Лабораторная диагностика ботулизма

Возбудитель ботулизма - Cl. botulinum - крупная палочка с субтерминальной овальной спорой («теннисная ракетка»), грам+, подвижная, без капсулы, обладает выраженными протеолитическими свойствами. Основную роль играют серовары А, В, Е.

Материалом для исследования служат кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, моча, испражнения, подозрительные на заражение пищевые продукты. Микробиологическая диагностика проводится аналогично для других клостридиозов. Наиболее информативный метод диагностики - реакция нейтрализации на белых мышах с использованием противоботулинических сывороток. Эту реакцию ставят непосредственно с исследуемым материалом, либо с выделенной культурой. Животные, не защищенные сыворотками, погибают при явлениях общей слабости, отдышки, порезов и параличей конечностей, западение мышц живота («осиная талия»).

Диагностика столбняка

Возбудитель столбняка - Cl. tetani - крупная тонкая палочка с круглой спорой на конце (барабанная палочка), грам+, подвижная, без капсулы. Обладает слабыми протеолитическими свойствами.

Диагностика проводится по той же схеме, что и газовая гангрена. Наибольшее значение имеет биопроба на мышах и опыт нейтрализации. Картина экспериментального столбняка: хвост мыши становится ригидным, задняя конечность вытягивается, туловище искривляется (восходящий столбняк), животное погибает.

Для ускоренного выделения палочек столбняка используют засев материала (или смешанной культуры со среды Китта-Тароцци) конденсационную воду скошенной свернутой сыворотки(метод Филдса). Благодаря активной подвижности клостридий столбняка за 24 часа вырастают на верхней части косяка. Культура исследуется микроскопически и ею заражают белых мышей.

Лабораторная диагностика холеры

Обследованию подлежат не только больные, но обязательно все люди в очаге для выявления скрытых форм и бактерионосителей. Забор материала проводится в условиях, обеспечивающих полную безопасность персонала и внешней среды, обязательно медицинским работником. Материал от больного берется индивидуально, от подозреваемых лиц - можно объединять по несколько проб. Материал для исследования: испражнения, кусочки кишечника от трупов, пищевые продукты, вода, объекты внешней среды. Пересылка материала осуществляется медицинским работником в течение не более 3,5 часов в системе стекло - впитывающий материал - металл с приложением сопроводительного письма (в нем указаны паспортные данные, предполагаемый диагноз, время взятия материала) и пометкой «бактериологическое загрязнение».

Используют два метода: главный - бактериологический, дополнительный - серологический.

Бактериологическое исследование проводят в специальных лабораториях с соблюдением строгого противоэпидемического режима.

Методы диагностики подразделяются на классические и ускоренные.

Классическое исследование проводится поэтапно, через каждые 6 часов.

1 этап. а) посев материала для обогащения на 1% пептонную воду; б) микроскопия материала (окраска по Граму и фуксином); в) посев материала на щелочной агар и среду TCBS (тиосульфатцитрат-бром-тимоловый синий, сахароза). Посевы помещают в термостат.

2 этап (через 6 часов). а) вырастает пленка на пептонной воде, делают пересев на вторую пептонную воду для дальнейшего обогащения; б) пересев из первой пептонной воды на щелочной агар и среду TCBS.

3 этап (через 12 часов исследования). а) исследование роста на второй пептонной воде (аналогично первой); б) изучение чашек первичного посева: - описание колоний (жел-тые на TCBS, прозрачные голубоватые на щелочном агаре; - микроскопия; - определение подвижности; - постановка РА на стекле с 0-1, Инаба и Огава сыворотками; просмотр колоний в стереоскопическом микроскопе (голубоватый цвет); - пересев на двухсахарную лактозо-сахарозную среду. На этом этапе может быть дан предварительный ответ.

4 этап (через 18 часов исследования). Изучение выросшей культуры: а) учет изменения лактозо-сахарозной среды (разложение сахарозы в столбике без газа); б) мазок по Граму; в) идентификация по ряду признаков.

1. Для постановки окончательного диагноза и отличия выделенных вибрионов от нехолерных:

• РА с сывороткой 0-1 (в пробирках);

• посев на триаду сахаров Хейберга: сахарозу (+), маннозу (+) и арабинозу (-);

• определение чувствительности к холерным фагам С4 и Эльтор-2.

2. Для определения серовара: РА с сыворотками Огава и Инаба (в пробирках).

3. Для определения биовара холерного вибриона:

• чувствительность к бактериофагам (классический вибрион - КС4, Эльтор - к фагу Эльтор-2;

• рост на среде с полимиксином;

• агглютинация куриных эритроцитов;

• лизис бараньих эритроцитов.

Все три последних положительны для вибриона Эль-Тор.

Длительность исследования - 36-48 часов в зависимости от скорости обогащения.

Ускоренный метод диагностики подразделяется на: ускоренный метод индикации микроба, антигена и ускоренную идентификацию.

А. Ускоренная индикация - поиск микроба непосредственно в материале или после подращивания в пептонной воде следующими методами:

а) микроскопия (по Граму и фуксином);

б) прямая РИФ;

в) р. иммобилизации под действием сыворотки 0-1;

г) р. агглютинации растущих культур (материал засевается в 2 пробирки с пептонной водой, в одну из них добавляют диагностическую сыворотку, отмечается рост и одновременно склеивание микробов в пробирке с сывороткой);

д) проба с бактериофагами.

Б. Поиск антигена в материале серологическими методами:

а) р. энзим-меченных антител;

б) РПГА с антительным диагностикумом;

в) РТПГА.

В. Ускоренная идентификация осуществляется на 3-ем этапе бактериологического исследования путем изучения свойств выросших колоний (мазок по Граму, р. агглютинации с сывороткой 0-1, посев в малые объемы трех углеводов по Хейбергу, проба с бактериофагом.

Серологический метод диагностики. Чаще носит ретроспективный характер, помогает в неясных случаях и для выявления переболевших и вибриононосителей. Используют РА и определение вибриоцидных антител. Рекомендуют использовать парные сыворотки. Положительный ответ дают при наличии высокого титра (в РА - 1:180-1:3200) или при нарастании его в парных сыворотках.