- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента.
- •План практических занятий.
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии.
- •Обязанности дежурного.
- •Дополнительный материал к занятию. Правила микроскопии с иммерсионной системой.
- •Контрольные вопросы.
- •Техника окраска по Граму в модификации Синёва.
- •Отношение бактерий к окраске по Граму.
- •Окраска по Цилю-Нильсену.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •2. Продемонстрировать овладение умениями, полученными при изучении морфологии микробов.
- •Контрольные практические задачи по разделу «История микробиологии. Морфология микробов и вирусов».
- •Контрольные вопросы по разделу «История микробиологии. Морфология микробов и вирусов» (подробную расшифровку вопросов смотрите в занятиях 1-5).
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительная литература по разделу «Физиология микробов. Микробиологические исследования лекарственных средств» (занятия 6-14)
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задание на самостоятельную работу.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Методы контроля стерильности.
- •Методы частичного обеспложивания.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Объекты микробиологического контроля, отбор проб, методика исследования, оценка результатов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания на самостоятельную работу.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства.
- •Исследование лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Контрольные практические задания по разделу «Физиология микробов. Микробиологические исследования лекарственных средств».
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам.
- •Диско-диффузионный метод.
- •Метод серийных разведений.
- •Метод серийных разведений антибиотика в агаризованной среде.
- •Метод е-тестов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде).
- •Фаготипирование бактерий.
- •Применение бактериофагов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 37 Возбудители вирусных инфекций. Цель самоподготовки.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии.
- •Экзаменационные вопросы по курсу микробиологии.
- •305041, Г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
- •305041, Г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства.
Лекарственные средства для инъекций, глазные капли, мази, плёнки, другие лекарственные средства, в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно - технической документации (НТД), должны быть стерильными.
Отбор образцов для анализа - число образцов из каждой серии от 3 до 40, в зависимости от метода стерилизации, для автоклавированных средств - 10. Для исследования лекарственные средства должны быть приготовлены в виде растворов, суспензий или эмульсий.
Определение антимикробного действия лекарственного средства. Во избежание неправильной оценки результатов анализа необходимо определить однократно для каждого наименования лекарственного средства, обладает ли оно антимикробным действием.
Для определения антимикробного действия из ампулы с лекарственным средством следует внести по 1 мл в 3 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в 1 пробирку с 10 мл жидкой соево-казеиновой среды или среды Сабуро. Для контроля в 3 пробирки с тиогликолевой средой и в пробирку с 10 мл жидкой соево-казеиновой среды или среды Сабуро вносится по 1 мл стерильной дистиллированной воды.
Затем во все пробирки следует внести по 0.1 мл микробной взвеси тест - штамма, содержащего 1000 клеток в 1 мл. В пробирки с тиогликолевой средой вносятся штаммы Staphylococcus aureus; Bacillus subtilis; Escherichia coli; в пробирки с соево-казеиновой средой или средой Сабуро - Candida albicans
Таблица
Определение антимикробного действия лекарственных средств
|
Пробирки с тиогликолевой средой |
Пробирки с соево-казеиновой средой или Сабуро |
||||||
Номера пробирок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
Лекарственное средство |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
|
|
1,0 |
|
Дистиллированная вода |
|
|
|
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
1,0 |
Staphylococcus aureus |
0,1 |
|
|
0,1 |
|
|
|
|
Escherichia coli |
|
0,1 |
|
|
0,1 |
|
|
|
Bacillus subtilis |
|
|
0,1 |
|
|
0,1 |
|
|
Candida albicans |
|
|
|
|
|
|
0,1 |
0,1 |
Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при 30-35°С в течение 2 суток, а на соево-казеиновой среде или среде Сабуро - при 20-25°С в течение 3 суток.
При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства в опытных и контрольных пробирках должен наблюдаться рост перечисленных тест - микробов.
В этом случае можно продолжать исследование и провести прямой посев данного лекарственного средства на стерильность.
При наличии антимикробного действия устраняют его. Для этого используют:
1. Соответствующие инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях (например, пара-аминобензойная кислота для сульфаниламидов, пенициллиназа - для пенициллинов и цефалоспоринов).
2. При отсутствии соответствующего инактиватора препарат при посеве разводят, увеличивая объём питательной среды до 250 мл.
3. Если при этом сохраняется антимикробное действие лекарственного средства, для посева используют метод мембранной фильтрации.
Посев лекарственных средств на стерильность (метод прямого посева). Испытуемый препарат, если необходимо, растворяют в соответствующем растворителе и высевают в количествах, указанных в таблице.
Количество испытуемого препарата для посева в зависимости от объёма содержимого единицу (ампул, флаконов), составляющих серию.
Объём содержимого одной единицы, мл |
Объём лекарственного средства для посева, мл |
Объём питательной среды |
менее 1 |
весь объем |
в 10 раз больше |
1-4 |
1 |
объёма образца |
5-19 |
2 |
для |
20-100 |
2-4 |
посева |
более100 * |
10 |
|
* - Если объём содержимого единицы превышает 100 мл, предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации.
Посевы с тиогликолевой средой инкубируют при температуре от 30 до 35°С, а в соево-казеиновой среде или среде Сабуро - от 20 до 25°0С. Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 суток. Если во всех посевах роста нет, лекарственный препарат стерилен.
Метод мембранной фильтрации. При определении стерильности лекарственных средств, обладающих антимикробным действием, и лекарственных средств, разлитых в ёмкости больше 100 мл, используют метод мембранной фильтрации. Лекарственное средство фильтруют в асептических условиях через 2 мембранных фильтра, затем смывают 3-4 порциями по 100 мл физ. раствора. Каждую мембрану стерильными ножницами разрезают пополам, половину помещают в тиогликолевую среду, половину - в жидкую соево-казеиновую среду или среду Сабуро.
Посевы выдерживают в термостате при тех же температурах в течение 7 суток при ежедневном просмотре. Для контроля полноты смывания другую мембрану разрезают пополам, и по половине мембраны помещают в питательные среды, куда засевают тест - микробы:
Staphylococcus aureus и Candida albicans. Наличие роста этих микробов после инкубации в термостате указывает на полноту смывания. Для контроля стерильности условий фильтрования производят фильтрование растворителя, и фильтры засевают в те же питательные среды.
Испытание на пирогенность проводится путём введения воды или лекарственного средства кроликам с измерением ректальной температуры. При этом строго соблюдаются условия, исключающие возможность повышения температуры тела кроликов от случайных причин.
Вода для инъекций или раствор лекарственного средства считается пирогенным, если повышение температуры тела кроликов превышает предельные показатели, указанные в фармакопее.
О пирогенности подробнее см. раздел «Инфекция».