- •3513 Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
- •Передмова
- •Cписок скорочень
- •Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об’єктива. Прості методи фарбування препаратів
- •Дeмонстрація
- •1. Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля (рис. 1д), чашка Петрі (рис. 1а), пробірки, градуйовані піпетки, колби
- •2. Предметні та покривні скельця (рис. 1б, в). Скельця з лунками. Спиртівка. Пісочний годинник, олівець “для скла”
- •3. Мікроскоп. Імерсійне масло
- •Правила роботи з імерсійною системою
- •Можливі помилки під час роботи з мікроскопом
- •Догляд за мікроскопом
- •Пояснення до самостійної роботи з теми:
- •Загальна будова навчального світлового мікроскопа
- •2. Будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики збудників інфекційних захворювань
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики інфекційних захворювань»
- •Спори та методи їх виявлення
- •Капсула
- •Класифікація бактерій за кількістю і розташуванням джгутиків
- •Методи виявлення джгутиків у бактерій
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Особливості ультраструктури спірохет,
- •Рикетсій, хламідій, мікоплазм.
- •Сучасні методи мікроскопічного дослідження»
- •Звивисті форми бактерій
- •Загальна схема будови Treponema pallidum
- •4. Основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3. Автоклав
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація»
- •Види та завдання дезінфекції
- •Практична робота студентів
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Фізіологія бактерій.
- •Перший етап бактеріологіного методу діагностики.
- •Біологічний метод діагностики»
- •Метаболізм
- •Конструктивний (анаболізм) Енергетичний (катаболізм)
- •6. Ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ііі – IV етап виділення чистої культури аеробних бактерій. Ферменти бактерій. Антибіотики»
- •8. Облігатні Анаероби. Виділення чистої культури
- •3. Метод Фортнера
- •4. Ріст Cl. Perfingens на середовищі Вільсон-Блера
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «облігатні Анаероби. Виділення чистої культури облігатних анаеробних бактерій»
- •V етап Врахування та аналіз результатів дослідження. Відповідь
- •9. Бактеріофаги. Генетика бактерій
- •Теоретичні питання
- •Практична робота студентів
- •Демонстрація
- •5 . Дослід із виявлення множинної стійкості мікроорганізмів до антибіотиків
- •2 Мл культури реципієнта (f-)
- •1 Мл бульйонної культури реципієнта
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій»
- •Бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій
- •Перевага методу плр – полімеразної ланцюгової реакції для діагностики інфекційних захворювань
- •10. Нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3.1. Замалюйте мікроскопічні препарати.
- •3.2. Бакпечатка для вивчення мікрофлори тіла людини
- •3.3. Біологічні препарати (еубіотики): колібактерин, лактобактерин, біфідумбактерин, біфікол.
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •Дисбактеріоз
- •11. Вчення про інфекцію
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •1. Виявлення гемолітичної властивості бактерій
- •2. Виявлення плазмокоагулазної активності бактерій
- •4. Виявлення лецитовітелазної активності
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •12. Імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •2. Фагоцитоз у новонародженої і дорослої людини
- •3. Визначення бактерицидної активності сироватки крові
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму»
- •Особливості імунної системи
- •13. Антигени
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація Діагностичні препарати: Діагностикуми і антигени
- •Алергени для шкірноалергічних проб
- •Лікувально-профілактичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «антигени»
- •Класифікація антигенів
- •Антигени – сторонні макромолекули
- •Інфекційні
- •14. Адаптивна гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Імунні сироватки (антитоксичні) та імуноглобуліни
- •2. Титрування антитоксичної сироватки методом флокуляції
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації»
- •Набутий (адаптивний) імунітет
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Реакція непрямої гемаглютинації (рнга)
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «серологічні реакції: реакція зв’язування комплементу (рзк), реакції з використанням мічених антитіл та антигенів – іфа, ріф, ріа»
- •16. Адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді»
- •Механізм цитотоксичної дії т-кілера на клітину-мішень
- •17. Оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи»
- •18. Протиінфекційний імунітет
- •Теоретичне питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «протиінфекційний імунітет»
- •Антигенспецифічна імунна відповідь
- •Зв’зок типу імунної відповіді з локалізацією інфекційних агентів
- •19. Патологія імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «патологія імунної системи»
- •Типи алергічних реакцій
- •20. Специфічна профілактика та терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Діагностичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «специфічна профілактика і терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати»
- •Список рекомендованої літератури
- •Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
Пояснення до самостійної роботи з теми
«Фізіологія бактерій.
Перший етап бактеріологіного методу діагностики.
Біологічний метод діагностики»
Культура бактерій (визначення) |
Бактерії, що виросли на поживномусередовищі |
Чиста культура (визначення) |
Скупчення бактерій одного виду, що виросли на щільному чи рідкому поживномусередовищі |
За способом отримання чисті культури поділяють на |
|
Чисті культури бактерій необхідні для |
Вивчення властивостей даного виду мікробів. Визначення видової належності даних мікробів, тобто для їх ідентифікації. Виготовлення бактеріальних препаратів: діагностичних, лікувальних та профілактичних. Використання у мікробіологічних експериментах |
Вид (визначення) |
Це група особин, що мають загальне походження, однакову будову та функції |
Штам (визначення) |
Культура бактерій, виділена з конкретного джерела (організму людини, тварини, об׳єктазовнішнього середовища) |
Клон (визначення) |
Потомство однієї бактеріальної клітини |
Основні процеси , що складають фізіологію мікроорганізмів |
Живлення, дихання, розмноження, мінливість |
Механізми живлення бактерій
|
Пасивна дифузія – перенесення поживних речовин у клітину за рахунок різниці концентрації по обидва боки цитоплазматичної мембрани. Спостерігається в основному при потраплянні в бактеріальну клітину води. Полегшена дифузія – проходження більшості розчинних речовин через цитоплазматичну мембрану відбувається за рахунок їх захоплення на зовнішній і перенесення на внутрішню поверхню мембрани молекулами-переносниками, які називаються пермеазами. Вони характеризуються різним ступенем специфічності до речовин. Активний транспорт - проходження проти градієнта концентрації, тобто „проти течії”, відбувається зі значними витратами енергії АТФ, що виділяється у процесі метаболізму. Транслокація радикалів – перенесення хімічно змінених молекул, які у цілому вигляді не здатні пройти через цитоплазматичну мембрану. Екзоферменти фрагментують їх до одиничних радикалів, кожен із яких окремо пермеази переносять через цитоплазматичну мембрану всередину клітини, де відбувається ресинтез цієї сполуки |
Групи бактерій за типом дихання |
|
Облігатні аероби |
Мікроорганізми, для оптимального росту яких необхідно 21% кисню в атмосфері. До них належать збудники туберкульозу, чуми, холерний вібріон. Акцептором електронів (водню) у них є кисень |
Облігатні анаероби |
Бактерії, які ростуть за відсутності вільного молекулярного кисню за рахунок процесів бродіння. Такими є збудники правця, ботулізму, газової анаеробної інфекції, бактероїди, фузобактерії та ін. |
Факультативні анаероби (факультативні аероби) |
Бактерії, що залежно від умов середовища (наявності або відсутності кисню) здатні переключати свої метаболічні процеси з використанням молекулярного кисню на бродіння та навпаки Групу факультативних анаеробів формують численні представники групи кишкових бактерій (ешерихії, шигели, сальмонели та ін.) |
Мікроаерофіли |
Особлива група бактерій, для яких концентрація кисню в атмосфері при культивуванні може бути зменшена до 2%. Вищі його концентрації здатні затримувати ріст. Представниками цієї групи є молочнокислі бактерії, збудники виразки шлунка, спірохети, актиноміцети |
Капнофільні мікроорганізми |
Мікроорганізми, що культивуються в атмосфері, яка містить 5 – 10 % вуглекислого газу, наприклад, бруцели, менінгококи |
Групи бактерій за способом утилізації вуглецю та азоту |
Аутотрофи, гетеротрофи
|
Класифікація гетеротрофів |
Сапрофіти та паразити |
Класифікація паразитів |
Облігатні та факультативні |
Облігатні паразити (визначення) |
Мікроорганізми, що повністю не здатні жити без живого організму (віруси, рикетсії, хламідії) |
Методи мікробіологічної діагностики |
|
Цілі культивування бактерій у медичній практиці |
Культивування бактерій, а саме бактеріологічний метод дослідження,проводять з метою діагностики інфекційних захворювань, виявлення мікроорганізмів у навколишньому середовищі, визначення виду й варіанта мікроорганізмів, а також для добування продуктів їх життєдіяльності – токсинів, ферментів, антибіотиків тощо |
Методи виділення чистих культур, що ґрунтуються на біологічному принципі |
Біологічний принцип роз׳єднання бактерій передбачає цілеспрямований пошук методів, які враховують численні особливості мікробних клітин:
|
Умови культивування бактерій |
|
Типи поживнихсередовищ |
|
Прості поживнісередовища |
Такі середовища ще називають універсальними. До них відносять м'ясопептонний агар, м'ясопептонний бульон, пептонну воду. На таких середовищах росте більшість мікроорганізмів |
Спеціальні поживнісередовища |
Використовують для культивування певних видів мікроорганізмів, які на інших середовищах ростуть погано або зовсім не ростуть. Приклади: ЖСА, лужна пептонна вода |
Елективні поживнісередовища |
Застосовують для виділення танакопичення певних бактерій. Наприклад,середовище Рапопорт – елективне для сальмонел |
Селективні поживнісередовища |
Склад таких середовищ сприяє росту одних бактерій і пригніченню інших. Приклади: агар Плоскірєва, Левіна, ВСА |
Середовища накопичення |
Рідкі поживні середовища, що використовуються для накопичення бактеріальної маси |
Диференціально-діагностичніпоживнісередовища |
Використовують для того, щоб відрізнити один вид бактерій від іншого. Наприклад: середовища Хісса, цитратний агар Симонса, агар Ендо |
Індикаторні поживнісередовища |
Використовують для виявлення культур бактерій, ріст яких спричинює добре видиму зміну середовища. Наприклад, середовище Вільсона-Блера |
Консервувальні середовища |
Основне призначення цих середовищ – первинний посів й транспортування патологічного матеріалу. |
Чиста культура (визначення) |
Популяція мікроорганізмів, що складається з одного виду |
Значення бактеріологічного методу дослідження |
Бактеріологічний (культуральний) метод дослідження полягає в тому, що патологічний матеріал висівають на поживні середовища, виділяють чисту культуру збудника та ідентифікують його. Бактеріологічне дослідження проводять для діагностики інфекційних хвороб, виявлення мікроорганізмів у навколишньому середовищі, визначення виду мікробів |
Принципи виділення чистих культур |
|
Етапи бактеріологічного методу діагностики |
|
Біологічний метод діагностики |
Полягає в інфікуванні тварин для виділення чистої культури мікроорганізмів – збудників захворювання зподальшимвивченням їх вірулентності. Біопробу використовують також для виявлення або визначення властивостей деяких мікробних токсинів |
Біологічний, або експериментальний, метод використовують у тих випадках, коли потрібно |
1. Виділити з патологічного матеріалу збудників, які не ростуть на поживних середовищах. 2. Вивчити деякі властивості виділених мікроорганізмів (некротичну, токсигенну). 3. Виділити чисту культуру збудника з патологічного матеріалу, забрудненого сторонньою мікрофлорою, яка пригнічує збудника на поживних середовищах |
Шляхи інфікування тварин при біологічному методі діагностики |
Нашкірно, внутрішньошкірно, підшкірно, внутрішньом’язово, внутрішньовенно, перорально, інтраназально, внутрішньотрахеально, інтрацеребрально та внутрішньочеревенно |
Основні етапи біологічного методу діагностики інфекційних хвороб |
4. Розтин тварин та подальше вивчення внутрішніх органів у мазках-відбитках шляхом посіву на поживнісередовище тощо. 5. Визначення вірулентності |
Методи визначення вірулентності бактерій та активності бактеріальних токсинів на експериментальних тваринах |
1. Дермонекротична проба. 2. Кератокон׳юнктивальна проба. 3. Проба на визначення вірулентності та токсичності |