107. Изолирование веществ из биологического материала диализом (серная, азотная, соляная кислоты). Качественное обнаружение и количественное определение, токсикологическое значение.

Определение кислоты серной

1 этап – изолирование

Исследуемый объект смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды до консистенции кашицы, способной фильтроваться, и через 1-2 часа фильтруют. Для быстрого фильтрования лучше использовать воронку с пористым дном и водоструйный насос. Для отделения белковых веществ и до фильтрования смесь подвергают диализу.

Диализ проводят 2-3 раза по 4-6 часов. Полученные диализаты сливают вместе и выпаривают на водяной бане до объёма, равного 5-10 мл, и исследуют на наличие кислот.

Общую качественную реакцию проводят на определение рН вытяжки или диализата при помощи лакмусовой бумажки или универсальной индикаторной бумажки.

Сущность метода диализа: необходимо обнаружить не отдельные анионы кислот, так как они являются составной частью организма человека, а их в соединении с водородом, т.е. обнаружить нативные соединения. Этого можно добиться только методом диализа.

Исследование на наличие кислот следует прводить, начиная с серной кислоты.

Характерный признак присутствия концентрированной серной кислоты – обугливание углеводов.

При добавлении к диализату раствора хлорида бария приводит к обильному выпадению белого осадка сульфата бария, что доказывает наличия сульфат-ионов, но не доказывает наличие свободной серной кислоты:

BaCl₂ + SO₄^2- = BaSO₄↓ + 2Cl^-

Для отгонки свободной серной кислоты жидкость помещают в колбу и вносят в неё медные опилки. Колбу герметично закрывают пробкой с изогнутой трубкой и холодильником, который соединём с аллонжем. Конец аллонжа опущен в приёмник. Колбу с реакционной смесью нагревают на водяной бане с маслом или на песчаной бане до реакции кислоты с медными опилками. В приемнике находится раствор йода в йодиде калия. Проводят перегонку до обесцвечивания раствора йода. Если раствор йода быстро обесцвечивается, то его добавляют дополнительно. Когда цвет раствора йода перестанет меняться, приемник отделяют, подкисляют незначительно раствором соляной кислоты и нагревают до удаления йода.

Химизм реакции:

H₂SO₄ + Cu = CuO + H₂SO₃

CuO + H₂SO₄ = CuSO₄ + H₂O

H₂SO₃ = H₂O + SO₂

SO₂ + H₂O = H₂SO₃

J₂ + H₂O = HJ + HJO

H₂SO₃ + HJO = H₂SO₄ + HJ

При последующем добавлении раствора бария хлорида выпадает белый осадок бария сульфата, доказывающий наличие серной кислоты.

Количественное определение

Аликвоту водного извлечения титруют 0,1 н раствором натрия гидроксида в присутствии метилового оранжевого.

Затем в определённой части аликвоты определяют количество сульфата бария гравиметрическим методом.

Все полученные результаты токсикологического исследования имеют только относительное значение.

Определение кислоты азотной

Этапы изолирования точно такие же, как при определении кислоты серной.

Качественные реакции на кислоту азотную

1)свободная азотная кислота при достаточной концентрации самой и белковых молекул в биологическом объекте окрашивает белки в жёлтый цвет, переходящий в оранжевый цвет от действия аммиака (ксантопротеиновая реакция);

2)часть исследуемой жидкости выпаривают с шерстяными нитками, при этом шерсть (белковое вещество) окрашивается в жёлтый цвет, переходящий в оранжевый цвет от действия раствора аммиака (ксантопротеиновая реакция); кроме азотной кислоты белки окрашивает в желтый цвет пикриновая кислота. Но в отличие от азотной кислоты, пикриновая кислота также окрашивает в жёлтый цвет сам раствор.

3)каплю исследуемой жидкости смешивают с 2-3 каплями раствора дифениламина в концентрированной серной кислоте – появляется синее окрашивание;

Определение кислоты соляной

Качественные реакции на соляную кислоту

1)диализ исследуют на наличие анионов хлора в реакции с раствором серебра нитрата. При этом выпадает белый осадок серебра хлорида, который растворяется в растворе аммиака; образование данного осадка требует дальнейшего качественного обнаружения свободной соляной кислоты;

2)часть водного извлечения помещают в колбу, соединенную с нисходящим холодильником и приёмником; колбу нагревают на песчаной бане. Вначале отгоняется вода, затем хлороводород. Дистиллят исследуют на наличие хлороводорода:

А) реакция с раствором нитрата серебра (на анионы хлора);

Б) по выделению хлора при реакции с калия хлоратом:

6HCl + KClO₃ = 3Cl₂↑+ 3H₂O + KCl

Количественное определение кислоты хлористоводородной

После перегонки определяют количество хлороводорода по методу Фольгарда, или гравиметрией осадка серебра хлорида.