- •1.Антгены и иммуногены. Антигенные детерминанты, эпитопы. Гаптены.
- •3.Антиидиотипические и видоспецифические антитела
- •5. Мка получают с помощью гибридомной технологии, а пка выделяют из сыворотки.
- •6. Методы получения антител
- •7. Стадии получения мка и пка
- •9 Требования к свойствам моноклональных антител:
- •10 Вопрос. Гибридомная технология.
- •12.Рекомбинантные иммунотоксины и иммуноферменты. Иммуноадгезины. Абзимы.
- •13 .Селекция методом фагового дисплея.
- •In vitro и in vivo скрининг библиотек фагового дисплея
- •Вопрос15. Антитела и нанотехнологии.
- •Типы наночастиц
- •17)Трансгенные растения и животные – продуценты антител.
- •18. Классификация методов на основе антител
- •19. Прямые и непрямые иммунохимические методы
- •21. Амплификация сигнала и неспецифическое связывание.
- •23. Способы мечения антител и визуализации комплексов антиген-антитело
- •26)Радиоиммунологические методы.
- •27. Виды ифа. Чувствительность анализа, способы её повышения.
- •29. Ифа. Принцип. Конкурентный и «Сэндвич»-ифа.
- •31. Твердофазные виды ифа. Подбор условий методом «шахматной доски»
- •32. Western-блотинг.Dot-blot. Системы детекции и амплифкации сигнала.
- •33.Метод иммунного блоттинга
- •34.Клеточный ифа. EliSpot. Поляризационный флуороиммуноанализ (пфиа).
- •36.Цитофлюориметрия. Популяционный анализ клеток. Клеточный сортинг.
- •37. Клеточное типирование и селекция клеток. Иммуноцитохимия.
- •38.IgA, IgG, IgM: методы определения, реакция агглютинации
- •40. Флуориметрия и методы на ее основе. Флюоресцентная и конфокальная микроскопия. Локализация антигенов.
- •42. Методы, применяемые в иммунодиагностике
- •43. Фагоциты: исследование функций
- •5. Комплемент, лабораторное исследование функций
- •Иммунные комплексы циркулирующие: методы определения
- •45. Методы выявления клеточных антигенов. Маркеры клеточной активации. Дифференцировочные маркеры лейкоцитов.
- •46.Иммунопрофилактика, иммунотерапия, иммунокорекция, иммуномодуляция. Выбор средств, определение вида и способа иммунокорекции.
- •1. Основные виды иммунокорригирующей терапии
- •2. Выбор средств, определение вида и способа иммунокоррекции
- •48. Оценка фагоцитоза, в- и т-систем иммунитета, активности антителобразующих клеток.
- •49)Иммунопроилактика. Вакцины. Виды вакцин. Способы их получения. Успехи применения вакцинации.
- •50)Иммунодифициты: диагностика и иммунотерапия. Оценка иммунного статуса прииммуннодифицитах.
- •51. Стимуляция пролиферации дендритных клеток. Содействие захвату антигена и его процессингу. Стимуляция ответа эффекторных клеток при помощи прямой презентации антигена.
- •52)Направления имуннотерапии рака. Противораковые вакцины.
- •53.Применение имитаторов опухолевых антигенов. Экстрокорпоральная активация противораковых иммунокомпетентных клеток
- •54.Элиминация раковой опухоли с помощью антител. Ангиостатический подход. Использование цитокинов
- •55. Пробиотики, пищевые волокна.
- •56. Применение иммуномодуляторов при иммунодефицитах.
- •59. Критерии выбора методов для исследования, их применение в биологии, экспериментальной и практической медицине и др. Областях
- •60. Иммунологические подходы и методы, применяемые в медицине
23. Способы мечения антител и визуализации комплексов антиген-антитело
Метки:
- радиоизотопы (изотопы иод131 и иод125 используют для мечения АТ, а изотопы фосфор32 и тритий – АГ)
- ферменты (пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза_
- флюорохромы (флюоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ), тетраметилромадинизотиоцианат (ТРИТЦ), которые излучают в зеленой части спектра, и фикоэритрин, который при возбуждении светом такой же длины волны дает красный свет),
- металлы и металлопротеины
Промежуточные связующие вещества:
- биотин
- дигоксин
В агглютинационных и преципитационных тестах регистрация комплексов АГ-АТ осуществляется визуально, для лучшей визуализации осадка применяются красители, имеющие высокое сродство к белкам (кумасси синий), эритроциты (реакции гемагглютинации).
Для того чтобы визуализировать результаты РИА используют радиометры, позволяющие регистрировать интенсивность радиоактивного излучения.
Для визуализации реакций иммунофлюоресценции (РИФ) используются флюоресцентные и конфокальные микроскопы.
Для регистрации результатов ИФА используется спектрофотометр. Иногда результаты можно учитывать визуально.
24.Количественные, полуколичественные, качественные методы определения.
Полуколичественные( Семиколичественные) : (иногда точную конц-ю оределить нельзя; определяют >или< чем ожидалось или чем в норме, по сравнению с др. позволяет сориентироваться в разных положениях.)
Конкурентный.
Зональный электрофорез - полуколичественный метод, позволяющий разделить смесь белков в зависимости от их молекулярной массы и электрического заряда.
Двойная радиальная иммунодиффузия - полуколичественный метод, с помощью которого можно не только выявить антигены, но и оценить степень сходства между ними.
Качественный:
Иммуноэлектрофорез. Суть:- проводят электрофоретическое разделение белков в геле; - по окончанииэлектрофореза в еле параллельно направлению электрофореза вырезают бороздки; - в бороздки вносят антитела (антисыворотку), например к тяжелым (альфа, дельта, эпсилон, гамма, мю) или легким (лямбда, каппа) цепям иммуноглобулинов. Эти антитела и разделенные при электрофорезе белки диффундируют навстречу друг другу. Электрофорез с иммунофиксацией. Этот метод основан на электрофоретическом разделении белков сыворотки в геле с последующей инкубацией геля в присутствии антител к тяжелым и легким цепям иммуноглобулинов.
Иммуноблоттинг - качественный метод, позволяющий выявлять антигены и антитела в исследуемой пробе. Антитела с помощью этого метода выявляют следующим образом: - смесь известных антигенов разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и переносят на нитроцеллюлозную мембрану; - мембрану инкубируют с исследуемой пробой, например сывороткой, а затем - с мечеными антителами к иммуноглобулинам. Количественные: (конц-я, титр, ур-нь)
Простая радиальная иммунодиффузия позволяет количественно определить содержание антигена в исследуемой пробе.
Нефелометрия - определение концентрации взвешенных частиц и высокомолекулярных веществ в растворе, основанное на оценке интенсивности рассеяния света, проходящего через этот раствор. Нефелометрия может быть использована для определения концентрации антигенов.
Твердофазный иммуноферментный анализ применяют для количественной оценки антител и антигенов. По чувствительности он сопоставим с радиоиммунным анализом, но более прост, дешев и не требует применения радиоактивных изотопов.
Непрямая иммунофлюоресценция - метод, с помощью которого можно выявить антитела к известным антигенам. В качестве источника антигена обычно используют срезы тканей или культуры клеток.
Гемагглютинация применяется для выявления антител к тиреоглобулину и микросомальным антителам, латекс-агглютинация - для выявления ревматоидного фактора и некоторых других антител. Эти методы просты и позволяют количественно определить антиген, однако менее чувствительны, чем радиоимунный и твердофазный иммуноферментный анализы.
25. Основой метода является обратимость реакций антиген-антитело. Хрома-тографическую колонку заполняют гранулами несорбирующего белки вещества, с которым ковалентно связаны молекулы конкретного антигена. Затем через колонку пропускают раствор электролитов, обеспечивающий условия связывания антигенов и антител и далее смесь такого раствора с сывороткой. По мере прохождения через колонку на заполняющем ее веществе будут осаждаться только специфичные по отношению к выбранному антигену антитела. После прохождения всего объема раствора, содержащего сыворотку, колонку промывают несколькими объемами исходного раствора электролитов для полного удаления всех несвязавшихся антител. Последним этапом является пропускание через колонку раствора, вызывающего диссоциацию комплексов антиген-антитело, что приводит к элюции (смыванию) нужных антител. Выходящую из колонки суспензию собирают и используют для постановки реакций.
Недостатками такого метода является небольшое количество нужных антител, получаемых из значительных объемов сыворотки, и отсутствие полной идентичности отбираемых таким методом антител. Последнее связано с тем, что при использовании поливалентного антигена в суспензии окажутся антитела, специфичные по отношению к разным антигенным детерминантам этого антигена, поскольку при иммунном ответе организма образовывались разные клоны плазматических клеток. Иначе говоря, такая суспензия, хотя и будет высокоспецифичной, останется все равно поликлональной.
Иммуносорбция. Не нужна колонка. Достаточно иметь гранулы с а/т. Есть суспензия различных а/г. Далее гранула с а/т связывается со специфичным а/г и выпадает в осадок. Если надосадочная жидкость не нужна, то она выливается.
Самое дорогое – это гранулы. Применяется для концентрирования малых количеств.