Принципы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Лабораторная диагностика инфекционных болезней человека основана на обнаружении в организме больного микроорганизма, вызвавшего заболевание, микробных антител или продуктов их жизнедеятельности (токсинов и др.).

Материалом для исследования служат кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, кал, рвотные массы, промывные воды и ткань (биопсия, аутопсия). В некоторых случаях на исследование берут объекты окружающей среды: воздух, воду, пищевые продукты, смывы с различных поверхностей.

При взятии материала необходимо соблюдать следующие правила:

1. Количество материала должно быть достаточно для проведения исследования и необходимости его повторения.

2. Материал берут по возможности в начальном периоде заболевания, так как именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше, и они имеют более типичную локализацию.

3. Материал должен быть взят до начала антимикробной химиотерапии или через определенный промежуток времени после введения антибактериального препарата, необходимый для его выведения из организма.

4. Материал берут непосредственно из очага инфекции или исследуют соответствующее отделяемое (гной, мочу, желчь и др.) в момент наибольшего содержания в нем возбудителя.

5. Необходимо исключить возможность контаминации материала нормальной флорой больного и микробами окружающей среды, для чего создают асептические условия при адекватном доступе к источнику инфекции.

6. Следует предупредить попадание в материал антимикробных препаратов (дезинфектантов, антибиотиков, антисептиков).

7. Любой клинический материал должен рассматриваться как потенциально опасный для человека, поэтому при его взятии, хранении, транспортировке, обработке необходимо соблюдать правила инфекционной безопасности.

Транспортировка материала.

Транспортировку материала в лабораторию следует проводить в максимально короткие сроки, соблюдая температурный режим, чтобы исключить гибель неустойчивых видов микроорганизмов или помещать его в специальные транспортные среды.

К материалу прилагают сопроводительный документ, содержащий основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования (фамилия, имя и отчество больного, номер истории болезни, клинический диагноз и т.д.).

В процессе транспортировки материал следует оберегать от действия света, тепла, холода, от механических повреждений, чтобы исключить гибель микроорганизмов и контаминацию материала посторонней микрофлорой. Лучше материал доставлять в изотермических контейнерах, которые легко очищать и обеззараживать.

Методы микробиологической диагностики.

Микробиологическая диагностика включает в себя 5 методов: микроскопический, микробиологический (культуральный), биологический, серологический и аллергологический.

Микроскопический метод – это метод исследования, включающий в себя приготовление микроскопических препаратов (нативных или окрашенных простыми и сложными способами) из исследуемого материала и их изучение с применением различных видов микроскопической техники (световая, темно-полевая, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.). В бактериологии этот метод называют бактериоскопический, а в вирусологии – вирусоскопическим.

Микробиологический (культуральный) метод – это метод исследования, включающий в себя посев исследуемого материала на питательные среды с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя. В бактериологии культуральный метод получил название бактериологического, в микологии – микологического, в протозоологии – протозоологического.

Биологический метод (экспериментальный), биопроба – это метод исследования, включающий в себя заражение исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных. Этот метод используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина и активности антимикробных химиотерапевтических препаратов.

Серологический метод - это метод исследования, основанный на определении специфических антител в сыворотке крови больного при использовании серологических реакций.

Аллергологический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препарат – аллерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.

Особое значение приобретают методы экспресс – диагностики, которые позволяют поставить микробиологический диагноз в течение короткого промежутка времени (от нескольких минут до нескольких часов) с момента доставки исследуемого материала в лабораторию. К этим методам относятся РИФ, ИФА, РИА, ПЦР, газовая хроматография и др.

В вирусологии методы лабораторной диагностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии вирусов. Используются три метода лабораторной диагностики: вирусоскопический, вирусологический и серологический. Вирусоскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом, чаще используют электронный микроскоп, реже люминесцентный. Световая микроскопия практически не применяется из-за ничтожно малых размеров вирусов, с её помощью можно выявить внутриклеточные вирусные включения (тельца Пашена, Гварниери и др.). Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры клеток, индикации вируса и его последующей идентификации.

Особенностью серологического метода в вирусологии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у больного в начале болезни, хранят при температуре 4-8°С, а вторую сыворотку берут через 10 – 14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О заболевании свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой. Диагностически значимой является конверсия в 4 раза и выше.