Порядок виконання роботи

1. Вивчити вільноживучі азотфіксатори.

Для виділення з грунту азотобактера використовують агарове безазотисте середовище Ешбі. Його розплавляють і розливають у стерильні чашки Петрі. Коли середовище застигне, на його поверхні розкладають 50 грудочок грунту. Чашки ставлять у термостат при 28°С . Через 5-7 днів спостерігають утворення навколо грудочок грунту бурі плями слизистих колоній Azotobacter chroococcum. Підраховують процент оброслих грудочок. З колоній готують мазки, фарбують фуксином 2 хв. і мікроскопують з імерсією. Замальовують клітини азотобактера в зошит.

2. Вивчити симбіотичні азотфіксатори.

Відібрати свіжий корінь бобової рослини з добре розвиненими бульбочками, промити у воді і відрізати від нього найбільші бульбочки. Для знищення поверхневої мікрофлори, їх стерилізують 5 хвилин у 96 %-му етиловому спирті, а потім відмивають 5-кратно стерильною водою (переносять бульбочки послідовно в 5 пробірок із стерильною водою). Стерилізовану бульбочку кладуть у стерильну чашку Петрі, роздавлюють на шматочки профламбованим пінцетом або скальпелем, додають кілька крапель стерильної води. Готують фіксований препарат, фарбують фуксином 2 хвилини, мікроскопують з імерсією. Замальовують клітини бульбочкових бактерій в зошит.

Вивчаючи бульбочкові бактерії звернути увагу на те, що вони розповсюджуються у вигляді інфікованих плиток – колоній клітин бактерій, які розмножилися. В зрілій бульбочковій тканині бактеріальні клітини перетворюються в бактероїди, які мають грушоподібну гіллясту форму. Треба пам’ятати, що форма та розмір бульбочків різних бобових рослин неоднакові та руйнування бульбочків супроводжується деградацією елементів рослинної клітини і лізисом. Частини бактероїдів, останні бактероїди утворюють міленькі коковидні клітини – своєрідні артроспори, які виконують дифракцію розмноження.

Вивчення бульбочок бобових рослин вивчають на зрізах, які роблять гострою ботанічною бритвою або готують на мікротомі. Тонкий зріз, продовгуватий або поперековий розміщують на предметне скельце і розглядають в роздавленій краплі при різних збільшеннях.

В сухій системі проглядають структуру бульбочків, знаходять бактерійну тканину, а потім при достатній тонкості зрізу препарат досліджують з імерсійною системою, при цьому добре проглядається бактероїдна зона бульбочків.

Для знайомства з формами різних видів бульбочкових бактерій готують фіксовані і зафарбовані препарати з бактероїдної тканини бульбочків різних бобових культур. Якщо бульбочки достатньо великі, їх розрізають бритвою на 2 частини і поверхню зрізу багатократно проколюють стерильною голкою, викликаючи механічне пошкодження клітини. Потім з нього віджимають краплю на предметне скельце і готують фіксований забарвлений препарат.

Для вивчення м’яких бульбочок (2-3 бульбочки) їх поміщають на предметне скло, добавляють краплину води, прижимають зверху іншим предметним склом. Видавлений вміст розмазують по скельцю, мазок зафарблюють. Застосовують наступні фарбники: карболовий еритрозин, фуксин або генціанфіолетовий. Інтенсивне фарбування отримують при застосуванні суміші різних частин фуксину і метиленовою синьою, які розчинені в 1%- ній оцтовій кислоті. В суміші фарбників препарат витримують 3 хв. Тканина бульбочків зафарбовується в синій колір, а бактерії у червоний.

Форми і розміри бульбочкових бактерій, в тому числі і бактероїдів із різних бобових замалювати, написати їх назву.