- •3513 Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
- •Передмова
- •Cписок скорочень
- •Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об’єктива. Прості методи фарбування препаратів
- •Дeмонстрація
- •1. Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля (рис. 1д), чашка Петрі (рис. 1а), пробірки, градуйовані піпетки, колби
- •2. Предметні та покривні скельця (рис. 1б, в). Скельця з лунками. Спиртівка. Пісочний годинник, олівець “для скла”
- •3. Мікроскоп. Імерсійне масло
- •Правила роботи з імерсійною системою
- •Можливі помилки під час роботи з мікроскопом
- •Догляд за мікроскопом
- •Пояснення до самостійної роботи з теми:
- •Загальна будова навчального світлового мікроскопа
- •2. Будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики збудників інфекційних захворювань
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики інфекційних захворювань»
- •Спори та методи їх виявлення
- •Капсула
- •Класифікація бактерій за кількістю і розташуванням джгутиків
- •Методи виявлення джгутиків у бактерій
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Особливості ультраструктури спірохет,
- •Рикетсій, хламідій, мікоплазм.
- •Сучасні методи мікроскопічного дослідження»
- •Звивисті форми бактерій
- •Загальна схема будови Treponema pallidum
- •4. Основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3. Автоклав
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація»
- •Види та завдання дезінфекції
- •Практична робота студентів
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Фізіологія бактерій.
- •Перший етап бактеріологіного методу діагностики.
- •Біологічний метод діагностики»
- •Метаболізм
- •Конструктивний (анаболізм) Енергетичний (катаболізм)
- •6. Ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ііі – IV етап виділення чистої культури аеробних бактерій. Ферменти бактерій. Антибіотики»
- •8. Облігатні Анаероби. Виділення чистої культури
- •3. Метод Фортнера
- •4. Ріст Cl. Perfingens на середовищі Вільсон-Блера
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «облігатні Анаероби. Виділення чистої культури облігатних анаеробних бактерій»
- •V етап Врахування та аналіз результатів дослідження. Відповідь
- •9. Бактеріофаги. Генетика бактерій
- •Теоретичні питання
- •Практична робота студентів
- •Демонстрація
- •5 . Дослід із виявлення множинної стійкості мікроорганізмів до антибіотиків
- •2 Мл культури реципієнта (f-)
- •1 Мл бульйонної культури реципієнта
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій»
- •Бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій
- •Перевага методу плр – полімеразної ланцюгової реакції для діагностики інфекційних захворювань
- •10. Нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3.1. Замалюйте мікроскопічні препарати.
- •3.2. Бакпечатка для вивчення мікрофлори тіла людини
- •3.3. Біологічні препарати (еубіотики): колібактерин, лактобактерин, біфідумбактерин, біфікол.
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •Дисбактеріоз
- •11. Вчення про інфекцію
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •1. Виявлення гемолітичної властивості бактерій
- •2. Виявлення плазмокоагулазної активності бактерій
- •4. Виявлення лецитовітелазної активності
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •12. Імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •2. Фагоцитоз у новонародженої і дорослої людини
- •3. Визначення бактерицидної активності сироватки крові
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму»
- •Особливості імунної системи
- •13. Антигени
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація Діагностичні препарати: Діагностикуми і антигени
- •Алергени для шкірноалергічних проб
- •Лікувально-профілактичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «антигени»
- •Класифікація антигенів
- •Антигени – сторонні макромолекули
- •Інфекційні
- •14. Адаптивна гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Імунні сироватки (антитоксичні) та імуноглобуліни
- •2. Титрування антитоксичної сироватки методом флокуляції
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації»
- •Набутий (адаптивний) імунітет
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Реакція непрямої гемаглютинації (рнга)
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «серологічні реакції: реакція зв’язування комплементу (рзк), реакції з використанням мічених антитіл та антигенів – іфа, ріф, ріа»
- •16. Адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді»
- •Механізм цитотоксичної дії т-кілера на клітину-мішень
- •17. Оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи»
- •18. Протиінфекційний імунітет
- •Теоретичне питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «протиінфекційний імунітет»
- •Антигенспецифічна імунна відповідь
- •Зв’зок типу імунної відповіді з локалізацією інфекційних агентів
- •19. Патологія імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «патологія імунної системи»
- •Типи алергічних реакцій
- •20. Специфічна профілактика та терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Діагностичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «специфічна профілактика і терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати»
- •Список рекомендованої літератури
- •Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
Класифікація антигенів
Антигени – сторонні макромолекули
Вірусні
білки, глікопротеїни, ліпопротеїни, ферменти
Корпускулярні (цілі клітини)
Пилок рослин
Інфекційні
Соматичні (О-Аг)
Джгутикові (Н-Аг)
Капсульні (К-Аг)
Бактеріальні
14. Адаптивна гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації
Актуальність теми: адаптивна гуморальна імунна відповідь є однією із головних реакцій на введення (потрапляння) антигенів в організм людини або тварини. Адаптивну гуморальну імунну відповідь визначають для оцінки рівня імуногенності антигенів, а кінцевий її результат – антитіла широко використовують в медичній практиці для діагностики, профілактики та лікування ряда інфекційних захворювань.
Мета – знати, з якою метою в медичній практиці використовуються антитіла, та уміти оцінювати результати реакції аглютинації, реакцію преципітації, реакцію нейтралізації.
Теоретичні питання
Адаптивна гуморальна імунна відповідь: визначення, схема, фази. Клітини і гуморальні фактори, які беруть участь в імунній відповіді. Які антигени стимулюють розвиток гуморальної імунної відповіді.
Класи імуноглобулінів(Іg): перелік, властивості, функції, визначення.
Антитіла: визначення, властивості, одержання, практичне використання, моноклональні антитіла.
Антитоксичні сироватки, отримання та використання. Реакція флокуляції.
Реакція нейтралізації, компоненти, принцип методу, мета використання.
Практична робота
Робота 1. Вивчити демонстрацію
Демонстрація
1. Імунні сироватки (антитоксичні) та імуноглобуліни
Антитоксичні сироватки використовуються для специфічної профілактики інфекційних захворювань, збудники яких продукують екзотоксин (дифтерії, правця, ботулізму, газової гангрени), а також при укусі гадюк. При цьому створюється пасивний імунітет.
Антитоксичні сироватки готують шляхом гіперімунізації коней відповідними анатоксинами. Гіперімунізацію проводять шляхом багаторазового введення анатоксину за певними схемами. За титр сироватки беруть кількість антитоксичних одиниць, що містяться в 1 мл. Титрування антитоксичної сироватки проводиться на лабораторних тваринах або в реакції флокуляції in vitro. Якщо титрування проводиться на тваринах, то за 1 антитоксичну одиницю (АО) беруть мінімальний об’єм сироватки в мілілітрах, який нейтралізує певну кількість DLM відповідного токсину. Наприклад, за 1 АО протидифтерійної сироватки беруть мінімальний її об’єм, який нейтралізує – 100 DLM дифтерійного токсину, для морських свинок вагою 250 грамів.
Якщо титрування проводиться в реакції флокуляції, то за 1 АО антитоксичної сироватки беруть її мінімальний об’єм у мілілітрах, який при взаємодії з однією імуногенною (антигенною) одиницею відповідного анатоксину зумовлює (викликає) ініціальну (початкову) флокуляцію.
При досить високому титрі антитіл роблять часткове кровопускання і після згортання крові відділяють сироватку. Отримані антитоксичні сироватки фільтруються через бактеріальні фільтри та підлягають очищенню, концентрації (видаленню із сироватки альбумінів і еуглобулінів із подальшою концентрацією імуноглобулінів). У ряді випадків роблять обробку сироватки сульфатом амонію та протеолітичними ферментами (пепсином). При застосуванні ферментації титр зростає в 5–10 разів, а анафілоктогенні властивості препарату зменшуються. Всі антитільні препарати підлягають контролю. Сироватки повинні містити певний титр антитіл, бути стерильними і непірогенними.
Удосконалення сироваткових препаратів завершується одержанням імунних гамма-глобулінів, які відрізняються від очищених сироваток тим, що в них зведено до мінімуму вміст інших білків.
Гомологічний гамма-глобулін готують із сироватки людей-добровольців, імунізованих проти різних вірусних або бактеріальних інфекцій, або із сироваток крові реконвалісцентів. Гама-глобуліни застосовуються для лікування і профілактики кашлюку, правця, грипу, кору. Для очищення та концентрації імуноглобулінів використовують різні методи: висолювання сульфатом амонію; спиртове осадження за Коні; препаративний електрофорез; ультрафільтрацію через молекулярні сита; іонообмінну хроматографію та інші.
Імуноглобулін із сироватки людей являє собою гомогенний препарат, що рідко викликає у людей алергічні реакції. Гомологічні антитіла швидше надходять у кров і довше в ній зберігаються.
Гетерологічні сироватки (імуноглобуліни) отримують шляхом гіперімунізіції тварин.