- •Общая микробиология
- •Частная микробиология
- •Общая и частная вирусология
- •Другие инфекции
- •Общая микробиология микроскопический (бактериоскопический) метод исследования
- •Противомикробные мероприятия.
- •Стерилизация
- •Дезинфекция
- •Антисептика
- •Асептика
- •Классификация питательных сред
- •Культуральный метод исследования
- •I. Забор материала для исследования
- •II. Выделение чистой культуры включает 3 или 4 этапа
- •III. Заключение
- •Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический).
- •Методы, основанные на избирательной чувствительности микроорганизмов к воздействию внешних факторов.
- •(См. Файл «схема индентификации) определение биохимических свойств микробов
- •Ферменты-токсины
- •Оксидо-редуктазы
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Метод серийного разведения антибиотик в бульоне
- •Метод серийных разведений в плотной питательной среде.
- •Ускоренные методы
- •Методы генетического анализа микроорганизмов
- •Методы изучения нормальной микрофлоры
- •Культуральный (бактериологический) метод.
- •Общие принципы диагностики острых кишечных инфекций, вызванных микробами семейства энтеробактерий
- •Диагностика брюшного тифа, паратифов а и в сальмонеллезов.
- •Лабораторная диагностика кишечного иерсиниоза
- •Пищевые отравления бактериальной природы методы диагностики
- •Оценка результатов
- •Лабораторная диагностика газовой гангрены
- •Бактериологический метод исследования.
- •Лабораторная диагностика ботулизма
- •Диагностика столбняка
- •Лабораторная диагностика холеры
- •Кампилобактерии. Кампилобактериозы. Методы диагностики.
- •Серологическая диагностика сифилиса
- •Лабораторная диагностика хламидиозов
- •Лабораторная диагностика
- •Микоплазмы. Микоплазмозы
- •Общая и частная вирусология методы культивирования вирусов
- •Выделение вирусов и методы их индикации
- •Принципы диагностики вирусных инфекций
- •Лабораторная диагностика вирусных гепатитов
- •Лабораторная диагностика спида
- •III. Исследования иммунного статуса направлены на выявление:
- •Патогенные грибы. Классификация грибов. Методы диагностики микозов.
- •Возбудители мадуромикоза
- •Возбудитель пневмоцистоза
- •Возбудитель донованоза
- •Возбудитель язвы бурули
- •Возбудитель мелиоидоза
Общая и частная вирусология методы культивирования вирусов
Вирусы - это облигатные внутриклеточные паразиты, не способные размножаться ни в одной из бесклеточных сред.
Для культивирования вирусов используются следующие живые объекты:
1) культуры клеток (тканей, органов);
2) куриные эмбрионы;
3) лабораторные животные.
КУЛЬТУРА КЛЕТОК.
Наибольшее распространение имеют однослойные культуры клеток. Все культуры однослойных клеток можно разделить на :
а) первичные (первично трипсинизированные);
б) перевиваемые;
по происхождению:
а) эмбриональные;
б) опухолевые;
в) из взрослых организмов;
по морфогенезу:
а) фибробластные;
б) эпителиальные.
Первичные культуры клеток - это клетки различного типа, получают следующим образом: взятую ткань (эмбриональную или из взрослых организмов) механически измельчают, затем обрабатывают ее протеолитическими ферментами (трипсином). После отмывки и подсчета клеток суспензию разбавляют питательной средой и дают возможность клеткам прикрепиться к плоской поверхности стеклянных или пластмассовых сосудов. В результате деления клеток на поверхности сосудов образуется сплошной монослой клеток. Срок жизни таких культур ограничен. По прошествии определенного времени в них возникают явления неспецифической дегенерации, что выражается в грануляции и вакуолизации цитоплазмы, округлении клеток, утрате связи между клетками и твердой поверхностью, на которой они выращивались, что ведет их к гибели.
Первичные культуры, полученные из почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека, куриных эмбрионов широко используются как в лабораторных исследованиях, так и для производства вирусных вакцин.
Перевиваемые клеточные линии характеризуются потенциальным бессмертием и гетероплоидным кариотипом.
Перевиваемые штаммы клеток (диплоидная клетка) - клетки одного типа, способные in vitro выдерживать до 100 пассажей, сохраняя при этом свой исходный диплоидный набор хромосом. Диплоидные штаммы фибробластов, полученные из эмбрионов человека, широко используются как для диагностики вирусных инфекций, так и при производстве вирусных вакцин.
Источником перевиваемых линий и штаммов клеток являются первичные клеточные культуры, отдельные клетки которых обнаруживают тенденцию к бесконечному размножению in vitro. Совокупность изменений, приводящих к появлению из клеток таких особенностей, называют трансформацией, а клетки перевиваемых тканевых культур - трансформированными.
Другим источником перевиваемых клеточных линий являются злокачественные новообразования. В этом случае трансформация клеток происходит in vivo. Наиболее часто в вирусологической практике применяются такие линии перевиваемых клеток, как HeLa - получена из карциномы шейки матки, Hep-2 - из карциномы гортани, Детройт-6 - из метастаза рака легкого в костный мозг, RH - из почки человека, ВНК-21 - из почек однодневных сирийских хомяков, ПМС - из почки морской свинки и др.
Для культивирования клеток необходимы питательные среды, которые по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие. В составе ростовых питательных сред должно содержаться больше питательных веществ, чтобы обеспечить активное размножение клеток для формирования монослоя. Поддерживающие среды должны обеспечивать лишь переживание клеток в уже сформированном монослое при размножении в клетке вирусов.
Широкое применение находят синтетические стандартные среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначения все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. Неотъемлемым компонентом большинства ростовых сред является сыворотка крови животных (телячья, бычья, лошадиная), без наличия 5-10% которой размножение клеток и формирование монослоя не происходит. В состав поддерживающих сред сыворотка не входит.