Культуральный метод исследования

Культуральный (бактериологический) метод исследования - совокупность методик, направленных на выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов (бактерий) с помощью культивирования на питательных средах.

Чистая культура - совокупность микроорганизмов одного вида.

Чаще всего чистую культуру получают путем отбора и культивирования изолированной колонии (потомство одной микробной клетки).

ЭТАПЫ МЕТОДА:

I. Забор материала для исследования.

II. Выделение чистой культуры и ее идентификация.

III. Заключение.

I. Забор материала для исследования

Вид исследуемого материала зависит от цели исследования (диагностика - от больного;

эпиданализ - из внешней среды, продуктов питания, больного и/или бактерионосителя).

II. Выделение чистой культуры включает 3 или 4 этапа

1. Посев материала (после предварительной микроскопии) на чашку с плотной питательной средой (лучше дифференциально-диагностической или селективной) с целью получения изолированных колоний. Посев производят чаще всего методом механического разобщения. В некоторых случаях (например, кровь) материал предварительно засевают в жидкую среду обогащения, с последующим пересевом на чашку с агаровой средой. Иногда до посева проводят селективную обработку материала (с учетом свойств выделяемого микроорганизма; например, обработка кислотой или щелочью для выделения устойчивых бактерий). Культивируют чаще всего при 37 50 0C 18-24 часа . Время культивирования для разных видов бактерий может колебаться.

2(3):

а) Изучение колоний на чашке с агаром по культуральным признакам, отбор наиболее типичных;

б) Приготовление мазков из этих колоний с окраской (по Граму или другими методами);

в) Отсев остатка исследованной колонии на среду накопления и выращивание в термостате при оптимальной температуре.

3(4). Изучение чистоты культуры, полученной на среде накопления. С этой целью готовят мазок, окрашивают (чаще по Граму), микроскопически изучают морфологическую и тинкториальную однородность (в разных полях зрения). 4(5). Идентификация чистой культуры.

III. Заключение

По совокупности признаков в сравнении со свойствами эталонных (типовых) штаммов указывается вид выделенного из материала микроорганизма.

Оценка метода: 

Достоинства: относительно высокая чувствительность и точность, возможность определить численность микробов в исследуемом материале, а также чувствительность к антибиотикам.

Недостатки: относительная длительность, метод дорогостоящий.

Методы выделения чистых культур микроорганизмов

1. Метод механического разобщения микроорганизмов.

а) Посев материала на чашки Петри шпателем или петлей (см. практикум).

б) Посев пластинчатыми разводками - делают в пробирках десятикратные разведения материала в расплавленном и остуженном до 45 5о 0С МПА, а затем выливают содержимое пробирок в стерильные чашки Петри, дают агару застыть и инкубируют чашки в термостате.

в) Разобщение на основе подвижности микробов. Материал засевают в каплю конденсационной жидкости скошенного МПА. При этом подвижные микробы как бы «мигрируют» вверх по агаровому скосу и вырастают в виде колоний, расположенных в верхней части агара. При 2-3-кратном пассировании этих колоний в конденсационную жидкость скошенного агара удается получить чистую культуру подвижного микроба (например, протея).

г) Разобщение на основе различий в размерах микроорганизмов. Для этого смесь микроорганизмов фильтруют через микро- и миллипористые фильтры. Чистые культуры получают, как правило, в фильтрах. Этот метод используют для получения чистых культур вирусов и микоплазм.