- •1.Антгены и иммуногены. Антигенные детерминанты, эпитопы. Гаптены.
- •3.Антиидиотипические и видоспецифические антитела
- •5. Мка получают с помощью гибридомной технологии, а пка выделяют из сыворотки.
- •6. Методы получения антител
- •7. Стадии получения мка и пка
- •9 Требования к свойствам моноклональных антител:
- •10 Вопрос. Гибридомная технология.
- •12.Рекомбинантные иммунотоксины и иммуноферменты. Иммуноадгезины. Абзимы.
- •13 .Селекция методом фагового дисплея.
- •In vitro и in vivo скрининг библиотек фагового дисплея
- •Вопрос15. Антитела и нанотехнологии.
- •Типы наночастиц
- •17)Трансгенные растения и животные – продуценты антител.
- •18. Классификация методов на основе антител
- •19. Прямые и непрямые иммунохимические методы
- •21. Амплификация сигнала и неспецифическое связывание.
- •23. Способы мечения антител и визуализации комплексов антиген-антитело
- •26)Радиоиммунологические методы.
- •27. Виды ифа. Чувствительность анализа, способы её повышения.
- •29. Ифа. Принцип. Конкурентный и «Сэндвич»-ифа.
- •31. Твердофазные виды ифа. Подбор условий методом «шахматной доски»
- •32. Western-блотинг.Dot-blot. Системы детекции и амплифкации сигнала.
- •33.Метод иммунного блоттинга
- •34.Клеточный ифа. EliSpot. Поляризационный флуороиммуноанализ (пфиа).
- •36.Цитофлюориметрия. Популяционный анализ клеток. Клеточный сортинг.
- •37. Клеточное типирование и селекция клеток. Иммуноцитохимия.
- •38.IgA, IgG, IgM: методы определения, реакция агглютинации
- •40. Флуориметрия и методы на ее основе. Флюоресцентная и конфокальная микроскопия. Локализация антигенов.
- •42. Методы, применяемые в иммунодиагностике
- •43. Фагоциты: исследование функций
- •5. Комплемент, лабораторное исследование функций
- •Иммунные комплексы циркулирующие: методы определения
- •45. Методы выявления клеточных антигенов. Маркеры клеточной активации. Дифференцировочные маркеры лейкоцитов.
- •46.Иммунопрофилактика, иммунотерапия, иммунокорекция, иммуномодуляция. Выбор средств, определение вида и способа иммунокорекции.
- •1. Основные виды иммунокорригирующей терапии
- •2. Выбор средств, определение вида и способа иммунокоррекции
- •48. Оценка фагоцитоза, в- и т-систем иммунитета, активности антителобразующих клеток.
- •49)Иммунопроилактика. Вакцины. Виды вакцин. Способы их получения. Успехи применения вакцинации.
- •50)Иммунодифициты: диагностика и иммунотерапия. Оценка иммунного статуса прииммуннодифицитах.
- •51. Стимуляция пролиферации дендритных клеток. Содействие захвату антигена и его процессингу. Стимуляция ответа эффекторных клеток при помощи прямой презентации антигена.
- •52)Направления имуннотерапии рака. Противораковые вакцины.
- •53.Применение имитаторов опухолевых антигенов. Экстрокорпоральная активация противораковых иммунокомпетентных клеток
- •54.Элиминация раковой опухоли с помощью антител. Ангиостатический подход. Использование цитокинов
- •55. Пробиотики, пищевые волокна.
- •56. Применение иммуномодуляторов при иммунодефицитах.
- •59. Критерии выбора методов для исследования, их применение в биологии, экспериментальной и практической медицине и др. Областях
- •60. Иммунологические подходы и методы, применяемые в медицине
3.Антиидиотипические и видоспецифические антитела
Антиидиотипические антитела - антитела, специфические по отношению к антигенным детерминантам, расположенным на вариабельных участках (на идиотипах) других антител. Антиидиотипические антитела играют важную роль в связывании и обезвреживании избытка антител, в иммунной регуляции выработки антител. Кроме того, антиидиотипическое «антитело против антитела» зеркально повторяет пространственную конфигурацию исходного антигена, против которого было выработано исходное антитело. И тем самым антиидиотипическое антитело служит для организма фактором иммунологической памяти, аналогом исходного антигена, который остаётся в организме и после уничтожения исходных антигенов. В свою очередь, против антиидиотипических антител могут вырабатываться анти-антиидиотипические антитела и т. д.
Применение антиидиотипических антител создает принципиально новый подход к получению диагностических и вакцинных препаратов.
Антиидиотипические антитела участвуют в аутологичной системе регуляции гуморального иммунного ответа, поскольку они способны как подавлять, так и усиливать антигензависимую продукцию антител.
4 вопрос. В непосредственное взаимодействие вступают не любые участки антитела и антигена, а строго определенные: ант
игенная детерминанта и антигенсвязывающий участок. Решающим моментом в реализации такого взаимодействия является комплементарное совпадение пространственных конфигураций этих элементов сталкивающихся молекул, т. е. выступ на поверхности антигена (антигенная детерминанта) должен соответствовать по форме впадине (нише) между вариабельными доменами тяжелой и легкой цепи антитела. Необходимость такого пространственного соответствия диктуется тем, что связи, возникающие между образующими паратоп (поверхность ниши в антителе) и эпитоп (поверхность антигенной детерминанты) атомами, не являются ковалентными и формируются только на очень коротких расстояниях. Конкретно такими связями являются (в порядке возрастания необходимых для их образования расстояний между атомами): гидрофобные взаимодействия, ван-дер-ваальсовы силы, электростатические взаимодействия, водородные связи, причем гидрофобное связывание обеспечивает около половины общей энергии (силы) удержания молекул в комплексе. Как известно, обеспечиваемое такими связями взаимодействие является обратимым и в целом реакция антиген–антитело подчиняется законам, определяющим характер таких химических реакций. Применяя закон действующих масс, можно определять константу равновесия такой реа
кции по формуле К = [АтАг] / [Ат] · [Аг], где [АтАг] – концентрация комплексов антиген-антитело, [Ат] – концентрация свободных от антигена антигенсвязывающих участков, [Аг] – концентрация несвязавшихся антигенных детерминант. Значение рассчитанной по такой формуле константы является количественным выражением силы (прочности) связывания одного парапота с одним эпитопом. Эту силу называют сродством, или аффинностью (аффинитетом).
Наиболее показательными в плане визуализации являются реакции агглютинации и преципитации, при которых образуются фиксируемые невооруженным взглядом агрегаты, состоящие из множества единиц антигенов и антител.
Собственно феномен агглютинации (преципитации) заключается в следующем. При случайных столкновениях антигенов и антител в растворе возможны ситуации, когда одна молекула антитела присоединяется одним из своих антигенсвязывающих участков к антигенной детерминанте на одной антигенной частице, а вторым – к такой же, но находящейся на другой частице. Тем самым две такие антигенные частицы оказываются связанными в агрегат. Поскольку антигены в таком агрегате поливалентны, возможны реализующиеся по такой же схеме взаимодействия с новыми молекулами антител, а значит, укрупнение уже существующих агрегатов и постепенное выпадение их в осадок. Характер выпадающего осадка, прежде всего, зависит от свойств антигенной частицы. Чем большие она имеет размеры, тем короче будет фаза взаимодействия и тем более выраженным будет осадок.
Существенным для проявления результатов агглютинации и преципитации является и состав участвующих в реакции антител. Если суспензия антител включает антитела различной специфичности, а антиген имеет несколько разновидностей комплементарных этим антителам антигенных детерминант, вероятность образования осадков возрастает. Поэтому так называемые поликлональные антитела, получаемые из сывороток иммунизированных поливалентным антигеном животных, являются более предпочтительными в подобных реакциях, чем обладающие только одним типом специфичности моноклональные антитела. Агглютинацией принято считать осаждение антителами корпускулярных антигенов (клеток, вирусных частиц или состоящих из множества молекул их фрагментов), преципитацией – осаждение молекул, обладающих антигенными свойствами.