5. Мка получают с помощью гибридомной технологии, а пка выделяют из сыворотки.

ПКА продуцируются большим количеством клонов В-клеток, полиспецифичны, высокая кросс-реактивность, распознают несколько эпитопов на поверхности, гетерогенны по специфичности, афинности, изотипу. Сродство к а/г описывается понятием авидность, получаем ограниченное количество, поликлоны уникальны, нестандартны, хороши для визуальных тестов, каждая сыворотка уникальна по составу а/т, получение дешевле, быстрее получить, более важна чистота а/г.

МКА продуцир. 1 В-клеточный клон, моноспецифичны, распознают 1 детерминанту на пов-ти а/г, гомогенны, афинность, стандартны, имеют постоянные свойства, берут в более чувствительные, более специф., воспроизводимые тесты, дороже, медленнее получаются.

Поликлональные антитела - антитела, которые образуются в сыворотке (антисыворотке) крови в разных линиях B-клеток и связываются с разными антигенными детерминантами (эпитопмы) молекулы-мишени (антигену).

Смесь антител выделенную из сыворотки крови называют поликлональным препаратом. Поликлональные антитела раньше широко использовались в иммунодиагностике, для их получения использовалася иммунизированное животное (обычно кролик). Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики:- содержимое отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой;- поликлональни антитела нельзя применять, если необходимо различить две подобных мишени, то есть когда патогенная (мишень) и непатогенная формы различаются единственной детерминантой.

МКА применяюстя в биотехнологии, при лечении и диагностики болезней. Основные области применения моноклональных антител в настоящее время — (1) подавление иммунитета (иммуносупрессия) при аутоиммунном заболевании и при трансплантации органов, (2) лечение рака. При иммуносупрессии целью моноклональных антител будут рецепторы на поверхности лимфоцитов, а при раке — рецепторы, характерные для раковых клеток.

6. Методы получения антител

ПКА – из крови иммунизированного животного.

МКА – гибридомная технология. Из иммунизированного животного (мыши) извлекают селезенку, получают В-клетки. Отдельно растят мутантные плазмоцитомы, чувтвительные к ГАТ-среде (гипоксантин, аминоптерин, тимидин). Слияние В-клеток (берут в 2-кратном избытке) с плазмоцитомами – с помощью ПЭГ или электропорации. Полученные гибриды помещают на ГАТ-среду – растут только гибридомы – В-клетка+плазмоцитома. Сформировавшиеся клоны проверяют на способность продуцировать антитела и отбирают те из них, которые дают антитела к использованному для иммунизации животного антигену. Часть клеток из каждого такого клона консервируют путем замораживания при температуре жидкого азота, а сам клон подвергают расчистке. Суть расчистки заключается в разделении клона на изолированные клетки, получении их потомства и анализе этого потомства на однородность и продукцию атител. При необходимости проводят несколько последовательных расчисток. На каждом этапе расчистки часть клеток каждого клона также консервируют, чтобы в случаях гибели клона была возможность не повторять процедуру с начала, а продолжить ее с конкретного этапа. Полученные стабильные, не дающие расщепления клоны являются источниками гибридом, пригодных для получения абсолютно однородных по специфичности и изотипу антител, которые и называют монокло-нальными. Наработку нужного количества антител осуществляют либо побуждая гибридомные клетки к продукции антител в культуре, либо вводя суспензию таких гибридом в организм специально подготовлен-ных лабораторных животных.

РАТ (рекомбинантные АТ) создаются на основе известных последовательностей генов АТ. Получены с использованием технологий молекулярной биологии и генной инженерии. Клонируются гены, сегменты иммуноглобулинов – получают генный репертуар. Получают новые конструкции. Селекция. Для получения РАТ используют вирусы (обычно фаги – фаговые библиотеки), бактерии и дрожжи (для клонирования генов; в дрожжах и др.эукариотических клетках происходит гликозилирование иммуноглобулинов, у прокариот не осуществляется). Получают различные типы РАТ: замещенные, минимальные (Vдомены, Fv-фрагменты, sc-Fv, минимальные узнающие пептиды, иммуноадгезины, абзимы)