориметрический динитрофенилгидразиновый метод исследования активности аминотрансфераз в сыворотке крови (по Райтману, Френкелю)
- •5.2. Кинетический метод определения активности АсАт
- •5.3. Кинетический метод определения активности АлАт
- •5.4. Определение активности щелочной фосфатазы
- •5.5.Определение активности а-амилазы методом Каравея (микрометод).
- •Тема: Лабораторные исследования углеводного обмена и липидов.
- •5.1. Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.
- •5.2. Определение общего холестерина сыворотки крови, основанный на реакции Либермана—Бурхардта (метод Илька).
- •5.3. Определение уровня холестерина липопротеинов высокой плотности (α-холестерина).
- •5.4. Определение уровня триглицеридов.
- •5.5.Определение содержания глюкозы ферментативным методом
- •5.1. Определение содержания билирубина колориметрическим диазометодом Йендрашика—Клеггорна—Грофа
- •Раздел 7. Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований. Тема: Внутрилабораторный контроль качества.
- •5.1. Внутрилабораторный контроль качества воспроизводимости результатов.
- •Тема: Коллоквиум. Составление аналитического лабораторного заключения.
- •Общие положения
- •Меры предосторожности при оказании медицинской помощи, обслуживании больных, работе с биоматериалом.
- •Мероприятия при ранениях, контактах с кровью, другими биологическими материалами пациентов.
- •Регистрация аварий и наблюдение за пострадавшими
- •Кирпиченок Людмила Николаевна,Скребло Елена Иосифовна, Шилин Владимир Евгеньевич, Тихон Татьяна Владимировна
- •Практикум по клинической лабораторной
- •Диагностике
- •Учебно-методическое пособие
5.2. Кинетический метод определения активности АсАт
Принцип метода: оптимизированный кинетически метод основан на следующих ферментативных реакциях:
АсАТ
L-аспартат + 2-оксоглутарат <=> глутамат + оксалоацетат,
МДГ
оксалооцетат + НАДН + Н+ <=> малат + НАД+
Уменьшение концентрации НАДН пропорционально активности АсАТ.
Реактивы (по наборам НТК «Анализ - Х»):
фосфатный буфер (рН = 7,4) – L-аспартат, 80 мл.
реагент ферментный (лиофилизат) – смесь фермента, НАДН, 2-оксоглутарата натрия
Ход исследования:
Длина волны 340 нм, кювета 1 см, температура 37 °С. Определение активности АсАТ проводят в сыворотке крови или плазме, без следов гемолиза. Отмеряют 1 мл рабочего раствора в кювету, прогревают ее содержимое при 37 °С в течение 5 мин. Добавляют 0,1 мл анализируемой пробы, перемешивают и инкубируют при температуре 37 °С 1 мин. Замеряют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху или воде. Затем в течение 3 мин замеряют оптическую плотность через каждые 60 с и рассчитывают среднее изменение оптической плотности за минуту ∆А/мин.
Расчет. Активность АсАТ в исследуемой пробе определяют по формуле:
Е/л = ∆А /мин × 2430.
Область определения линейна до 200 Е/л. При превышении активности пробы разводят 0,9% раствором NaCl в соотношении 1 : 1, а полученный результат умножают на 2.
Нормальные величины равны 5—40 Е/л.
5.3. Кинетический метод определения активности АлАт
Принцип метода: оптимизированный кинетический метод основан на следующих ферментативных реакциях:
АлАТ
L-аланин + 2-оксоглутарат <=> глутамат + пируват,
ДЛГ
пируват + НАДН + Н+ <=> лактат + НАД+.
Уменьшение концентрации НАДН пропорционально активности АлАТ.
Реактивы.
фосфатный буфер (рН = 7,4) – D, L-аланин, 80 мл.
реагент ферментный (лиофилизат) – смесь фермента, НАДН, 2-оксоглутарата натрия
Ход исследования:
Длина волны 340 нм, кювета 1 см, температура 37 °С. Определение активности АлАТ проводят в сыворотке крови или плазме без следов гемолиза. Отмеряют 1 мл рабочего раствора в кювету, прогревают ее содержимое при 37 °С в течение 5 мин. Добавляют 0,1 мл анализируемой пробы (сыворотки, плазмы), перемешивают и инкубируют при температуре 37 °С 1 мин. Замеряют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху или воде. Затем в течение 3 мин замеряют оптическую плотность через каждые 60 с и рассчитывают среднее изменение оптической плотности за минуту Д/мин.
Расчет. Активность АлАТ в исследуемой пробе определяют по формуле:
Е/л = ∆А/мин ×1770.
Область определения линейна до 200 Е/л. Пробы с активностью АлАТ выше 200 Е/л разводят 0,9% раствором NaCl в соотношении 1 : 1, а полученный результат умножают на 2. Липемические и желтушные сыворотки могут вызвать значительное помутнение пробы. В таких случаях проводят определение, добавляя к 1 мл рабочего раствора 0,05 мл пробы, а результат умножают на 2.
Нормальные величины: 8—56 Е/л.
Клиническое значение определения активности аминотрасфераз в сыворотке крови.
Исследование активности АсАТ в сыворотке крови широко используется для диагностики инфаркта миокарда, заболеваний печени, мышечной патологии и др.
При инфарктах миокарда в 95% всех случаев активность АсАТ повышена. Повышение активности АсАТ иногда наблюдается при таких формах инфаркта миокарда, которые не диагностируются электрокардиографически.
Выраженное увеличение активности аминотрансфераз наблюдается при гангрене мышц, прогрессирующем миозите, миокардите, некрозе и травме скелетных мышц.
Наиболее высокие значенияя активности АсАТ и АлАТ регистрируются при остром (в том числе вирусном) гепатите и других формах поражения печени. При вирусных гепатитах активность аминотрансфераз повышается в очень ранние сроки — еще до появления желтухи. Увеличение активности ферментов наблюдается и у больных с безжелтушной формой заболевания. С наступлением выздоровления трансаминазная активность постепенно приходит к норме. При остром гепатите активность АлАТ повышается в большей степени, чем активность АсАТ.