25. Микробиологический анализ как основа лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Принципы и основные направления. Культурально-зависимые и культуральнонезависимые методы диагностики.

Лабораторная диагностика болезней чело­века основана на обнаружении в организ­ме больного микроба, вызвавшего болезнь, его компонентов (антигенов) или продук­тов его жизнедеятельности (токсинов и т. п.), или изменений в параметрах гомеостаза под действием этого микроба. Например формулы крови, биохимического состава крови и т. д. Наиболее важное место в лабораторной диагностике инфекционных болезней зани­мает специфическая микробиологическая диагностика, которую проводят в бактерио­логической, вирусологической, иммунологи­ческой и других лабораториях.

Принципы М.А.

1. Взятие материала на исследование (биологические жидкости, соскоб, другой патологический материал). Выбор определяется патогенезом и клинической картиной.

2. Использование современных методов исследования, включая микроскопический, культуральный, серологический, биологический, а также аллергические пробы и молекулярно-генетические методы для получения необходимой информации о микроорганизме и его патогенности.

3. Клиническая интерпретация полученных результатов лабораторных исследований.

Основные направления: 1. Подтверждение клинического диагноза; 2. Слежение за эпидемиологически опасными ситуациями;

Методы идентификации МО:

Культуральный	Культурально-зависимый	Культурально-независимый
1)Бактериологический 2)Вирусологический	1) Масс – спектрометрия 2) Автоматический бактериологический экспресс-анализ. Масс-спектрометрия – аналитический метод измерения массы молекул анализируемого вещества. Масс-спектрометр – инструмент, способный в условиях вакуума разделять находящиеся в газовой фазе заряженные частицы вещества, согласно отношению их массы к заряду.	1) Методы амплификации нуклеиновых кислот, в том числе ПЦР, ИФА ПЦР - метод многократного увеличения ( амплификации) числа копий любого фрагмента нуклеиновой кислоты. С одной молекулы нуклеиновой кислоты синтезируются миллион копий. Это метод имитирует естественную репликацию ДНК.

Методы лабораторной диагностики инфекционных агентов многочисленны, к основным можно отнести следующие:

1. Микроскопический - с использованием приборов для микроскопии. Определяют форму, размеры, взаиморасположение микроорганизмов, их структуру, способность окрашиваться определенными красителями.

2. Микробиологический или культуральный (бактериологический и вирусологический) - выделение чистой культуры и ее идентификация.

3. Биологический - заражение лабораторных животных с воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях (биопроба).

4. Иммунологический (варианты - серологический, аллергологический) - используется для выявления антигенов возбудителя или антител к ним.

26. Культуральный метод (бактериологический анализ) в диагностике инфекционных заболеваний. Правила забора материала и основные этапы анализа. Принципы идентификации бактерий.

Бактериологический метод исследования (БЛМИ) – метод, основанный на выделении чистых культур бактерий с помощью культивирования на питательных средах и их идентификации до вида на основании изучения морфологических, культуральных, биохимических и других характеристик микроорганизмов.

Правила забора материала:

• Брать материал до начала антибактериальной терапии

• Соблюдать асептику, избегая контаминации пробы посторонней микрофлорой кожи пациента и окружающей среды.

• Использовать стерильную лабораторную посуду

• Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования.

• Транспортировку нативного материала в лабораторию необходимо производить в максимально короткие сроки (1,5 – 2 часа) без переохлаждения

Основные этапы анализа

1. Забор материала:

а) выбор материала определяется клинической картиной:

- при заболеваниях верхних дыхательных путей – слизь из носа и зева,

мокрота, ликвор;

- при заболеваниях желудочно-кишечного тракта – испражнения,

промывные воды, рвотные массы;

- при генерализованных формах – кровь;

б) материал берут до начала лечения;

в) в разные стадии заболевания берут разный материал

2. Транспортировка:

а) необходимы специальные транспортные среды,

б) важно соблюдать условия транспортировки

3. Посев материала на плотные питательные среды для получения изолированных колоний

4. Изучение культуральных признаков

5. Изучение морфологических и тинкториальных(отношение к окраске)признаков= приготовление мазка и окраска по Граму

6. Выделение чистой культуры и накопление биомассы= посев на скошенный столбик элективной питательной среды

7. Проверка чистоты культуры= мазок, окраска по Граму

8. Идентификация выделенной чистой культуры= изучение биохимических и серологических свойств бактерий.

Принципы идентификации бактерий:

• морфологические (особенности и индивидуальные свойства строения клеток);

• культуральные (питание, дыхание, условия роста бактериальной культуры);

• ферментативные (биохимические свойства, связанные со спо­собностью бактериаль­ной культуры расщеплять сахара, белки, разрушать эритроциты);

• антигенные (свойства, связанные с особенностями антигенов чистой бактериальной культуры).