спектр и фотометр

121

122

По физическим свойствам производные урацила представляют собой белые кристаллические вещества без запаха. Некоторые из них имеют желтоватый или бледно-розовый оттенок. Необходимо отметить, что азидотимидин может существовать в нескольких полиморфных модификациях и поэтому он является достаточно сложным объектом для фармацевтического анализа. Кроме того, зидовудин, при его синтезе и в результате разложения при хранении образуются примеси, сходные по химической структуре с основным веществом. Поэтому для испытаний зидовудина рекомендован комплекс методов, включающих не только ИК- и УФ-спектрофотометрию, но и ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ, ЯМР 1Н-спектроско- пию, дериватографию и рентгеновскую дифрактографию.

Степень чистоты фторурацила, метилурацила и тегафура проверяют методом ТСХ с помощью хроматографических пластинок Силуфол УФ-254. Фторурацил не должен содержать примесей промежуточных продуктов синтеза: метилтиофторурацила и тиофторурацила, а тегафур должен быть свободным от 5-фторурацила и других посторонних примесей. Методом ВЭЖХ во фторурациле обнаруживают примесь урацила (не более 0,16%), а с помощью фторселективного электрода определяют содержание примеси свободных фторид-ионов (не более 0,005%).

Для определения специфических примесей в зидовудине применен метод ТСХ на пластинках Кизельгель 60-УФ-254 в системе растворителей метанол-хлороформ (1:9). Содержание остаточных растворителей определяют методом ГЖХ (метанол, хлороформ, толуол, диэтиламин, диметилформамид). Методом ГЖХ подтверждают подлинность зидову-

123

дина, сравнивая времена удерживания испытуемых и стандартных образцов (различие не должно превышать 2%). Методом ВЭЖХ определяют в зидовудине наличие примеси 5-о-бензоил-2,3-ангидротимидина (детектируют при 230 нм) и других примесей (230 и 265 нм). Суммарноесодер-

жание всех примесей должно быть не более 2%.

В ставудине аналогично определяют наличие тимина. Метод

ВЭЖХ дает объективные результаты количественного определения зидовудина и ставудина. Подвижная фаза при определении зидовудина включает смесь метанола и воды (20:80). Детектирование зидовудина осуществляют при 265 нм, а ставудина – при 268 нм.

Расчеты выполняют методом простой нормировки по площади пика основного вещества и стандартного образца.

Количественное определение 5-фторурацила и тегафура методами

непосредственной и дифференциальной спектрофотометрии может быть выполнено с использованием в качестве растворителя 0,1 М раствора хлороводородной кислоты (соответственно при 265 нм и 270 нм), а метилурацила – в 0,1 М растворе гидроксида натрия (260 нм). Наличие таутомерных форм у производных урацила обусловливает возможность применения Е-спектрофотометрии в анализе метилурацила, 5-фтору- рацила, тегафура.

Сходен с зидовудином и ставудином по химической структуре, свойствам, механизму действия и применению ламивудин (Lamivudin). Он представляет собой производное 4- аминопиримидин-2-она и отличается от производных пиримидин-2,4-диона наличием вместо оксогруппы аминогруппы в положении 4 и наличием атома серы в молекуле:

Учитывая указанное сходство, способы испытаний ламивудина мало отличаются от способов испытаний рассмотренных нуклеозидов тимина.

Применение.

Фторурацил и тегафур – цитостатические (противоопухолевые) средства. Их применяют при злокачественных опухолях желудка и других отделов желудочно-кишечного тракта. Выпускают в ампулах в виде 5%- ного раствора по 5 мл (фторурацил) и 4%-ного раствора по 10 мл (тегафур) в виде натриевых солей.

124

Метилурацил назначают как стимулятор лейкопоэза при лейкопениях различной этиологии, лучевых поражениях кожи, вялозаживающих ранах, ожогах в виде таблеток по 0,5 г.

Зидовудин (азидотимидин) впервые применен для лечения системных вирусных инфек-ций, а затем (1985 г.) для комплексной терапии синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа). Механизм его действия состоит в подавлении фермента транскриптазы ВИЧ.

Назначают обычно внутрь в виде капсул по 0,1 и 0,25 г и 1%-ного сиропа в течение 7-24 недель. Облегчает течение заболевания СПИДом, но не излечивает полностью.

Ставудин – один из структурных аналогов зидовудина с идентичным механизмом действия. Назначают для терапии ВИЧ-инфекции внутрь по

0,03-0,04 г 2 раза в сутки.

Ламивудин в основном применяют в комплексной терапии ВИЧ-ин- фекции в комбинации с зидовудином до 0,25 г в сутки. Выпускают в виде таблеток, покрытых оболочкой.

ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗОТИАДИАЗИНА

Конденсированная система бензотиадиазина включает ядро бензо- 1,3-диазина (бензопиримидина).

Основой химической структуры лекарственных веществ этой группы является 1,2,4-бензотиадиазин-1,1-диоксид.

Производные бензотиадиазина обладают диуретическим (салуретическим) действием.

Более выраженный салуретический эффект имеют 3,4-дигидропро-

изводные бензотиадиазина с общей формулой:

Как и ряд других диуретических средств, они содержат в молекуле

сульфамидную группу.

125

Из полученных многочисленных производных бензотиадиазина в ме-

дицине применяют гидрохлоротиазид ( дихлотиазид или гипотиазид)

и циклометиазид. В фармакопейном анализе последнего используется только химические методы, поэтому в данном разделе мы его не рассматриваем.

Гидрохлоротиазид синтезирован в 1958 г.Стивенсом с сотр. конденсацией 6-хлор-4-амино-1,3-бензолдисульфамида с формальдегидом (в присутствии серной кислоты) (см. схемы 8):

Схема 8. Синтез дихлотиазида

По физическим и химическим свойствам гидрохлоротиазид сходен с другими сульфа-мидами. Он очень мало растворим в воде, мало – в этаноле, практически нерастворим в хлороформе и эфире, легко растворим в ацетоне и растворах гидроксида натрия. Растворяясь в растворах щелочей, образует соли. Щелочные растворы легко гидролизуются

(особенно при нагревании) с образованием исходного продукта синтеза

– 6-хлор-4-амино-1,3-бензолдисульфамида.

Подлинность гидрохлоротиазида устанавливают, подтверждая на-

личие тех или иных функциональных групп в молекуле химическими и спектральными методами.

Гидрохлоротиазид имеет характерный ИК-спектр (см. рис. 108), который позволяет устанавливать его подлинность путем сравнения со стандартным образцом.

Идентифицировать его можно по УФ-спектрам поглощения. Раствор гидрохлоротиазида в 0,1 М растворе гидроксида натрия имеет максимумы светопоглощения при 273 нм и 323 нм и минимумы при 250 и 299 нм. (см. рис. 107). Эти данные подтверждаются результатами анализа ПМР-спектра стандартного образца испытуемого вещества (см. рис. 109).

При испытании на чистоту обнаруживают методом ТСХ в ги-

дрохлоротиазиде наличие примеси промежуточного продукта синтеза 6-хлор-4-амино-1,3-бензолдисульфамида.

Испытание выполняют на пластинках Силуфол УФ-254 восходящим методом в системе растворителей этилацетат-изопропанол-раствор ам-

126

миака концентрированный (84:14:2) после нанесения по 100 мкг (0,01 мл) растворенных в ацетоне испытуемого вещества и свидетеля.

При просматривании высушенной пластинки в УФ-свете при 254 нм кроме основного пятна гидрохлоротиазида допускается наличие дополнительного пятна, которое по совокуп-ности величины и интенсивности не должно превышать пятно свидетеля.

Гидрохлоротиазид количественно определяют титрованием в среде неводных растворителей или цериметрическим методом. Наличие в молекуле сульфамидной группы обусловливает слабые кислотные свойства, которые усиливаются в среде диметилформамида.

Титруют 0,1 М раствором гидроксида калия в смеси бензол-н-пропа- нол. Индикатор магнезон 1.

Дихлотиазид и циклометиазид применяют в качестве диуретических средств. Препараты оказывают также гипотензивный эффект.

127

Назначают внутрь при отеках, вызванных сердечно-сосудистой недостаточностью, а также при лечении гипертонической болезни и глаукомы. Дихлотиазид применяют внутрь в виде таблеток по 0,025-0,05 г.

Циклометиазид по структуре и фармакологическим свойствам близок к дихлотиазиду.

Химическая структура отличается тем, что один из атомов водорода в положении С-3 замещен метилциклопентильным радикалом. Значительно более активен, чем дихлотиазид (Циклометиазид в 100 раз активнее, чем дихлотиазид), что позволяет применять его в меньших дозах. Препарат хорошо всасывается. Диуретический эффект проявляется через 2-4 ч после приема и достигает максимума через 3-6 ч. Об - щее время действия средней терапевтической дозы около 10-12 ч. Показания к применению такие же, как у дихлотиазида. Назначают внутрь

втаблетках. При отеках обычно применяют по 0,0005 г (1 таблетка)

вдень (лучше утром), в более тяжелых случаях – по 0,001-0,0015 г (2-3 таблетки) в день.

Производные амида хлорбензолсульфоновой кислоты

Пo химической структуре с производными бензотиадиазина (I) сходны ряд лекарственных веществ, в молекулах которых содержатся производные амида о-хлорбензолсульфоновой кислоты, имеющие общую формулу (II):

Они также проявляют активное диуретическое и антигипертензивное действие. Подобно бензотиадиазинам эти вещества содержат в бензольном ядре расположенные в орто-положении друг к другу фенок-

сигруппу или атом хлора (R1) и сульфамидную группу, которые обу-

словливают их фармакологическое действие.

Сходство в химической структуре определяет общность физических и химических свойств и соответственно способов испытаний.

Наиболее широко применяют из этой группы фуросемид и буметанид (буфенокс).

Подлинность фуросемида и буметанида можно установить по УФ-

и ИК-спектрам путем сравнения со стандартными образцоми или со спектрами сравнения (см. рис. 110-113).

128

УФ-спектр 0,0005%-ного раствора фуросемида в 0,01 М растворе гидроксида натрия в области 220-290 нм имеет два максимума поглощения – при 228 и 271 нм и один минимум – при 249 нм, а 0,005%-ный раствор фуросемида в области 290-390 нм в том же растворителе – один максимум при 333 нм и минимум при 295 нм. (см. рис. 110).

УФ-спектр 0,002%-ного раствора буметанида в смеси этанола и 0,1 М раствора хлороводородной кислоты (1:1) в области 250-400 нм должен иметь максимумы поглощения при 267 и 343 нм (см. рис. 112).

Фармакопея США рекомендует для испытания подлинности буметанида метод ТСХ, основанный на сравнительной оценке хроматограмм с испытуемым и стандартным образцами в системе растворителей хлоро- форм-циклогексан-ледяная уксусная кислота-метанол (80:10:10:2,5). ФС рекомендует этот метод для определения посторонних органических примесей на пластинках Силуфол УФ-254 путем сравнения со свидетелем в системе н-бутанол-раствор аммиака. Детектируют в УФ-свете при 254 нм.

129

Количественное определение фуросемида основано на кислот-

но-основном титровании в среде диметилформамида.

Поскольку он проявляет в этих условиях кислотные свойства, титруют 0,1 М раствором гидроксида натрия (индикатор бромтимоловый синий). Фуросемид титруется как одноосновная кислота

Буметанид титруют также, используя кислотные свойства его раствора в смеси ацетона с водой (20:10). Титрантом сложит 0,1 М раствор гидроксида натрия (индикатор бромтимоловый синий). Определение может быть выполнено с использованием в качестве растворителя этанола и индикатора фенолового красного.

Применение. Фуросемид и буметанид являются активными диуре-

тическими (салуретическими) и гипотензивными средствами.

Их применяют при застойных явлениях, обусловленныхсердечнойнедостаточностью, и при различных, в том числе тяжелых формах гипертензии. Буметанид эффективен в меньших дозах. Выпускают фуросемид в таблетках

130