Диагностика

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни и резуль­татов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика включает изоляцию вируса из органов погибших, идентификацию его в РН и РИФ в культуре клеток и выявление специфических AT у больных и переболевших животных. В качестве экс­пресс-диагностики используют РИФ для обнаружения вирусного АГ в органах животных.

Выделение вируса. Взятие и подготовка материала. Для исследования в лабораторию направляют тонкий кишечник (тощую и подвздошную кишки с содержимым) и мезентериальные лимфоузлы от поросят в начальной стадии проявления клинических признаков болезни (первые часы диа­реи). Кроме того, целесообразен отбор органов и тканей (кусочков лёгкого, печени, селезён­ки, почек, головного мозга). Патологический материал от трупов, пролежавших более 2 ч после гибели, для исследования не пригоден. Материал необходимо брать от 8-9 больных поросят 3-5 поражённых помётов (по 2-3 поросёнка из помёта). От каждого поросёнка берут пробы массой 10 г. Отрезок кишки длиной 10-12 см перевязывают и берут с содержимым. Пробы патматериала доставляют в лабораторию в плотно закрытых стеклянных флаконах, помещенных в сосуд Дъюара с жидким азотом или в термос с сухим льдом. Для серологи­ческих исследований направляют парные сыворотки крови от свиноматок, в помётах кото­рых болеют новорождённые поросята, взятые с интервалом в 21 день. Вируссодержащий материал сохраняют в активном состоянии в течение нескольких лет при температурах ми­нус 20:-70°С. При -28°С вирус остаётся активным около 3,5 лет. При 4°С он может сохра­ниться в течение 1-го мес. В связи с фоточувствительностью вируса все вируссодержащие материалы следует защищать от действия света. С целью длительного сохранения патологи­ческий материал (фрагменты кишечника) можно замораживать до -30:-70°С и использовать по мере надобности в течение 2-3,5 лет. Для вирусологических исследований оттаиванию подвергают лишь необходимую часть патологического материала. Исходный материал ста­раются постоянно держать в глубоко замороженном состоянии. Упаковка должна надёжно предохранять материал от какого-либо воздействия на него жидкого азота. Для выделения вируса из органов поросят (отдельно паренхиматозных органов и кишечника) готовят 10%-ную суспензию на р-ре Хенкса по общепринятой методике и после проверки её на стериль­ность используют для заражения чувствительной системы (культура клеток, поросята).

Заражение культуры клеток. Выделение вируса проводят на первичных и перевивае­мых линиях клеток поросят (почек, щитовидн.ой и слюнных желез, тестикул). Материалом пробы инокулируют не менее 4-8 пробирок с куль-й клеток. Для исследования методом ИФ заражают культуру клеток, выращенную на стеклышках. Её просматривают в течение 5-7 сут. При отсутствии ЦПД в первом пассаже проводят 5-7 последо­вательных пассажей. Обычно ЦПД вируса наступает через 2-7 пассажей и характеризуется набуханием, утолщением с последующим укорочением и округлением клеток до полного разрушения монослоя. Идентификацию выделенного вируса проводят в РИФ и РН.

Заражение восприимчивых животных. В связи с наличием большого количества штаммов ВИГС, не обладающих ЦПД, биопроба на восприимчивых поросятах - надежный метод выделения вируса. У зараженных животных вирус сравнительно легко удается выде­лить из фекалий, одн.ако в наивысших концентрациях он содержится в слизистых оболочках тонкого кишечника, особенно двенадцатиперстной и тощей кишок. Уже через 24-72 ч после клинического проявления болезни титры вируса в этих тканях достигают 10⁶ -10⁷ ИД₅₀ /г. По­этому, если необходимо выделить вирус, поросят убивают через 24 ч после появления диа­реи и полученные от них материалы (содержимое и соскобы слизистой тонкого кишечника) подвергают вирусологическому исследованию. В крови и почках поросят вирус об­наруживают через 24-48 ч после заражения, но титры его низкие–10¹ -10² ИДдо/г, изредка концентрация вируса в почечной ткани может достигать 10⁵ -10⁶ ИД₅₀/г.

У новорожденных поросят, зараженных интраназально, через 2 ч после заражения вирус может быть обнаружен в ткани легких (титры до 10⁴ ИД₅₀/г), а у поросят, зараженных ин­траназально в 6-дн. возрасте, вирус может быть обнаружен в слизистой оболочке носа (титры до 10⁴ ИД₅₀/г). Для подтверждения диагноза важно также исследование в РН парных сывороток, 1-ую из них берут на 3-5-й день после начала болезни, а 2-ую (от выживших жи­вотных) - через 1-2 нед..

Для биопробы можно использовать супоросных свиноматок за 3-5 дн. до опороса. Сви­номатку заражают 10%-ной суспензией, приготовленной из пораженных стенок тонкого ки­шечника вынужденно убитых больных поросят, или вируссодержащей культуральной жид­костью. Исследуемый материал вводят per os в количестве 10 мл. Контролем служит 2-я су­поросная свиноматка. Биопробу считают положительной, если через 24 ч (реже через 48 ч) поросята, родившиеся от зараженной свиноматки, заболевают с клиникой ИГС. В сомни­тельных случаях проводят исследования органов от вынужденно убитых в агональном со­стоянии поросят подопытной группы методами РИФ и РН.