- •Введение
- •Глава 1. Структура и функции системы иммунитета
- •Виды иммунитета
- •Цитокины и интерлейкины
- •Поверхностные лейкоцитарные антигены и рецепторы
- •Наоборот, активация посредством tlr-4 ведет к образованию Тх1 и продукции провоспалительных цитокинов (ил-1, 2, 12, всех типов интерферонов, фно альфа).
- •Гуморальные факторы врожденного иммунитета
- •Клетки естественного врожденного иммунитета
- •Лимфоидная система
- •Иммуноглобулины и антитела
- •Т-лимфоциты
- •Глава 2. Антигены. Динамика иммунного ответа Антигены
- •Динамика иммунного ответа
- •Глава 3. Иммунитет и инфекции
- •Противобактериальный иммунитет
- •Факторы естественного иммунитета служат первым этапом защиты, а затем они включают механизмы адаптивного (приобретенного) иммунитета.
- •Противовирусный иммунитет
- •Врожденная резистентность и иммунитет к вирусам
- •Противопаразитарный и противогрибковый иммунитет
- •Глава 4. Виды иммунопатологии
- •Существуют следующие группы вредных иммунотропных веществ:
- •Иммунодефицитные болезни
- •Вторичные иммунодефициты
- •Аллергия и аутоиммунные заболевания
- •При первом контакте с антигеном – будущим аллергеном, развивается обычная иммунная реакция.
- •Реакции, развивающиеся через 4-12 часов после контакта с аллергеном, называют отсроченными, "поздними".
- •I тип реакций. Анафилактические реакции (реагиновые, IgE- зависимые).
- •Хотя IgE- механизм развития атопических реакций считается основным, возможно участие в нем антител класса IgG, особенно IgG4 субкласса.
- •Трансплантационный иммунитет
- •Противоопухолевый иммунитет
- •Глава 5. Иммунодиагностика. Оценка иммунного статуса
- •Иммунный статус – это состояние си здорового или больного в определенный момент онтогенеза при конкретных условиях окружающей среды.
- •Уровень секреторного IgA в слюне составляет 0,03-0,4 г/л.
- •Специфические показатели иммунного статуса
- •Реакцию преципитации можно проводить в жидкой и плотной среде – (в агаре или геле).
- •Реакция преципитации в жидкой среде (кольцепреципитация).
- •Реакция преципитации в агаре.
- •Эти методы высокочувствительны. В качестве метки антигенов или антител применяют флюоресцентные красители, радиоактивные изотопы, ферменты и др. Иммунофлюоресцентные методы
- •Радиоиммунологический анализ.
- •Глава 6. Иммунотерапия и иммунопрофилактика
- •С целью иммунотерапии вакцины используют при хронических затяжных инфекциях (убитые стафилококковая, гонококковая, бруцеллёзная вакцины).
- •Серотерапия. Иммунные антисыворотки и иммуноглобулины
- •IV. Природные, синтетические, генно-инженерные препараты: Микроэлементы и витамины, особенно при их недостатке в организме, компенсируют возникшие при этом иммунодефициты.
Глава 5. Иммунодиагностика. Оценка иммунного статуса
Неспецифические показатели иммунного статуса
Иммунодиагностика–это применение иммунологических реакций и методов с целью оценки иммунного статуса, лабораторной диагностики заболеваний, а также для идентификации антигенов.
Все методы иммунодиагностики делятся на 2 группы:
Общие неспецифические методы, характеризующие состояние различных звеньев системы иммунитета: лимфоцитов, гранулоцитов, макрофагов, комплемента. Обычно их применяют для выявления дефекта в СИ, т.е. при иммунодефицитах.
Специфические методы, позволяющие выявить антитела, иммунные Т-лимфоциты, антигены в организме человека или антигены возбудителя во внешней среде. Эти методы используют для диагностики инфекций, аллергии, аутоиммунных заболеваний.
Иммунный статус – это состояние си здорового или больного в определенный момент онтогенеза при конкретных условиях окружающей среды.
В частности, иммунный статус ребенка отличается от такового у взрослого человека. Также он изменяется под влиянием неблагоприятных воздействий.
Для оценки иммунного статуса применяют определение неспецифических и специфических показателей. Оценка иммунного статуса – это процесс получения комплекса количественных и функциональных показателей, отражающих состояние СИ. Она проводится с целью выявления природы иммунопатологии – иммунодефицитных и аллергических заболеваний.
Для этого сначала у больного собирают анамнез и проводят общеклиническое обследование. В нем важным является формула крови – количество лейкоцитов разных типов: нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов, лимфоцитов. Лейкоцитоз – увеличение общего количества лейкоцитов (более 9х109/л) часто наблюдается при инфекциях; лейкопении – снижение их количества (менее 4 х109/л) – при аутоаллергии; эозинофилия – увеличение количества (более 3%) эозинофилов при экзогенной аллергии и т.д. Однако этих данных обычно недостаточно и необходимо более детальное определение популяций, субпопуляций лейкоцитов и гуморальных факторов иммунитета.
Характеристика Т-лимфоцитов
1. Определяют общее количество лейкоцитов, формулу крови и количество лимфоцитов. В норме лимфоцитов 20-36% среди других лейкоцитов (около 2000 клеток в 1 мм3 крови).
2. Подсчитывают процент и количество Т-лимфоцитов. В норме среди лимфоцитов крови их 50-70% (1000-1400 клеток в 1 мм3 крови).
Простой метод определения Т-клеток: подсчет количества (процента) лимфоцитов, образующих при помощи CD2-АГ розетки с эритроцитами барана:
к взвеси лейкоцитов добавляют равный объем 1% взвеси отмытых эритроцитов барана и инкубируют при 370С 15 мин и ночь при 40С;
осадок ресуспензируют, добавляют раствор глютарового альдегида до конечной концентрации 0,06% для фиксации розеток и сразу делают мазки;
мазки высушивают, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе;
подсчитывают процент Т-лимфоцитов, связавших три и более эритроцитов;
В настоящее время общую популяцию Т-лимфоцитов выявляют с помощью меченых моноклональных антител к СD-антигенам (СD2, СD3) в реакции иммунной флюоресценции (с учетом результатов на люминесцентном микроскопе, на проточном цитофлюориметре) или в реакции с частицами, покрытыми такими антителами. В норме у человека в крови среди всех лимфоцитов 55-80% являются Т-клетками.
3. Определяют содержание Т-хелперов и Т-супрессоров с помощью моноклональных антител к СD4 (Тx) и СD8 (Тc) антигенам.
У человека в норме в крови обнаруживается 33-46% Тx, 17-25% Тc, соотношение Тx/Тc=1,4-2.0 – иммунорегуляторный индекс. При заболеваниях этот индекс изменяется. Например, при СПИДе он уменьшается (0,04), т.к. угнетаются Тx (рецептором для вируса СПИДа является антиген Тx СD4). При аутоиммунных и аллергических заболеваниях индекс больше 2.0.
4. Для выявления активированных Т-клеток определяют рецепторы к ИЛ-2 (CD25), HLA-DR антигены и CD71 (рецептор для трансферрина).
5. Определяют уровень различных цитокинов в крови (обычно с помощью иммуноферментного анализа).
Исследуют также функциональные показатели Т-лимфоцитов: пролиферативную активность (см. РБТЛ, РПМЛ), цитотоксическую и цитокиновую активность. Показатели Т-лимфоцитов снижаются при Т-клеточных иммунодефицитах.
Характеристика В-лимфоцитов
1. Общее количество В-лимфоцитов можно определить с помощью моноклональных антител к антигенам СD19-СD22, СD72. Применяют также антитела к иммуноглобулинам, которые находятся на поверхности В-лимфоцитов. В-лимфоциты составляют 17-25% всех лимфоцитов (600-800 клеток в 1 мм3крови). Иногда определяют В-лимфоциты, имеющие рецепторы к эритроцитам мыши (10-15%), составляющие лишь часть В-субпопуляции.
2. Продукты В-лимфоцитов – иммуноглобулины G, М, A классов в сыворотке крови и различных биологических жидкостях определяют с помощью радиальной иммунодиффузии в агаре–реакции преципитации по Манчини.
Для этого на одну стеклянную пластинку (или чашку Петри) наливают 2% агар, смешанный с антителами против IgG; на вторую пластинку – с антителами против IgМ, на 3-ю – против IgА. После застывания в агаре делают лунки диаметром 2 мм. В один ряд лунок каждой пластины вносят стандартную сыворотку с известной концентрацией IgG, IgМ, IgА. В другие лунки добавляют исследуемые сыворотки крови больных.
Иммуноглобулины диффундируют в агар и на месте встречи с антителами, которые находятся в агаре, образуется зона кольца преципитации. Диаметр этого кольца зависит от концентрации Ig (чем больше Ig, тем больше диаметр). Измеряют диаметр зоны преципитации для трех разведений стандартной сыворотки и по ней на полулогарифмической бумаге строят график зависимости квадрата диаметра кольца преципитации (Д) от количества Ig в сыворотке крови (рис. 5.1). Затем измеряют диаметр кольца преципитации исследуемой сыворотки, наносят на построенный график и определяют концентрацию иммуноглобулина. Для определения секреторного IgA (в слюне и др.) используют аналогичный метод в двух вариантах: определяют IgA (-цепь) и его секреторный компонент с помощью соответствующих антител.
Нормы у взрослых: 0,8-2 г/л IgM; 8,0-13,0 г/л IgG; 1,4-3,0 г/л IgA. У новорожденных уровень IgG близок к материнскому, IgM и IgA имеются в следовых концентрациях; к 4-6 мес. уровень IgG падает до 5-6 г/л, а затем увеличивается. При нормальном развитии детей уровень иммуноглобулинов к 2-м годам близок величинам их у взрослых.