- •Лекционный курс
- •Семейство: Flaviviridae.
- •Классическая чума свиней
- •Характеристика возбудителя
- •Эпизоотологические особенности
- •Диагностика
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
- •Дифференциальная диагностика
- •Иммунитет и специфическая профилактика
- •Семейство: Coronaviridae.
- •Инфекционный гастроэнтерит свиней
- •Характеристика возбудителя
- •Диагностика
- •Индикация и идентификация вируса
- •Иммунитет и специфическая профилактика
- •Семейство: Picornaviridae.
- •Характеристика возбудителя
- •Эпизоотологические особенности
- •Диагностика
- •Иммунитет и специфическая профилактика
- •Характеристика возбудителя
- •Эпизоотология
- •Диагностика
- •Иммунитет и специфическая профилактика
- •Семейство: Artеriviridae.
- •Семейство: Asfaviridae.
- •Африканская чума свиней
- •Диагностика
Семейство: Artеriviridae.
Таксономическая структура семейства.
Порядок: Nidovirales
Семейство: Arteriviridae
Род: Arterivirus.
Характеристика вириона. Морфология. Вирионы сферические; диаметр 45-60 нм; состоит из изометрического нуклеокапсида диаметром 25-35 нм, окруженного липидной оболочкой. Спайков (выступов) на поверхности вириона не обнаружено, однако наблюдается определенный поверхностный профиль.
Плавучая плотность в сахарозе 1,13-1,17 г/см3, S20w 214-230S. Активность вирусов снижается при повышении температуры. Вирионы стабильны при хранении при температуре минус 70 оС. Вирус стабилен при значениях рН 6,0-7,5. Артеривирусы инактивируются под воздействием жирорастворителей (эфир, бутанол, хлороформ) и детергентов. Непродолжительное инкубирование в присутствии неионных детергентов, например, 0,01% NP40 или Triton X-100, приводит к эффективному разрушению вирусной оболочки (показано в отношении LDV).
Геном.РНК:1молекула, односпиральная, линейная, позитивная; размер 12,7-15,7 kb. Геномная РНК имеет по 5’-концу кэп-структуру типа I(SHFV)и поли(А)-тракт по 3’-концу.
Протеины.Вирусный нуклеокапсид сформирован одним основным нуклеокапсидным протеином (N, Mr 12-15 х 103). Этот протеин у всех артеривирусов кодируется 3’-концевой ORF. К оболочечным протеинам вириона относятся: негликозилированный, пронизывающий мембрану трижды, интегративный мембранный протеин (М) и мажерный вирусный гликопротеин, кодируемый ORF5 (ORF7 у SHFV), и также имеющий три потенциальных участка пронизывающих мембрану. Протеин М и протеин с ORF5 формируют гетеродимеры за счет дисульфидных связей. Минорный гликопротеин, кодируемый ORF2 относится к интегративным мембранным протеинам I класса. В вирионах также обнаруживаются гомодимеры из протеинов с ORF2. Гликопротеины, кодируемые ORF3 и 4, идентифицированы как минорные вирусные гликопротеины только у PRRSV. Клетки, инфицированные LDV или PRRSV, экспрессируют растворимый, неассоциированный с вирионом ORF3 гликопротеин. SHFV кодирует три дополнительных 3’-ORFs, которые могут быть дубликатами ORFs 2-4.
Артеривирусы кодируют 2 крупных неструктурных полипротеина: протеин ORF1a (Mr 187-260 х 103) и ORF1b (Mr 345-421 х 103), которые разрезаются вирусными протеазами до зрелых протеинов nsp1a, nsp1b (nsp у EAV) и nsp 2-12. Папаино-подобная цистеиновая протеаза (РСР) локализована в nsp1. Полипротеин ORF1а SHFV содержит 3 копии РСР, PRRSV и LDV – по 2 копии, а EAV – одну. Цистеиновая протеаза (СР) с уникальными свойствами локализована в nsp2. Сериновая протеаза (SP), родственная членам семейства 3С-подобных цистеиновых протеаз, локализована в nsp4. Протеаза SP ответственна за разрезание 10 неструктурных протеинов. Nsp9 содержит мотив РНК-зависимой РНК полимеразы, а nsp10 содержит металл-свзывающий мотив и нуклеозид-трифосат-связывающий/РНК-хеликазный мотив.
Другие компоненты вириона.Вирион имеет липидную оболочку клеточного происхождения. Протеины, кодируемые ORFs 2-4 у EAV, LDV и PRRSV, также как ORFs 2-7 у SHFV, содержат предполагаемые сайты N-гликозилирования. Гликозилирование протеина ORF5 (EAV и, вероятно, LDV) может происходить при добавлении различного количества лактозаминных повторов.
Организация генома и репликация.Организация генома и стратегия репликации артеривирусов сходна с таковой других нидовирусов. Вирусные неструктурные (репликазные) полипротеины, кодируемые ORFs 1a и 1b, экспрессируются с геномной РНК и посттрансляционно процессируютя вирусными протеазами. Протеин ORF1b экспрессируется только после переключения рамки считывания. Участок переключения рамки считывания содержит скользящий сиквенс выше псевдоузловой структуры РНК. Гидрофобные домены в ORF1а могут участвовать в ассоциации артеривирусного репликативного комплекса с мембранами. Идентифицировано 4 клеточных протеина, связывающихся с cis-действующим участком по 3’-NTR, необходимых для синтеза позитивных цепей РНК с негативных матриц. Вирусные структурные протеины кодируются с 3’ ORFs и экспрессируются с (блока nested set) 3’- и 5’-котерминальных субгеномных мРНК. Общий 5’-лидер субгеномных мРНК образуется из 5’-конца генома при перемежающейся (прерывистой) транскрипции. Блок комплементарных минус цепей субгеномных РНК также идентифицирован в инфицированных клетках. Хотя с большинства субгеномных РНК, транслируется только 5’-концевая ORF, одна субгеномная РНК (мРНК2 у EAV, PRRSV и LDV; и мРНК4 у SHFV) является бицистронной. Дополнительная бицистронная мРНК обнаружена у SHFV.
Показано, что проникновение PRRSV в клетку происходит путем эндоцитоза (зависимого от низких рН). Артеривирусы реплицируются в цитоплазме инфицированных клеток. Нуклеокапсид почкуется внутрь гладкого эндоплазматического ретикулума и/или везикулы аппарата Гольджи. Высвобождение вирионов из клеток происходит путем экзоцитоза.
Антигенные свойства. Антитела, специфичные гликопротеину ORF5 (EAV, LDV, PRRSV), обладают нейтрализующей активностью. Нейтрализационный домен соответствует эктодомену этого протеина. Моноклональные антитела, специфичные протеину ORF4 (PRRSV), также обладают нейтрализующей активностью. Нейтрализующий эпитоп протеина ORF4 соответствует участку между 39 и 79 аминокислотами. Между артеривирусами перекрестной антигенной реактивности не обнаружено. Показан LDV- и PRRSV-специфичный Т-клеточный ответ.
Биологические особенности. Артеривирусы имеют определенный спектр естественных хозяев. EAV инфицирует лошадей и обезьян, LDV – мышей, PRRSV – свиней, а SHFV – некоторые виды африканских (бабуины, африканская зеленая мартышка, обезьяна patas) и азиатских (макак) обезьян. Артеривирусы передаются горизонтально и вертикально. Горизонтальная передача может осуществляться через респираторный тракт (EAV, PRRSV), с инфицированной спермой (EAV, PRRSV) и через инфицированную кровь или другие жидкости организма (LDV, SHFV). Вертикальная передача (внутриутрбное заражение) характерна для PRRSV. Артеривирусные инфекции могут вызывать остро или бессимптомно протекающие инфекции, а также болезни респираторных органов (PRSSV), аборты (EAV, PRSSV), фатальный полиомиелит (зависимый от вораста) (LDV) или фатальную геморрагическую лихорадку (SHFV). Первичными клетками мишенями для артеривирусов являются макрофаги. LDV может репродуцироваться в вентральных двигательных нейронах некоторых линий имбредных мышей. LDV репродуцируется только в культуре макрофагов мышей, SHFV и PRRSV – в первичных культурах макрофагов (легочных альвеолярных макрофагов макак резус и свиней, соответственно), так же как и в культуре клеток МА-104 (линия клеток почки африканской зеленой мартышки), а EAV репродуцируется в первичных культурах макрофагов и клеток почки лошадей, а так же в BHK, RK-13, Vero и МА-104. Репликация артеривирусов характеризуется формированием в инфицированных клетках спаренных мембран и двухмембранных везикул. При экспресии вирусом вакцины гликопротеина ORF5 индуцируется апоптоз, который не ингибируется Bcl-2. Апоптоз также наблюдается в альвеолярных макрофагах свиней, клетках МА-104 и тестикулярных герминативных клетках, инфицированных PRRSV.
Род: Arterivitus. Типовой вид: Equine arteritis virus (EAV) (Вирус артерита лошадей).
Характерные особенности. Представители рода Arterivirus образуют отдельную филогенетическую группу. Геном кодирует 2 большие 5’ ORFs 1a 1b, которые экспрессируются с геномной РНК. ORF1b экспрессируется только при смещении рамки считывания. 3’ ORFs кодируют структруные протеины и экспрессируются с блока 3’- и 5’-котерминальных субгеномных мРНК. Вирионы содержат 1 мажерный и 1-3 минорных оболочечных гликопротеина. Нуклеокапсид артеривирусов изометрический. Выросты на поверхности вириона относительно мелкие и неразличимые, а вирусные гликопротеины не имеют суперскрученных структур. Артеривирусные полипептиды M и, особенно, N меньше по размеру аналогичных пептидов вирусов семейства Coronaviridae.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Род Arterivirus составляют 4 вида: EAV, LDV, PRRSV и SHFV. Каждый вид представляет отдельную филогенетическую ветвь внутри рода и представлен кластером штаммов. LDV, PRRSV и SHFV более близки друг другу, чем EAV. Размер генома артеривирусов варьирует от 12,7 kb (EAV) до 15,7 kb (SHFV). У PRRSV различают два “подвида” – Американсий и Европейский. Идентичность по аминокислотным сиквенсам полипротеинов ORF 1b Американских (VR2332) и Европейских (LV) PRRSV составляет 75,7%, тогда как идентичность между протеинами ORF 1b PRRSV (LV) и LDV (LDV-P) составляет 55,2%. Аминокилостная идентичность по нуклеокапсидным протеинам EAV (прототипа) и трех других артеривирусов варьирует в пределах 22-33,3%. Вариабельность по длине N-концевого участка ORF 1a среди артеривирусов дает основания пологать, что этот участок может обладать видоспецифическими функциями. Все 4 вида вируса антигенно различны. Каждый вид имеет определенный спектр естественных хозяев, но может инфицировать разные виды.
Виды (4 вида):
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
Equine arteritis virus |
Вирус артерита лошадей |
X53459 |
EAV |
Lactate dehydrogenase-elevating virus |
Вирус подъема лактат-дегидрогеназы |
L13298, U15146 |
LDV |
Porcine respiratory and reproductive syndrome virus |
Вирус респираторно-репродуктивного синдрома Свиней |
U87392, M96262 |
PRRSV |
Simian hemorrhagic fever virus |
Вирус геморрагической лихорадки обезьян |
U63121 |
SHFV |
Сходство с другими таксонами. Представители семейства Arteriviridae имеют организацию генома и стратегию репликации сходные с таковыми представителей семейства Coronaviridae, но геном артеривирусов и сам вирион примерно в два раза меньше, чем у коронавирусов. Артеривирусы и другие нидовирусы имеют в своих полимеразах SDD вместо канонического GDD, и содержат нидовирус-специфичный домен по С-концу протеина ORF 1b. Некоторое сходство в организации генома прослеживается между артеривирусами и вирусами растений семейства Potyviridae.
РЕПРОДУКТИВНЫЙ И РЕСПИРАТОРНЫЙ СИНДРОМ СВИНЕЙ.
Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС, "синее ухо, голубой аборт", эпизоотический поздний аборт свиней) - вирусное контагиозное заболевание главным образом свиноматок, характеризующееся абортами, наличием мертворожденных поросят, преждевременными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями, появлением окрашивания кожи ушей и других органов. С 1987 г. во многих свиноводческих хозяйствах США и Канады регистрируется патология воспроизводства свиней, характеризующаяся поздними абортами, рождением мертвых, нежизнеспособных или уродливых поросят и поражением органов дыхания. РРСС вызывается артеривирусом. Заболевание появилось в конце 1980-х гг. в Северной Америке, затем в Европе. В настоящее время РРСС является эндемичным для многих регионов мира. Болезнь отличается большим разнообразием признаков, определяемых во многом общим состоянием здоровья животного. При интродукции в неинфицированное стадо инфекция причиняет большой экономический ущерб, но скоро переходит в умеренную или даже инаппарантную форму. В эндемичной форме вирус продолжает долгое время циркулировать в стаде. В течение многих недель персистирует виремия. Вирус предрасположен к макрофагам и не размножается в большинстве клеточных линий, отличается чрезвычайной генетической и АГ- вариабельностью. Первоначально это заболевание получило название "таинственная болезнь свиней" В 1991 г. были опубликованы сообщения о появлении аналогичного заболевания свиней в странах Европы. При этом ученым из Центрального ветеринарного института в Нидерландах был выделен новый вирус, который назвали «вирус Лелейстад». Вирус Лелейстад это РНК-содержащий, оболочечный вирус, отнесен к роду артеривирусов. Для исключения разночтения этой болезни в различных странах мира, сессия МЭБ (апрель 1991 г.) и 2-й Международный симпозиум в США (1992 г.) приняли единое название - репродуктивный респираторный синдром свиней (РРСС), или PRRS в латинской транскрипции.
Распространение болезни. В настоящее время можно говорить о панзоотии РРСС, хотя многое еще не известно о ее мировом распространении. Многие страны не могут лабораторно диагностировать болезнь или не хотят сообщать о ее появлении. На американском континенте о болезни сообщали США и Канада. В США существуют четкие статистические данные по болезни. Имеются данные о ее наличии в 19 штатах. Моррисони с сотр сообщили о ретроспективном выявлении 364 стад животных , положительно реагирующих на РРСС на основании серологических исследований только в 7-ми свиноводческих штатах (Айова, Иллинойс, Индиана, Мичиган, Небраска и Северная Каролина). В Канаде сообщения подтверждены серологически в 2-х штатах: Онтарио и Квебек. В Европе наибольшее распространение болезни отмечали в свиноводческом поясе, охватывающем западные земли Германии, Нидерланды и Бельгию. В Бельгии наибольшее количество вспышек болезни регистрировали в апреле 1991 г. В свиноводческих хозяйствах Франции РРСС - новое заболевание, вызываемое у свиней новым вирусом. Проявляется разнообразной симтоматологией и сопровождается абортами, мертворождением и гибелью поросят, а также гриппоподобными проявлениями. Во Франции РРСС регистрировали на 169 племенных фермах в период с ноября 1991 г. по май 1992 г., главным образом, в провинции Бретань. В Англии болезнь появилась в мае 1991 г. и широко распространилась в графствах Хамберсайд и Северном Йоркшире, а в последующем и в Шотландии. Болезнь регистрировалась также в Дании, Испании, Голландии и на о. Мальта обнаружены специфические AT к возбудителю в пробах крови свиней, поступившей в диагностические центры Европы из Италии и Польши.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
Голландским ученым Wensvoort и Terpstra (Центральный ветеринарного института г Лелистад) удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив вирус, названный ими "агент Лелистад", в культурах легочных макрофагов свиней. В настоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, который входит в род артеривирусов.
Морфология и химический состав. Возбудитель болезни - РНК-содержащий вирус размером 45-65 нм. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода артеривирусов (вирус артериита лошадей). Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332), несколько отличаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи.
В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут. Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и проходить через плаценту, заражая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно им-муносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах. Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических AT у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива. Plagemann (1992) предполагает, что вирус РРСС относится к новой группе вирусов, напоминающих тоговирусы, но имеющую положительно закрученную РНК и по структуре сходных с корона- и торовирусами.
Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению рН среды. Оптимум рН от 5 до 7. Benfield et Welson (1992) сообщали, что вирус SIRS, выделенный в США, сохраняет инфекционность в гомогенатах пораженных легких при -70°С в течение 1,5 лет, при +4°С - 1 мес, при 37°С - 2-х сут. При температуре 55°С он инактивируется в течение 45 мин. Friey et.al. (1992) выделили вирус из патматериала, хранившегося в течение 3-х лет в замороженном состоянии.
AT свойства. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие AT к вирусу РРСС с помощью ИФА в течение 12 нед после опороса. Титр AT у свиноматок сопоставляли с титром материнских AT у поросят в возрасте 2 нед. Материнские AT, выявляли у поросят в течение 4-10 нед. ВНА обнаружили через 12 дней после заражения или 18 дней после контакта с больными животными. Максимальных титров они достигали на 40-50-е сутки после заражения и сохранялись до 120 дней (срок наблюдений).
Культивирование. Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят. Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пенициллин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл). Выбор жидкости из легких, содержащей АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие. Суспензию клеток из легких центрифугировали при 1500 обор. - 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь центрифугируют при тех же условиях. Заражение вирусом РРСС проводили через 2-24 ч после 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками. Учет цитотоксического действия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в качестве AT ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8-1:16. Таким образом, АМФ могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях, изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах. Чувствительными к вирусу РРСС являются первичная культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из перевиваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное накопление вируса отмечали при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток/1 мл с использованием фетальной сыворотки и снятия монослоя не позднее 3-4-х сут.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У свиноматок болезнь начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости. В период абортов отмечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела. У отдельных животных наблюдают респираторные нарушения и у 1-5% - голубовато-красное окрашивание кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок периода, близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие через 2-3 нед после обнаружения первых симптомов болезни. По данным английских ученых, пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности, высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по всему телу свиньи. Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают синий цвет. В первые 2 нед болезни аборты могут составлять 60-70%, через 3 нед - 50 и через 18 нед - 10%. В естественных условиях клиника может значительно варьировать от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений. В отдельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности достигает 100%.
При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии установлено, что 37% абортов произошло на 100-112 дни, 49% -на 113-11дни 14% - на 117-120 дни супоросности. Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113-117 дней, то запоздалые опоросы до 120 дней могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем периоде, обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими как парвовирусная или энтеровирусная. Однако, как правило, мумификации плодов при остром течении РРСС не наблюдается. В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залеживание, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель свиноматок не превышает 2%. После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и только у отдельных из них отмечали "послеродовые схватки". Свиноматки повторно приходят в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода. У свиноматок, опоросившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до 100% поросят могут быть мертворожденными Немецкие авторы, обработав большое количество статистических показателей пораженных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30-40% мертворожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят. У мертворожденных поросят наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз, подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, задние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги. При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя 1-1,5 месяца возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некоторое время вновь отмечают аборты. В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.
При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное содержание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску. Слаборазвитые поросята, как правило, гибнут в первые недели жизни. Через 4-6 нед заболевание начинает приобретает хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувствительность к секундарным инфекциям. У отдельных животных отмечали негнойные энцефалиты и миокардиты. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали. В целом патологоанатомические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях. У маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали. У больных животных в США процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии. Нередко болезнь протекала в смешанной форме, одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией.
Экспериментальная инфекция. Terpstra и др.. (1991) проводили опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности. Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х - покраснение кожи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дней супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-и дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из которых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированности). При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела. У 2-х животных на 10-12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков болезни не выявлено. Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через сутки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28-30 тыс/мл и сохранялся в течение 2-3 нед. У подсвинка, находившегося в контакте с зараженными животными, повышение температуры тела отмечено на 18-19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки после совместного содержания. На 5 и 14 день после заражения было убито по одному животному. При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки острой бронхопневмонии. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых изменений не обнаружено. При интраназальном заражении вируссодержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн, отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение Подкожное и внутримышечное введение вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей наступала через 24 ч Вирус № 9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфическое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС, который не вызывал ГА эритроцитов и Гад. У животных, зараженных европейским стандартным шт "Лелистад" вируса РРСС клинических признаков не отмечалось.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ.
С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в декабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране - одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, в потоках воздуха. Предположительно, факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили (если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом).
Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991 г в Великобритании были запрещены. По данным госветслужбы этой страны в настоящее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса возбудителя связаны с передвижением поросят. Вирус может персистировать в заражённых стадах свиней до полугода. Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у отдельных явно инфицированных животных. Отдельные заражённые свиноматки могут быть источником заражения для здоровых животных в течение 99 дней. Английские исследователи считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х мес после прекращения появления явных клинических признаков болезни. Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС племенных ферм свиней. На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят.
В нашей стране в 1991-1993 гг. в ряде хозяйств обнаружены массовые случаи абортов, рождение мёртвых и слабых поросят, респираторные расстройства. В 1993 г. в Голландию были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие AT к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реагирующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положительными, причем большая часть сывороток (72,5%) содержала специфические AT в высоких титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широкой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах. Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими исследователями установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции у инфицированных поросят. Макрофаги играют важную роль в индукции AT образования - они передают агент Т- и В-лимфоцитам. Развитие респираторного синдрома, по-видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидкости. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от молодых (6-8 недель) СПФ-поросят. Успех голландских учёных и объясняется прежде всего тем, что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 и К-6 оказались не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическим и серологическим свойствам. Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА В США для идентификации возбудителя использовали РН, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических AT. Сероконверсия в диагностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му да после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280. Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL. Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балластных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаждением ПЭГ мол м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (7000 мин-1 в течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА. Высокоспецифичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготовления AT диагностикумов для ИФА. Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях. Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы с уверенностью поставить лабораторный диагноз.
В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада. Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118 стад и было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС. При серологическом исследовании ложноположительные реакции, как правило, отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25%. Benfield et. al. (1992) сообщали об использовании монАТ в ИФ при идентификации европейских, американских и канадских штаммов возбудителя РРСС. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагностики РРСС, составлены наборы диагностикумов для выявления РРСС и специфических AT. МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале, так и для определения AT в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ.
При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Исключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз. Характерной особенностью этой болезни является обострение вторичных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркулировать в пораженных стадах свиней. Это ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию. AT к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение года. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профилактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса. Так выдан патент ЕРА 95200877.9 Akzo Nobel (Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин. О механизме развития иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.
Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также средства специфической профилактики. Лабораторная диагностика болезни затруднена прежде всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагностических исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране необходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вывоз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления. Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудованных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок. Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.
Ветеринарно – санитарная оценка продукции в нашей стране не разработана.