Лабораторная диагностика вич-инфекции

При диагностике ВИЧ-инфекции используется 4 группы методов:

1. Определение наличия вируса, его АГ или копий РНК в материалах от б-го или ВИЧ-инфицированного.

2. Серологическая диагностика, основанная на выявлении специфических АТ к поверхностным (gp120 и gp41) и внутренним (p18 и p24) б. ВИЧ.

3. Выявление патогномоничных (специфических) для ВИЧ-инф.изменений в ИС .

4. Лаб. диагностика оппортунистических инфекций (СПИД-ассоциированных заболеваний).

1. Вирусологическая диагностика. Материал для выделения ВИЧ — Т-лимф., лейкоциты костного мозга, лимф. узлы, ткани мозга, слюна, сперма, спинномозговая ж-ть, плазма кр. Полученным материалом заражают перевиваемую культуру Т-лимф. (H9). Индикацию ВИЧ проводят по ЦПД (образование симпластов), а также методами ИФА, электронной микроскопии, по активности обратной транскриптазы; обнаруживают 1инфицир. лимфоцит на 1000 кл.

Выявление вирусных АГ в инфицир. Т-лимф. с помощью моноклональных АТ.

Решающее значение для определения прогноза и тяжести ВИЧ-инф.имеет определение количества копий РНК ВИЧ в плазме кр.методом ПЦР —вирусная нагрузка. Если у пациентов, не получающих терапии, вирусная нагрузка находится ниже предела определения (это менее 5000 копий РНК ВИЧ в 1 мл плазмы), это свидетельствует об отсутствии прогрессирования или о медленном прогрессировании заболевания. Степень заразности при этом min. Высокая вирусная нагрузка (более 10⁵ копий РНК/мл) у пациентов с числом CD4-лимфоцитов менее 300 в 1 мкл всегда свидетельствует о прогрессировании болезни.

2. Серологическая диагностика получила наибольшее распространение.Материал— сыворотка крови.

ИФА со стандартными иммуноферментными диагностическими системами. Метод скрининговый. Иммуносорбентом для АГ ВИЧ являются полистироловые планшеты. В лунки планшет вносят испытуемую сыворотку в разведении и проводят инкубацию. После связывания АГ с АТ планшеты трехкратно отмывают от несвязавшихся б. После этого в лунки планшет вносят конъюгат —АТ к Ig ч-ка, меченные ферментом. Образование специф.комплекса АГ+АТ выявляют внесением субстрата для фермента (раствор ортофенилендиамина и перекиси водорода). В результате воздействия фермента на субстрат меняется окраска среды пропорционально количеству выявленных в проб АТ. Результаты учитывают на фотометре. Наличие .вирусспециф. АТ в сыворотке кр. в необходимо подтвердить посредством иммунного блоттинга.

Иммунный блоттинг —тест, позволяющий выявить и дифференцировать наличие АТ к различным б. ВИЧ. В его основе лежит разделение б. ВИЧ по молек. массе методом электрофореза в полиакриламидном геле. В последующем АГ ВИЧ переносят на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем нитроцеллюлозные мембраны с АГ ВИЧ обрабатывают испытуемой сывороткой. При этом вирусспецифические АТ образуют комплекс с конкретным АГ (gp120, gp41, p24, p18). Заключительный этап исследования — выявление комплексов АГ+АТ с различными б. ВИЧ. Для этого в систему добавляют конъюгат —АТ против б. ч-ка, меченные ферментом или радиоизотопной меткой, в местах образования иммунных комплексов фиксируется метка. Таким образом, в сыворотке пациента выявляют (либо не выявляют) вирусспецифические АТ ко всем или к нескольким АГ ВИЧ.

3. Оценка иммунного статуса. Исследование направлено на выявление:

1. соотношения CD4/CD8 клеток (в норме =2 и >, при СПИДе — 0,5 и <);

2. содержания CD4 клеток (<200 клеток/мл.);

3. наличия лейкопении, тромбоцитопении, лимфопении;

4. повышения концентрации Ig A, Ig G и ЦИК в сыворотке крови;

5. снижения пролиферативного ответа лимфоцитов на Т-клеточные митогены;

6. отсутствия кожной реакции ГЗТ на несколько анамнестических антигенов (состояния анергии).

		Клетки ЦНС										ВИЧ							CD4+ Т-лимфоциты
		энцефалопатия, деменция											нарушение ГИО и КИО												нарушение функции ЕК и CD8+ клеток
																										онкогенез
					оппортунистические инфекции, инвазии, вызванные																					саркома Капоши, лимфома мозга
	вирусами								простейшими						бактериями							грибами								гельминтами
1.Герпес симплекс I и II типа 2.Герпес зостер 3.Цитомегаловирус 4.Вирус Эпштейна- Барр 6.Паповавирусы									1.Пневмоцисты 2.Токсоплазмы 3.Криптоспори- дии 4.Изоспоры						1.Микобактерии 2.Кампилобактерии 3.Сальмонеллы 4.Шигеллы 5.Легионеллы 6.Микоплазмы 7.Актиномицеты 8.Листерии										1.Кандиды 2.Криптококки 3.Аспергиллы 4.Мукоровая плесень 5.Гистоплазмы									Стронгилоидоз