Порядок виконання роботи

1. Виконати посів за методом Коха суспензії зі зразка ґрунту, що розведений в 1000, 10000 раз на тверде вівсяне живильне середовище, МПА і середовище Гаузе. Результати інокуляції й підрахунок мікроорганізмів зробити на наступному занятті.

• Наважку підготовленого ґрунту (1 г) поміщають у чисту ступку з невеликою кількістю стерильної води і розтирають гумовою маточкою чи пальцем у гумовій рукавичці приблизно 5 хв.

• Підготовлену суспензію переносять у колбу з 100 мл стерильної водопровідної води. Готують розведення ґрунтової суспензії, для чого 1 мл суспензії переносять послідовно в ряд пробірок з 9 мл стерильної водопровідної води.

• На поверхню твердого й підсушеного середовища наносять краплю ґрунтової суспензії визначеного розведення й за допомогою стерильного скляного шпателя розподіляють по всьому агару. Якщо висів проводять, починаючи з великих розведень, то використовують нову стерильну піпетку і новий шпатель для кожного розведення.

• Засіяні чашки Петрі перевертають нагору дном і поміщають у термостат із визначеною температурою, яка сприятлива для розвитку мікроорганізмів, що враховуються .

• Підрахунок колоній, що виросли, проводять через визначений час після посіву (3-5 доби). На МПА звичайно на 2-3 добу інкубації враховують спорові й безспорові форми бактерій. На середовищі Гаузе на 5-7 добу враховують колонії актиноміцетів, на сусло-агарі на 5-7 добу – колонії грибів і дріжджів.

• Колонії, як правило, рахують, не відкриваючи чашки Петрі, у прохідному світлі. Для зручності дно чашки поділяють на сектори, підраховують кількість колоній у кожнім секторі, кожну відлічену колонію позначають крапкою (маркером) із нижньої сторони чашки Петрі й результати підсумовують. Для підрахунку колоній зручно користатися спеціальним приладом із лічильником.

• Точність методу залежить від числа підрахованих колоній: кращим розведенням вважають те, у висіві якого на твердому живильному середовищі виростає від 50 до 150 колоній.

• Підрахувавши кількість колоній на всіх паралельних чашках, обчислюють їхнє середнє число на одній чашці і потім роблять перерахування для визначення вмісту мікроорганізмів в 1 г ґрунту за формулою:

(2.1)

де N – кількість кліток у 1 г ґрунту; a – середня кількість колоній на чашці, b – розведення, із якого зроблений посів; c – кількість крапель у 1 мл суспензії.

2. Приготувати препарат із добової культури дріжджів роду Saccharomyces

і підрахувати кількість клітин у вихідній суспензії.

• Мікробіологічною петлею краплю, суспензії дріжджів наносять у центр рахункової камери. Рахункову камеру покривають покривним склом, ретельно притираючи його з країв до утворення ньютонівських кілець (кольорових смуг).

• Підрахунок клітин дріжджів робити (із збільшенням мікроскопа: окуляр 10-15х, об'єктив 20-40х) у 20 малих квадратах, у 3-4 пробах досліджуваної суспензії. Загальне число підрахованих кліток мікроорганізмів повинне бути не менш 600, тому беруть 3-4 проби з досліджуваної суспензії для монтажу камери.

• Потім розраховують середнє число мікробних кліток в одному малому квадраті і роблять перерахування на вміст у 1 мл вихідної суспензії за формулою:

(2. 2)

де N – число кліток у 1 мл суспензії; а – середнє число кліток у малому квадраті сітки; h – глибина камери в мм, s – площа малого квадрата сітки в мм ², n – розведення вихідної суспензії, 1000 – коефіцієнт перерахування мм³ у мл.

Результати роботи протоколюють.

Петлі, голки обпалюють у полум'ї пальника. Посуд дезінфікують.