43. Фагоциты: исследование функций

4.1. Моноциты и макрофаги . С помощью лабораторных методов можно оценить следующие функции моноцитов и макрофагов: - представление антигена Т-лимфоцитам, - антителозависимую клеточную цитотоксичность, - противоопухолевую цитотоксичность, - хемотаксис, - фагоцитоз и - бактерицидную активность, - можно исследовать продукцию цитокинов активированными макрофагами.

4.2 Нейтрофилы . Исследуют такие функции нейтрофилов, как - хемотаксис, - фагоцитоз, - бактерицидную активность, - продукцию свободных радикалов кислорода и - адгезию.

Хемотаксис нейтрофилов исследуют с помощью камеры Бойдена. Эта камера состоит из двух отделений, между которыми находится фильтр. В одно отделение камеры помещают суспензию нейтрофилов, в другое - хемотаксический фактор, например С5а. После инкубации нейтрофилов в камере Бойдена определяют, какое их количество мигрировало на противоположную сторону фильтра. Другой способ исследования хемотаксиса нейтрофилов основан на применении полужидкого агара. Для исследования хемотаксиса нейтрофилов in vivo используется метод кожного окна . Нарушение хемотаксиса нейтрофилов характерно для синдрома Чедиака-Хигаси и иногда наблюдается при синдроме гиперпродукции IgE . У больных со слабо выраженной воспалительной реакцией также выявляется снижение хемотаксиса нейтрофилов in vitro.

Продукция свободных радикалов кислорода . Активация нейтрофилов сопровождается повышением активности гексозо-монофосфатного шунта, потреблением кислорода и образованием перекиси водорода и свободных радикалов кислорода. Продукцию этих радикалов можно оценить с помощью теста восстановлении нитросинего тетразолия и хемилюминесценции. Отсутствие восстановления нитросинего тетразолия - характерный признак хронической гранулематозной болезни . Результаты, полученные с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия и хемилюминесценции, обычно совпадают.

Оценка бактерицидной активности нейтрофилов. Суть метода заключается в следующем: - к нейтрофилам добавляют опсонины и суспензию бактерий; - после инкубации определяют число погибших бактерий.

Для оценки бактерицидной активности нейтрофилов используются разные виды бактерий. Для хронической гранулематозной болезни характерно значительное снижение бактерицидной активности нейтрофилов в отношении Staphylococcus aureus .

Исследование молекул адгезии . Обычно определяют экспрессию поверхностных антигенов CD11а/CD18, CD11b/CD18 и GD11c/CDl8 с помощью проточной цитофлюориметрии и моноклональных антител к CD11а, CD11b, CD11c и CD18. При иммунодефицитах, обусловленных нарушением адгезии лейкоцитов , наблюдается снижение экспрессии этих антигенов как на покоящихся, так и на активированных нейтрофилах. К лабораторным признакам этих иммунодефицитов относятся нейтрофильный лейкоцитоз, снижение хемотаксической и фагоцитарной активности нейтрофилов и снижение скорости миграции нейтрофилов в очаг воспаления.

5. Комплемент, лабораторное исследование функций

Комплемент - это группа сывороточных белков, состоящая из протеаз и их активаторов. Существуют два механизма активации комплемента - классический и альтернативный . Комплемент играет важную роль в защите от микробов, активирует катаболизм циркулирующих иммунных комплексов и участвует в регуляции функций иммунной системы.

5.1 Определение гемолитической активности комплемента . Для исследования компонентов классического пути активации комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем: - разные разведения сыворотки больного и нормальной сыворотки добавляют к эритроцитам барана, покрытым антителами; - степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор.

За единицу гемолитической активности комплемента принимают величину, обратную тому разведению сыворотки, при котором разрушаются 50% эритроцитов.

Существуют модификации метода, основанные на применении небольших объемов исследуемой сыворотки. Определение гемолитической активности комплемента по 100% гемолизу основано на гемолизе в геле. Суть этого метода заключается в следующем: - в геле, содержащем покрытые антителами эритроциты барана, делают лунки; - в лунки вносят разные разведения исследуемой и нормальной сывороток; - гемолитическую активность комплемента оценивают по диаметру зон гемолиза.

Активность комплемента зависит от целого ряда факторов, поэтому нарушение правил забора и хранения сыворотки обычно приводит к ошибочным результатам исследования.

Определение гемолитической активности комплемента позволяет обнаружить недостаточность компонентов комплемента , прежде всего участвующих в образовании мембраноатакующего комплекса. Кроме того, оценка этого показателя может использоваться для выявления активации комплемента, например при СКВ и гломерулонефрите , хотя чувствительность метода для этого недостаточно высока.

Оптимальный метод выявления активации комплемента заключается в определении продуктов расщепления его компонентов.