medvir_xxvii_2_2013

70	Медицинскаявирусология.томXXVII(2)

Рис. 9. Иммуно­ гистохимическое выявление HCVинфекции с помощью антител к белку HCV NS3 пероксидазным методом. х 400

Fig. 9. Immunohistochemical detection of HCV infection using antibodies to HCV NS3 protein by peroxidase method. x 400

В период, когда иммунная система начинает контролироватьвируснуюинфекциюивсыворотке крови перестаёт обнаруживаться HCV RNA, происходитнакоплениевирусныхчастицнепосредственно в клетках печени.

Несмотря на утверждение многих авторов о том, что синтез и образование вирусных частиц происходит в цистернах шероховатой эндоплазматической сети (ЭПС) с последующим участием аппарата Гольджи, мы никогда не наблюдали в этих образованиях вирионов. Скорее всего, в ЭПС осуществляется лишь синтез всех молекулярных компонентов, часть из которых подвергается гликозилированию в аппарате Гольджи, а после выхода в цитоплазму происходит процесс самосборки крупномолекулярного комплекса, каковым является вирус. Такой порядок больше соответствует наблюдаемой картине, хотя и не укладывается в многочисленные схемы репликации, в соответствии с которыми вирионы должны покидать клетку.

Интенсивно происходящий процесс репликации вируса приводит к постепенному истощению метаболических, пластических и энергетических ресурсов, необходимых для поддержания целостности клетки за счет постоянно текущего процесса внутриклеточной регенерации. В результате клетка переходит на использование внутриклеточных ресурсов путем лизосомального гидролиза мембранных компонентов и вовлечение части мономеров в синтез новых вирусных частиц. Однако лизосомальный гидролиз является неполным. В результате образуются многочисленные вторичные лизосомы (цитосегресомы) (рис.8а,б). Проис-

colloid gold (Fig. 11b).

Viral particles accumulate directly in the liver cells during the period when the immune system starts to control the virus infection and HCV RNA disappears from the blood.

Despite numerous reports that the synthesis and assembly of viral particles occur in cisterns of the rough endoplasmic reticulum (RER) and Golgi complex, we never observed virions in these structures. It seemsmorelikelythatRERisonly thesiteofsynthesis of all molecular components, some of them are then glycosylated in the Golgi complex, while self-assembly of the virus occurs in the cytoplasm. This sequence of events better corresponds to the observed picture, althoughdoesnotfitintonumerousreplicationschemes describing the process of virion release from the cells.

Intensivereplicationofthevirusleadstoexhaustion of metabolic, plastic, and energetic resources essential for incessant intracellular regeneration processes aimed at the maintenance of cell integrity and forces the cells to utilize intracellular resources via lysosomal hydrolysis of membrane components and inclusion of some monomers into the synthesis of new viral particles. However, lysosomal hydrolysis is incomplete and results in the formation of numerous secondary lysosomes (cytosegresomes) (Fig. 8a,b). This leads to gradual degradation of intracellular organelles, their

medical virology. vol. XXVII (2)

71

ходит постепенная деградация внутриклеточных органелл, их исчезновение, то есть осуществляется цитопатия и превращение клетки в мембранный мешок, заполненный вирионами и остатками органелл.Инымисловами,гапатоцитпревращается в крупную светлую клетку с четкими контурами

– матово-стекловидную (рис. 12).

disappearance, i.e. cytopathy and transformation of the cell into a membrane pouch filled with virions and organelle remnants, in other words, the hepatocyte turns into a large light cells with clear-cut contours («hyaline» cell) (Fig. 12).

When discussing the major steps of the develop-

Рис. 10. Множественные вирионы в гепатоцитах больного ХГС на начальных этапах формирования цитопатической реакции. Видны множественные цитосегресомы и признаки перицеллюлярного фиброза. х 4 000.

Fig. 10. Numerous virions in hepatocytes of a patient with CHC at the initial stages of cytopathic reaction. numerous cytosegresomes and signs of pericellular fibrosis are seen. x 4 000

Рассмотрев основные моменты развития патологии печени при хронической моноинфекции HCV, нельзя не отметить тот факт, что в настоящее время в большинстве случаев ХГ мы имеем дело не с моноинфекцией, а с наличием в организме и в печени коинфекции несколькими гепатотропными вирусами. Наиболее изучены в фундаментальном и клиническом аспекте коинфекция HCV c HBV и HIV, поскольку они постоянно контролируются не только в клинике, но и эпидемиологической службой. Но не следует забывать, что другие гепатотропные вирусы (HGV и TTV) могут приводить к патоморфологическим нарушениям. Показано, что TT like mini virus, цитомегаловирус и другие вирусы герпетической группы, считающиеся лимфотропными в ряде случаев проявляют гепатотропность (Морозов и др., 2012). Последствия такой инфекции пока мало изучены, но требуют постоянного внимания.

Таким образом, на примере ХГС очередной раз подтверждено, что биопсия печени до сих пор остаётся «золотым стандартом» в диагностике вирусных поражений печени, несмотря на то, что при одиночной биопсии невозможно оценить патологические процессы во всем органе.

Результаты, полученные при изучении биопсийного материала, в большинстве случаев позволя-

mentofliverpathologyinchronicHCVmonoinfection, we have to note that in most CH cases we deal with not monoinfection, but with the presence of several hepatotropic viruses in the body and in the liver. Fundamental and clinical aspects of HCV + HBC and HCV + HIV co-infections are best studied, because they are thoroughly controlled not only in hospitals, but also by epidemiological service. It should be remembered that other hepatotropic viruses (HGV and TTV) could induce pathomorphological alterations. It has been demonstrated that lymphotropic viruses such as TTlike mini virus, cytomegalovirus, and other herpetic viruses, sometimes exhibit hepatotropic properties (Morozovetal.,2012).Theconsequencesofthisinfection are poorly studied, but require close attention.

Thus, liver biopsy remains a golden standard for the diagnosis of virus-induced liver injuries, exemplified here by CHC, despite impossibility of evaluation of the pathological processes in the body from single biopsy data.

The results obtained from the analysis of biopsy specimens in the majority of cases provide informa-

72	Медицинскаявирусология.томXXVII(2)

	А				Б

Рис. 11. Электронно-микроскопическая верификация вирионов HCV а) Вид вирионов HCV (стрелка)

в трансмисси­онном микроскопе. х 30 000. б) Иммуноцитохимическая реакция с использованием антител к белку HCV NS3 и комплекса Protein A- Colloidal Gold 15 нм. х 30 000

Fig. 11. Electron microscopic verification of virions in CHC. a) HCV virions (arrow) in transmission microscope. x 30 000. Immunohistochemical reaction with antibodies to HCV NS3 protein and a conjugate Protein A – Colloidal Gold 15 nm. x 30 000

Рис. 12. Часть цитоплазмы матовостекловидного гепатоцита в состоянии выраженной цитопатии

(пояснения в тексте).

х 8 000

Fig. 12. A fragment of cytoplasm of a Graund glass hepatocyte in the state of pronounced cytopathy (see text for explanation). x 8 000

medical virology. vol. XXVII (2)

73

ют установить этиологию заболевания, ранние этапыфиброзированияоргана,выраженностьдиспластических изменений гепатоцитов, стадию патологического процесса и степень активности, а также при необходимости оценить эффективность противовируснойтерапиивдинамикеприобязательном контроле всего спектра клинико-лабораторных данных.

tion on the etiology of the disease, early stages of liver fibrosis, severity of dysplastic changes in hepatocytes, stage and activity of the pathological process, and allow controlling the efficiency of antiviral therapy in dynamics in addition to obligatory monitoring of the whole spectrum of clinical and laboratory parameters.

rEFERENCES / Литература

1.ДамяновБ.Д.Ультраструктурныеизмененияпечениприхроническихгепатитах.Автореф.дис.канд. мед. наук, М. – 1971. – 26 с.

2.Морозов И.А., Ильченко Л.Ю., Громова Н.И., ФёдоровИ.Г.,ГордейчукИ.В.,КняженцеваА.К.,Зверкова Е.А., Михайлов М.И. Проблемы скрытой инфекции, вызванной вирусом гепатита В // РЖГГК.

–2012. – Т.22. – №4. – С.58–66.

3.BachN.,ThungS.N.,SchaffnerF.Thehistologicalfeatures of chronic hepatitis C and autoimmune chronic hepatitis: a comparative analysis // Hepatol. – 1992.

–Vol. 15. – P. 572–577.

4.BedossaP.,PoynardT.Analgorithmforthegradingof activityinchronichepatitisC.TheMETAVIRCooperative Study Group // Hepatol. – 1996. – Vol. 24. – P. 289–293.

5.Bedossa P. Fibrosis in chronic hepatitis C infection: mechanisms and cofactors // Gastroenterol. Clin. Biol. – 2002. – Vol. 2. – P. 163–167.

6.Czaja A.J., Carpenter H.A. Optimizing diagnosis from the medical liver biopsy // Clin. Gastroenterol. Hepatol. – 2007. – Vol. 5. – P. 898–907.

7.Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H., Manns M., Scheuer P.J. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading and staging // Hepatol. – 1994. – Vol. 19. – P. 1513–1520.

8.Hourigan L.F., Macdonald G.A., Purdie D., Whitehall V.H., Shorthouse C., Clouston A., Powell E.E. Fibrosis in chronic hepatitis C correlates significantly with body mass index and steatosis // Hepatol. – 1999. – Vol. 29. – P. 1215–1219.

9.Garcia A.J. Role of liver biopsy in chronic hepatitis C // Rev. Gastroenterol. Mex. – 2002. – Vol. 67. – P. 27–28.

10.Ishak K.G., Baptista A., Bianchi L., Callea F., De Groote J., Gudat F., Denk H., Desmet V., Korb G.,

MacSween R.N. Histological grading and stading of chronic hepatitis // Hepatol. – 1995. – Vol. 22. – P. 696–699.

11.Knodell R.G., Ishak K.G., Black W.C., Chen T.S., Craig R., Kaplowitz N., Kiernan T.W., Wollman J. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis // Hepatol. – 1981. – Vol. 1.

–P. 431–435.

12.Kuntz E., Kuntz H-D. Hepatology. Principles and Prac- tice.–SpringerMedizinVerlagHeidelberg,2006.–р. 825.

13.Lefkowitch J.H., Schiff T.R., Davis G.L., Perrillo R.P., Lindsay K., Bodenheimer H.C.Jr, Balart L.A., Ortego T.J., Payne J., Dienstag J.L Pathological diagnosis of chronic hepatitis C: a multicenter comparative study with chronic hepatitis B // Gastroenterol. – 1993. – Vol. 104. – P. 595–603.

14.MacSween′s Pathology of the liver, 5th edition / ed. by A.D. Burt, B.C. Portmann, L.D. Ferrell, Elsevier, 2007. – р. 973.

15.Scheuer P.J., Standish R.A., Dhillon A.P. Scoring of chronic hepatitis // Clin. Liver. Dis. // 2002. – Vol. 6.

–P. 335–347.

16.Sherlok’s Diseases of the Liver and Biliary System. / ed. by J.S. Dooley, A.S.F. Look, A.K. Burroughs, E. J. Heathcote. Twelfth edition, 2011. WILEY-BLACK- WELL. – p. 771.

17.Shiff’s Diseases of the Liver / ed. by E.R. Shiff, W.C. Maddrey M.F. Sorrell. Eleventh edition, 2012. WILEYBLACKWELL. – p. 1250.

18.Wanless I.R., Nakashima E., Sherman M. Regression of human cirrhosis. Morphologic features and the genesis of incomplete septal cirrhosis. // Arch Pathol Lab Med. 2000.- Vol.124(11). – p. 1599–607.

74	Медицинскаявирусология.томXXVII(2)

Серологические маркеры инфицирования вирусами гепатитов среди условно здорового населения

Республики Тыва

1,3Т.В. Кожанова, 1Л.Ю. Ильченко, 1В.В. Клушкина, 1В.С. Кичатова, 1Н. В. Соболева,

2А.А. Сарыглар, 1И.В. Гордейчук, 1О.В. Исаева,1К.К. Кюрегян, 1М.И. Михайлов

1ФГБУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН; 2ГБУЗ «Инфекционная больница», Кызыл, Республика Тыва

3 НПЦ медпомощи детям с пороками развития черепно-лицевой области и врожденными заболеваниями нервной системы ДЗ, Москва

Резюме Цель. Оценить распространенность серологиче-

ских маркеров инфицирования вирусами HAV, HEV, HBV, HDV и HCV во всех возрастных группах условно здорового населения Республики Тыва – региона, где на протяжении многих лет регистрируются одни из самых высоких в России показатели заболеваемости гепатитами А и В.

Материалы и методы. Исследованы образцы сывороток крови, полученные от условно здорового населения Республики Тыва (N=1086), от новорожденных до лиц старше 60 лет. СерологическиемаркерыинфицированияHAV,HEV, HBV, HDV и HCV (anti-HAV IgG, anti-HEV IgG/IgM, HB- sAg,anti-HBc,HBeAg,anti-HDV,anti-HCV)определяли методом иммуноферментного анализа.

Результаты.Anti-HAVобнаруженыв55,7%(49/88)

случаев у детей первого года жизни (материнские антитела). В возрастной группе 1-4 года выявлен самый низкий уровень anti-HAV (28%; 28/100).

Рост показателя серопозитивности к HAV отмечен в группе детей 5-9 лет (42%; 42/100) и достигает максимального значения среди лиц старше 20 лет

(98%; 98/100). Общая частота выявления anti-HEV IgG составила 5,3% (54/1011), при этом наибольший показатель был среди лиц старше 60 лет (15,4%; 19/123).HBsAgбылопределенв7,7%(84/1086),antiHBc – в 47,8% (519/1086) и HBeAg – в 0,3% (3/1086)

случаях. Anti-HDV среди HBsAg-положительных лиц из группы «условно» здорового населения составила 32,1% (27/84). Среди детей до 9 лет не быловыявленониодногообразцасывороткикрови с наличием anti-HDV. Anti-HCV были определены в

Serologic markers of infection with hepatitis viruses in conditionally

healthy population of a region with high hepatitis morbidity

1,3T.V. Kozhanova, 1L.Y. Ilchenko, 1V.V. Klushkina,

1V.S. Kichatova, 1N.V. Soboleva, 2A.A. Sargylar,

1I.V. Gordeychuk, 1V.V. Isaeva, 1E.Y. Malinnikova,

1K.K. Kyuregyan, 1M.I. Mikhailov

1Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides.

2SBUI«InfectiousDiseasesHospital»,Kyzyl,Republicof Tyva

3SMC of medical care for children with craniofacial malformations and congenital diseases of nervous system DH, Moscow

Abstract

The aim of the study was to assess the prevalence of serologic markers of HAV, HEV, HBV, HDV and HCV infections in all age groups of conditionally healthy populationofRepublicTyva,aregionwithsomeofthe highestinRussiahepatitisAandBmorbidityratesregistered for many years.

Materialandmethods.Serumsamplesfromconditionally healthy population of Republic Tyva (N=1086) aged from <1 to >60 were tested for serological mark- ersofHAV,HEV,HBV,HDVandHCV(anti-HAVIgG,anti- HEV IgG/IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HDV, antiHCV) using ELISA.

Results.Anti-HAVweredetectedin55,7%(49/88) children under 1 year old (maternal antibodies). Age group 1–4 had the lowest anti-HAV levels (28%; 28/100). Seropositivity rates were increased in age group 5–9 (42%; 42/100) and the highest rates were observed in age group >20 (98%; 98/100). Cumulative rate of anti-HEV IgG seropositivity was 5,3% (54/1011) peaking in age group >60 (15,4%; 19/123). HBsAg was detected in 7,7% (84/1086), anti-HBc – in 47,8% (519/1086) and HBeAg – in 0,3% (3/1086). Anti-HDV prevalence in HBsAg-positive samples obtained from conditionally healthy population was 32,1% (27/84). Among children under

medical virology. vol. XXVII (2)

75

4,5% (41/910) случаях, при этом не было выявлено ниодногослучаякоинфекцииHCVиHBV.

Заключение. Полученные нами данные свидетельствуютовысокомуровнеинфицирования HAV, HEV, HBV, HDV среди условно здорового населения РТ, что указывает на необходимость расширения скрининговых программ в данном регионе для усовершенствования диагностики вирусных гепатитов и надзора за этими инфекциями.

Ключевые слова. Вирус гепатита А, вирус гепатита Е, вирус гепатита В, вирус гепатита С, виру гепатита D, серологические маркеры инфицирования

Введение

Изменение в последние десятилетия эпидемиологии вирусных гепатитов, которое проявилось в резком увеличении регистрации хронических форм инфекции, все более частым формированием гепатокарциномы в исходе цирроза печени (4- 6% случаев) требует проведения углублённых исследований с целью совершенствования системы эпидемиологического надзора за гепатотропными инфекциями (Шахгильдян и др., 2003; Покровский и др., 2011).

Наиболее важной характеристикой эпидемического процесса вирусных гепатитов является распространенность маркеров инфицирования вирусами в общей популяции. Вирусные гепатиты способны длительное время протекать бессимптомно и,следовательно,ускользатьотрегистрацииинадзора.Поэтомуобъективныеданныеонагрузкеэтих инфекций на популяцию можно получить только при проведении скрининговых исследований в репрезентативных группах населения. Оптимальной стратегиейдлявыполнениятакогородаисследований является выявление серологических маркеров (вирусныхантигеновиантителкним)всыворотках условно здорового населения, поскольку данный подход позволяет определять как распространенность инфекции в настоящий момент времени, так идолюлицнаданнойтерритории, сэтойинфекцией встретившихся на протяжении жизни.

Республика Тыва (РТ) – регион РФ, в котором на протяжениипоследнихлетсохраняютсяодниизсамых высоких в РФ показателей заболеваемости вирусными гепатитами А (ГА), В (ГВ) и дельта (ГD). РТ входит в состав Сибирского Федерального округа, расположена в центре Азии на юге Восточной Сибири, площадь 168 600 км². Столица республики

– г. Кызыл. РТ является географически уникальным регионом Российской Федерации (РФ) со своими разнообразнымиприроднымиресурсамииклиматом. На 01.01.2013 г. численность населения Республики составила 310 460 человек, доля городского

9 years old there were no anti-HDV-positive cases. Anti-HCV were detected in 4,5% (41/910) with no cases of HCV/HBV co-infection.

Conclusion. Our data show high incidence of HAV, HEV, HBV and HDV infections in conditionally healthy populationofRepublicTyva,emphasizingtheneedfor widespread screening programs in this region aimed towards improvement of diagnostics and surveillance of viral hepatitis.

Keywords.hepatitisAvirus,hepatitisEvirus,hepatitis B virus, hepatitis C virus, hepatitis D virus, serologic markers of infection

Introduction

Changesinepidemiologyofviralhepatitisobserved during recent decade, including sharp increase in the incidence of chronic forms of infections and increased frequencyofhepatocellularcarcinomaastheoutcome of liver cirrhosis (4–6% of cases), determine the need forfurtherstudiesaimedtowardsimprovementofthe system of epidemiological surveillance of hepatitis infections (Shakhgildian et al., 2003; Pokrovskiy et al., 2011)

The most important characteristic of epidemic process of viral hepatitis is the incidence of serologic markers of infections in general population. Viral hepatitiscanbeasymptomaticforalongperiod,therefore escaping surveillance, therefore objective data on the infection burden in a population can only be obtained in screening studies in representative groups. Screening for serologic markers of infections (viral antigens andcorrespondingantibodies)inconditionallyhealthy population is in such cases the optimal strategy which allowstodeterminebothcurrentprevalenceoftheinfectionongiventerritoryandtheproportionofpeople who had been infected during lifetime.

Republic Tyva (RT) is a region of Russian Federation with some of the highest hepatitis A (HA), B (HB) and Delta (HD) morbidity rates in recent years. RT is a part of Siberian Federal district situated in the middle of Asia — South of Eastern Siberia covering 168 600 km². The capital of the republic is Kyzyl city. RT is a geographically unique region of Russia with various natural resources and climate. On January, 1 2013 the population of the republic was 310 460 people, with

76	Медицинскаявирусология.томXXVII(2)

населения – 53,9 %. На территории РТ проживает более 40 национальностей. Основной националь- ныйсостав:тувинцы–64,3%,русские–32%,другие национальности–3,7%.Социально-экономический статус этого региона ниже по сравнению с другими территориями РФ.

Принимая во внимание высокие показатели заболеваемости вирусными гепатитами в РТ, целью данного исследования являлось определение частоты выявления серологических маркеров инфицирования вирусами ГА, ГВ, ГD, а также гепатита С (ГС)игепатитаЕ(ГЕ)средиусловноздоровогонаселения данного региона.

Цель исследования

Оценить распространенность серологических маркеров инфицирования вирусами HAV, HEV, HBV, HDV и HCV во всех возрастных группах условно здорового населения Республики Тыва.

Материалы и методы

Исследованыобразцысыворотоккрови,полученныеотусловноздоровогонаселенияРТ(N=1086),от новорожденных до лиц старше 60 лет. Все обследованные были разделены на следующие возрастные группы: 0-9 лет, 10-14 лет, 15-19 лет, 20-29 лет, 3039 лет, 40-49 лет, 50-59 лет и старше 60 лет, каждая группа включала около 100 человек. Соотношение мужчин и женщин составило 1:1,8 (35,5%, 386/1086 и 64,5%, 700/1086 соответственно). От всех пациентов было получено информированное согласие на проведениеисследования.

При сборе образцов сывороток крови от условно здорового населения каждым обследуемым заполнялась анкета, которая включала демографические данные (возраст, пол, место рождения), характеристику социального статуса (образование, род деятельности); место, условие проживания, источник водоснабжения; данные о наличии перенесенногоГА,острогоГВ(ОГВ)иГС(ОГС),вакцинациипротив ГА и ГВ; сведения о факторах риска инфицированияHBVиHDV(хирургическиевмешательства,переливаниекровииеекомпонентов,нанесениетатуировок,пирсинг,стоматологическаяпомощьидр.).

Серологические маркеры инфицирования HAV, HEV, HBV, HDV и HCV (anti-HAV IgG, anti-HEV IgG/IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HDV, anti-HCV) опреде-

ляли методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем в соответствии с инструк-

цией производителя: «Monolisa Total Anti-HAV Plus» (Bio-Rad,Франция),«ДС-ИФА-АНТИ-HEV-G»,ДС-ИФА- АНТИ-HEV-M», «ДС-ИФА-HBsAg-0,01»; «ДС-ИФА- HBsAg-0,01-подтверждающая», для подтверждения в реакции нейтрализации позитивных результатов выявления HBsAg; «ДС-ИФА-анти-HBс»; «ДС-ИФА- HBeAg»; ДС-ИФА-анти-HDV»; ДС-ИФА-анти-HCV»

53,9%livingincities.RTisinhabitedbyover40nationalities. General nationality composition is: 64,3% Tyvinians, 32% Russians and 3,7% of other nationalities. Socioeconomic development of this region is below the average in Russia.

Taking into account high morbidity rates of viral hepatitis in RT the aim of the study was to assess the incidence of serologic markers of HAV, HBV, HDV and also HCV and HEV infections in conditionally healthy population of this region.

Aim of the study

Assessment of the incidence of serologic markers of HAV, HEV, HBV, HDV and HCV infections in all age groups of conditionally healthy population of Republic Tyva.

Materials and methods

Serum samples from conditionally healthy population of Republic Tyva (N=1086) from newborns to >60 were tested. All tested subjects were assigned to 8 age groups: 0–9, 10–14 , 15–19, 20–29 , 30–39, 40–49, 50–59 and over 60, with each group including ≈100 people. Men to women ratio was 1:1,8 (35,5%, 386/1086 and 64,5%, 700/1086, correspondingly). Informed consent for participation in the study was obtained from all tested subjects.

While obtaining serum samples from conditionally healthy population of RT, questionnaires were filled that included demographic data (age, gender, place of birth), characteristic of social status (education, employment), address, habitation conditions, source of drinking water, information about past HA, acute HB, HC, vaccination against HBV and HCV, risk factors of HBV and HDV infection (surgeries, blood transfusions, presence of tattoos, piercing, dental care etc.).

Serologic markers of HAV, HEV, HBV, HDV and HCV (anti-HAV IgG, anti-HEV IgG/IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HDV, anti-HCV) infections were tested using commercially available ELISA kits «Monolisa Total Anti-HAV Plus» (Bio-Rad, France), «DS-IFA-ANTI-HEV- G», DS-IFA-ANTI-HEV-M», «DS-IFA-HBsAg-0,01»; «DS- IFA-HBsAg-0,01-confirmation», for confirmation of positive HBsAg results in neutralization reaction; «DS- IFA-anti-HBс»; «DS-IFA-HBeAg»; DS-IFA-anti-HDV»; DS-IFA-anti-HCV» (SMU «Diagnostic systems», Nizhniy

medical virology. vol. XXVII (2)

77

(НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород). Показатели anti-HAV IgG имели количественную характеристику (МЕ/л). Для оценки постинфекционного иммунитета учитывались критерии про- тективностиanti-HAV:от20иболееМЕ/л.

Анализ полученных результатов проводили с помощью стандартной программы EXCEL 2010 и программыстатистическойобработкиданныхGraphPad Prism4.Обработкаданныхвключалавыявлениедостоверности различий средних значений показателей в сравниваемых группах с использованием критерияФишера(различияоценивалиськакдостовер- ныепривероятности95%–p<0,05).

Результаты исследования и обсуждение

Серологические маркеры инфицирования вирусами энтеральных гепатитов (HAV и HEV).

В настоящее время проблема ГА как социальнозначимойинфекции,остаетсяактуальнойдляздравоохранения РТ. Этот регион всегда занимал лидирующее положение в России по уровню заболеваемости ГА. В 2010 г. этот показатель составил 451,6, а в России 12,3 на 100 тыс. населения, в 2011 г. – 146,1 и 4,26, соответственно (Данные ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзор»).

Существенным в понимании эпидемического процесса ГА является и социально-экономический статус региона. К наиболее уязвимой части населенияотносятсялица,проживающиевсельскойместности и потребляющие воду из открытых источников.Однаконеявляютсяисключениемигородские жители, использующие воду из централизованных источников (водопровод). Отсутствие надлежаще- госанитарно-эпидемиологическогоконтролязасо- стоянием системы канализационного обеспечения населения может привести к возникновению вспышечного характера подъема заболеваемости ГА.

Основной задачей в борьбе с этой инфекцией является выработка адекватной тактики вакцинопрофилактики ГА в условиях современной эпидемической ситуации, что невозможно без углублённого изучения возрастной иммунологической структуры населения к HAV, позволяющей количественно охарактеризовать группы восприимчивых лиц на конкретной территории.

Эпидемиология ГЕ в последнее десятилетие претерпела ряд существенных изменений: появление эндемичных по данной инфекции территорий (Европа,Япония,СевернаяАмерика)ирегистрация внихавтохтонныхслучаев;подтверждениезоонознойприродыГЕ;существованиехроническихформ с длительной персистенцией вируса (более 6 месяцев). В РФ вероятность завоза HEV определяется высоким уровнем миграционных процессов, увеличением потока туристов из гиперэндемичных по ГЕ регионов.

Novgorod),accordingtomanufacturers'protocols.An- ti-HAV IgG levels were assessed quantitatively (IU/L). Anti-HAVlevelsabove20IU/Lwereconsideredprotec- tive post-infection immunity.

Results were analyzed using EXCEL 2010 and statistics software GraphPadPrism 4. Data processing included assessment of significance of differences between mean values in compared groups using Fisher criteria (values were considered significantly different at 95% confidence – p <0,05).

Study results and discussion

Serologic markers of infection with enteral hepatitis viruses (HAV and HEV). Currently HA is a socially significant infection with high burden on healthcare of RT. HA incidence rates in this region have always been one of the highest in Russia. In 2010 it was 451.6 per 100 000 people in RT vs. 12.3 per 100 000 in overall population of Russia, in 2011 – 146.1 vs. 4.26, respectively (data from FSUI «Center of hygeine and epidemiology of Rospotrebnadzor»).

Data on socioeconomic status of the region is significant for understanding the epidemic process of HA. People living in rural areas and consuming water from open sources are most vulnerable, although those living in cities and consuming water from centralized supply may also be infected. Lack of proper sanitary and epidemiologic control over water supply system may lead to emergence of outbreaks of HA.

The main goal in control of HA is development of adequate tactic of vaccine prophylaxis in current epidemiologic situation, which is impossible without detailed screening for anti-HAV antibodies in all age groups, allowing quantitative assessment of the proportion of susceptible people in a given area.

Epidemiology of HE has undergone some significant changes during recent decade including appearance of territories endemic for this infection (Europe, Japan, North America) and registration of autochthonous cases on such territories, confirmation of zoonotic nature of HE, presence of chronic forms with prolonged persistence of the infection (over 6 months). In Russia the potential of HEV import is determined by high intensity of migration process with increased number of tourists coming from regions

78	Медицинскаявирусология.томXXVII(2)

Серологические исследования, проведенные в разныхрегионахмирасиспользованиемновыхдиагностических препаратов для выявления антител

кHEV, установили повсеместное распространение anti-HEV IgG в сыворотках крови условно здоровых лиц, проживающих на неэндемичных по этой инфекции территориях, что свидетельствует о повсеместной, но неравномерной циркуляции HEV.

Дляпрактическогоздравоохранениясведенияо циркуляции HEV необходимы для выявления групп риска и потенциальных источников инфицирования в регионах со спорадической заболеваемостью ГЕ. Данные о распространенности HEV среди людей и животных в разных регионах РФ позволят научно обосновать перечень мероприятий, необходимых для профилактики инфицирования HEV.

Врезультате проведенного исследования была определена частота выявления антител класса IgG

кHAV и HEV в различных возрастных группах населения Республики Тыва (рис. 1).

У детей первого года жизни anti-HAV были обнаружены в 55,7% (49/88) случаев и являются, очевидно, преимущественно материнскими антителами. В возрастной группе 1-4 года выявлен самый низкий уровень anti-HAV (28%; 28/100). Рост по-

казателя серопозитивности к HAV отмечен в группе детей 5-9 лет (42%; 42/100) и достигает максимального значения среди лиц старше 20 лет (98%; 98/100; р< 0,001). При аналогичных исследованиях, проведённых ранее в Европейской части РФ (Московская область), показано, что частота выявления anti-HАV IgG среди детей 1-4 и 5-9 лет составляет 12,4 и 13,6% (соответственно), а в группе

20-29лет–36,5%(К.К.Кюрегянидр.,2013).Наблю-

даемые в РТ высокие показатели частоты выявле- нияanti-HAVобусловленысохраняющейсявысокой интенсивностью циркуляции вируса гепатита А и,

hyperendemic for HE. Serologic studies conducted in different regions of the world using new diagnostic tests for HEV antibodies showed high prevalence of anti-HEV IgG in serum samples obtained from conditionally healthy population living in non-endemic areas suggesting ubiquitous but inhomogeneous circulation of HEV.

For prophylactic healthcare data on HEV circulation is useful in detection of risk groups and potential sourcesofinfectioninregionswithsporadicHEcases. Data on prevalence of HEV in people and animals in different regions of Russia will set scientific basis for measures necessary for prophylaxis of HEV infection.

In this study we determined the prevalence of IgG antibodies to HAV and HEV in different age groups in Republic Tyva (Pic. 1).

In children under 1 y.o. anti-HAV were detected in 55,7% (49/88) cases presumably being maternal antibodies. Age group 1–4 had the lowest anti-HAV levels (28%; 28/100). Seropositivity rates were increased in age group 5–9 (42%; 42/100) and the highest rates were observed in age group >20 (98%; 98/100).

Analogous studies conducted in European part of Russia (Moscow region) showed that anti-HAV IgG prevalence in children aged 1–4 and 5–9 was 12,4 and 13,6% correspondingly, while in age group 20-29 it was 36,5% (K.K. Kyuregyan, M.I. Mikhailov, 2013). High prevalence of anti-HAV seen in RT is facilitated byhighintensityofpersistentHAVcirculationcausing

Рис.1. Частота выявления anti-HAV IgG и anti-HEV IgG в

различных возрастных группах населения Республики Тыва

Picture 1. Prevalence of anti-HAV IgG and anti-HEV IgG in age groups of RT population

medical virology. vol. XXVII (2)

79

соответственно, указывают на высокий риск встречи с HAV. С другой стороны, значительная доля негативных по anti-HАV IgG детей и подростков свидетельствует о существовании в регионе широкой неиммунной прослойки, восприимчивой к инфицированию HAV. Инфицирование в возрасте старше 5 лет обычно приводит к развитию клинически выраженного заболевания, поэтому в РТ сочетаются факторы, обеспечивающие высокую заболеваемость ГА – большое число источников инфекции и значительная доля восприимчивых лиц в возрасте, ассоциированном клинически выраженным заболеванием,инаходящихсяворганизованныхколлективах (школах).

При количественной оценке выявляемых antiHAV,отмечено,чтововсехвозрастныхгруппахantiHAV определялись в концентрации выше 80 МЕ/л. Доля лиц с anti-HAV в низких и средних концентрациях составила менее 10%. Напряженность иммунитета к HAV в отдельных возрастных группах (кроме детей до года) зависит в основном от кратности встреч с HAV, инфицирующей дозы и состояния иммунной системы организма. Данное положение находит подтверждение в том, что в старших возрастных группах доля лиц, имеющих низкие титры anti-HAV, сокращается, в то время как возрастает доля лиц, имеющих средние и высокие титры antiHAV. В возрастной группе лиц 40 лет и старше титры антител до 20 МЕ/л выявлены у 1,0% обследованных, от 20 МЕ/л до 79 МЕ/л – у 7,0%, 80 МЕ/л и более – у 92,0% (рис.2).

Распределение показателей выявления antiHAV среди мужчин и женщин было неравномерным. Установлены статистически достоверные различиявзависимостиотпола:средиженскогонаселения наблюдались наиболее высокие показатели anti-HAV (81,5%) в сравнении с мужчинами (71%),

т.е. женщины активнее вовлечены в эпидпроцесс ГА. Также было показано, что среди городского населения показатель частоты выявления anti-HAV

high risk of HAV infection. On the other hand, significant proportion of anti-HAV IgG negative adolescents suggests presence of large non-immune population susceptible to HAV infection in the region. Infection in age group >5 commonly lead to clinically manifested disease. Therefore in RT there is a combination of factors leading to high HA morbidity — large amount of infection sources and significant proportion susceptible people in the age group associated with clinically manifested disease, gathered in organized groups (schools).

Quantitative assessment of anti-HAV showed that they were present in all age groups in concentrations above 80 IU/L. Proportion of samples with anti-HAV concentrations at medium and low levels was below 10%. Intensity of HAV immunity in different age groups (except children under 1 y.o.) depend mainly on quantity of HAV challenges, inoculum dose and condition of the organism’s immune system. This point was proven by decrease of proportion of cases with low anti-HAV titers in older age groups and corresponding increase in proportion of cases with medium and high anti-HAV titers. In patients aged >40 antibody titers below 20 IU/L were detected in 1,0% cases, <79 IU/L in 7,0% cases and >80 IU/l in 92,0% cases (Pic. 2).

Prevalence of anti-HAV in men and women was irregular. Statistically significant differences between genders were observed: anti-HAV levels in women were higher (81,5%) than in men (71%), i.e. women were more involved in infection process. It was also shown that among city population anti-HAV preva-

Рис. 2. Распределения показателей частоты выявления anti-HAV IgG

в зависимости от их концентрации

Picture 2. Anti-HAV IgG concentrations in tested samples