Лекции по микре

Лечение.

Неспецифическое: антибиотики (β-лактамы, аминогликозиды), сульфаниламиды. Специфическое: поливалентная противогангренозная антитоксическая лошадиная сыворотка в

дозе 150 тыс. МЕ по методу Безредко (дробно) с предварительной пробой Урбаха на индивидуальную чувствительность к чужеродному белку с нормальной лошадиной разведенной (1:100) сывороткой внутрикожно в область предплечья.

Возбудитель столбняка

Столбняк (tetanus) – острая токсическая раневая инфекция, характеризующаяся поражением двигательных нейронов спинного и головного мозга, которая проявляется приступами тоникоклонических судорог поперечно-полосатой мускулатуры.

История открытия возбудителя столбняка.

Уже в трудах Гиппократа и Авиценны можно найти упоминания об этом заболевании. В 1865 г. Н.И. Пирогов описал клиническую картину столбняка. В 1883 г. Н.Д. Монастырский и в 1884 г. А. Николайер обнаружили возбудителя в мазках. В 1884 г. итальянцы Carle и Ratton воспроизвели экспериментальную инфекцию на кроликах. В 1889 г. Ш. Китозато выделил чистую культуру и получил столбнячный токсин, а в 1890 г. Беринг и Ш. Китозато получили противостолбнячную сыворотку.

Таксономия.

Семейств	Bacillaceae
о
Род	Clostridium
Виды	Cl. tetani

Морфология и тинкториальные свойства.

Грамположительные крупные палочка с закругленными концами размером 0,3-0,8×4-8 мкм, имеют жгутики (перитрихи – около 20 жгутиков по периметру), капсулу не образуют, круглые споры располагаются на концах (терминально), напоминают «барабанные палочки», по методу Ожешко споры окрашиваются в красный цвет.

Культуральные свойства.

Строгие анаэробы, хемоорганогетеротрофы, оптимальная температура роста 370С, рН 6,8-7,4, время культивирования 24-36 часов. Требовательны к питательным средам, растут на средах с добавлением белков и углеводов (кровяной, сахарный агар, среда Китта-Тароцци). В ЖПС – рост в виде равномерного помутнения. На кровяном агаре образуют R-(мелкие с неровным кружевным краем) и S-(в виде росинок) с зоной гемолиза. В столбике сахарного агара – R-(чечевицеобразные) и S-(пушистые в виде комочков ваты с плотным коричневым центром) колонии.

Биохимические свойства.

Низкая биохимическая активность: сахара не ферментируют (иногда глюкозу, лактозу, сахарозу), протеолитическая активность слабая (медленно, в течение 4-7 дней, свертывают молоко, разжижают желатин, восстанавливают нитраты, образуют индол и аммиак, Н2S не выделяют).

Антигенная структура.
*	О АГ;
*	Н-АГ – типоспецифические (различают 10 сероваров, но все выделяют
одинаковый токсин, поэтому серотипирование на практике не применяется).
Факторы патогенности.
*	Экзотоксин – по силе действия 2-е место среди биологических токсинов,
состоит из двух фракций:
	тетаноспазмин – полипептид с дистантным механизмом действия, так как
бактерии	остаются в первичном очаге (ране), он фиксируется на поверхности отростков нервных
клеток, проникает в них путем лигандопосредованного эндоцитоза				и посредством ретроградного
аксонного	транспорта попадает в ЦНС,	подавляет высвобождение		тормозных	нейромедиаторов
(глицина, γ-аминомасляной кислоты) в синапсах;
	тетанолизин	–	мембранотоксин,	проявляет	гемолитическое,
кардиотоксическое и летальное действие, подавляет фагоцитоз.
*	Фермент патогенности – желатиназа.
Резистентность.

*	вегетативные формы малоустойчивы во внешней среде: при 60-700C
погибают в течение 30 мин., в обычных дез. растворах – 15-20 мин.;
*	споры высокоустойчивы: при 1000C – до 1-3 часов, в почве – десятки лет, в

дез. растворах – 8-24 часов (в 5 % растворе карболовой кислоты до 10 час, 1 % растворе формалина – 6 часов)

* токсин – во внешней среде нестоек (разрушается при длительном хранении в термостате, под действием света и кислорода), но устойчив к ферментам желудочно-кичшечного тракта.

Эпидемиология.

Естественной средой обитания является кишечник животных и человека. Источник инфекции: здоровый человек и животные.

Механизм: контактный (путь – прямой контактный). Факторы передачи: почва, пыль, предметы обихода.

Входные ворота: нарушенная целостность кожных покровов и слизистых оболочек – раны (колотые, огнестрельные), ссадины, ожоги, обморожения, родовые пути, пуповина новорожденных.

Патогенез и клинические особенности столбняка.

Инкубационный период: 5-14 дней.

При анаэробных условиях в ране споры прорастают и выделяют экзотоксин, который по нейрогенным, реже по гематогенным и лимфогенным путям попадает в ЦНС (спинной мозг, продолговатый мозг, ретикулярную формацию ствола), вызывая параличи вставочных нейронов рефлекторных дуг спинного и продолговатого мозга. Вырабатываемые в мотонейронах импульсы поступают к мышцам непрерывно, вызывая тоническое напряжение скелетных мышц.

Локальный столбняк – легкая форма, характеризующаяся периодическими спазмами в пораженной области.

Генерализованный столбняк – наиболее часто встречаемая форма. Болезнь у человека протекает в виде нисходящего столбняка: тризм жевательных мышц, затем мимических (risus sardonicus), ригидность мышц шеи, спины, живота, конечностей (опистотонус); через 1-2 дня начинаются клонические сокращения групп мышц в виде тетануса (длительное непрервыное сокращение скелетных мышц, обусловленное действием частых стимулов, мышцы не успевают полностью расслабиться от предыдущего сокращения или очередной стимул падает на фазу продолжающегося сокращения). Во время клонических судорог могут быть вывихи суставов, переломы конечностей, сопровождающиеся сильными болями. Приступы повторяются через 10 минут-1 час, могут провоцироваться звуковыми, световыми, тактильными раздражителями; может быть спазм мышц глотки, диафрагмы, дыхательных мышц (смерть наступает в результате асфиксии).

Поражается симпатическая нервная система: повышается артериальное давление, тахикардия, спазм сосудов, гемолиз.

Столбняк новорожденных: заражение происходит в возрасте 3-10 дней через пупочную рану, заболевание протекает по типу генерализованной инфекции (нарушение сосания, поза «лягушонка» – запрокинутая голова, согнутые конечности, страдальческое выражение лица).

При послеродовом (послеабортном) столбняке возможно молниеносное течение, связанное с параличом.

Иммунитет.

Постинфекционный иммунитет не создается, т.к. микродозы токсина, вызывающие заболевание, недостаточны для выработки иммунитета;

Поствакцинальный иммунитет (после введение анатоксина) – прочный, длительный (4-5 лет).

Микробиологическая диагностика.

Исследуемый материал – гной, кусочки ткани, выделения из матки, отделяемое из пупочной раны новорожденных, кровь, перевязочный и шовный материал, смывы с хирургических инструментов.

1.Бактериоскопический метод.

2.Бактериологичекий метод (основной).

3.Биологический метод – определение экзотоксина в РБН.

Профилактика.

Неспецифическая:	предупреждение		травматизма,			своевременная		обработка		ран,
автоклавирование перевязочного материала.
Специфическая:
*	плановая иммунизация (активная):
	вакцинация с 3-х месяцев жизни трехкратно с интервалами в 30-45 дней (3-
4,5-6 мес.) АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина);
	1-я ревакцинация в 18 месяцев однократно АКДС;
	2-я	ревакцинация	в 7	лет	АДС	или	АДС-М для	ослабленных		детей
однократно;
	3-я ревакцинация в 14 лет, а затем через каждые 10 лет до 56-летнего
возраста однократно АДС.
*	экстренная:
	пассивная – введение			противостолбнячной антитоксической					сыворотки
или иммуноглобулина;
	активно-пассивная		–	введение		анатоксина (АС)		+ сыворотка		или
иммуноглобулин.
*	по	эпидемиологическим			показаниям		(военнослужащим,		работникам
сесльского хозяйства):
	секстанатоксин;
	вакцина TАБТе.

Лечение.

Неспецифическое: первичная обработка раны, противосудорожные препараты, антибиотики, борьба с нарушением водно-электролитного баланса.

Сецифическое: антитоксическая противостолбнячная лошадиная сыворотка (50-100 тыс. МЕ) или иммуноглобулин (900 МЕ) дробно на 2-3 инъекции.

Возбудитель ботулизма

Ботулизм (от лат. botulus – колбаса) – острая тяжелая пищевая интоксикация, развивающаяся в результате употребления в пищу продуктов, зараженных токсином Cl. botulinum, которая характеризуется специфическим поражением ЦНС.

История открытия возбудителя ботулизма.

Ботулизм известен давно под названием «аллантиазис» (от греч. «колбаса») и «ихтиоизм» (от греч. «рыба»). В 1815 г. Кернер описал 230 случаев отравления, в 1896 г. бельгийский врач Э. Ван Эрменгем выделил возбудителя из остатков ветчины, в 1914 г. русский врач Констансов выделил из осетрины. В настоящее время отравления связывают не с употреблением колбасы, а консервированных продуктов.

Таксономия.

Семейств	Bacillaceae
о
Род	Clostridium
Виды	Cl. botulinum

Морфология и тинкториальные свойства.

Грамположительные крупные палочка с закругленными концами размером 0,3-1,0×4-10 мкм, имеют жгутики (перитрихи, но слабоподвижны), капсулу не образуют, споры располагаются субтерминально, напоминают «теннисную ракетку», по методу Ожешко споры окрашиваются в красный цвет.

Культуральные свойства.

Строгие анаэробы, хемоорганогетеротрофы, оптимальная температура для культивирования 25370С, рН 7,2-7,4, время культивирования 24-48 часов. Требовательны к питательным средам, растут на казеиновых или мясных средах с добавлением глюкозы (кровяной, сахарный агар, среда КиттаТароцци и Вильсона-Блера). В ЖПС – рост в виде равномерного помутнения. На кровяном агаре образуют мелкие круглые колонии с ровными или урезанными краями, коричневые или сероватомутные, окруженные зоной гемолиза. В столбике сахарного агара могут быть в виде двух форм: S (в виде пушинок с боле плотным центром) и R (чечевицеобразные). На среде Вильсон-Блера – черные колонии.

Биохимические свойства.

Сахаролитические свойства выражены у сероваров А и B (разлагают с образованием кислоты и газа глюкозу, мальтозу, глицерин, фруктозу, левулезу, не ферментируют лактозу и сахарозу), тип С слабо разлагает сахара, серовары Д и Е занимают промежуточное положение, а серовар G не обладают сахаролитическими свойствами. Все штаммы сероваров А и В обладают мощными протеолитическими свойствами: гидролизуют казеин (разжижают свернутую сыворотку), в средах Китта-Тароцци расплавляют кусочки печени или мясного фарша, разжижают желатин, образуют Н2S, индол не выделяют. Типы С, Д, Е и G такими свойствами не обладают.

Неоторые авторы выделяют 4 группы бактерий по способности разлагать сахара и белки:

1 группа – расщепляют глюкозу и мальтозу; протеолитическая активность в виде желатиназы; липазная активность на среде с яичным белком;

2 группа – обладают сахаролитическими свойствами;

3 группа – липолитическая активность и разжижение желатина; 4 группа – гидролиз желатина, не проявляют сахаролитической и липазной активности.

Дифференциация возбудителей по биохимической активности используется редко.

Антигенная структура.

Имеют О и Н-антигены. Однако, по ним идентификация возбудителя не проводится. По антигенной специфичности токсина различают 8 сероваров: А, В, С1, С2 , D, Е, F, G (тип токсина определяется в реакции нейтрализации с соответствующими антитоксическими сыворотками). Для людей наиболее патогенными являются типы А, В, Е, для животных – С, Д, F

Факторы патогенности.

Экзотоксины:

* нейротоксин (ботулотоксин) – самый сильный биологический яд, белок (Zn2+ зависимая эндопептидаза); образуется в анаэробных условиях на питательных средах, в различных консервированных пищевых продуктах, устойчив к действию протеолитических ферментов ЖКТ; имеет тропизм к нервной ткани (фиксируется на рецепторах синаптических мембран и изменяет чувствительность ацетилхолинового рецептора к действию медиатора), в результате блокируется передача нервного импульса через синапсы, поражаются бульбарные нервные центры, нарушается походка, зрение, возникает асфиксия; также обладает способностью гемагглютировать эритроциты человека, кролика и птиц;

*	некоторые штаммы гемолизин продуцируют, который лизирует
эритроциты барана и вызывает гибель лабораторных животных.
Резистентность.	вегетативные формы малоустойчивы (погибают при 800C в течение 30
*
минут);
*	споры выдерживают кипячение в течение 1-5 часов, при 1050C погибают

через 2 часа, при 1200C – через 10-20 минут (в больших кусках мяса, в банках большой емкости жизнеспособны после автоклавирования в течение 15 минут), 10% соляная кислота убивает споры

через 1 час, 40%	раствор формалина – через сутки, устойчивы к кислой среде желудка, споры
прекращают прорастать при 2% растворе уксусной кислоты при рН 3-4,5.
*	ботулотоксин – при кипячении разрушается в течение 20 минут, устойчив

к действию солнечного света, высоких концентраций хлорида натрия, к замораживанию, кислотам, рН ниже 7,0, к действию протеолитических ферментов ЖКТ, длительно сохранятеся в воде, в консервах – 6-8 месяцев.

Эпидемиология.

Естественная среда обитания клостридий – кишечник травоядных животных, человека, рыб, ракообразных, моллюсков.

Источник инфекции: здоровый человек и животные.

Механизм:
*	фекально-оральный (путь – алиментарный);
*	контактный (путь – прямой контактный через раневую поверхность, а

ботулотоксин способен проникать через неповрежденную кожу и слизистые).

Факторы передачи: пищевые продукты (в консервированных продуктах наличие самого возбудителя не обязательно, ботулотоксин может располагаться в продукте в виде очагов, не изменяя его органолептические свойства), почва, пыль, предметы обихода.

В зависимости от путей заражения различают:

*	пищевой ботулизм;
*	раневой ботулизм;
*	ботулизм грудных детей – в возрасте 3-20 недель при попадании спор или
вегетативных форм с пищей ребенка (с молоком, особенно при искусственном вскармливании);
*	неопределенно классифицируемый ботулизм (у детей старше 1 года и у

взрослых, не связано с употреблением в пищу и попаданием через раны).

Патогенез и клинические особенности ботулизма.

Пищевой ботулизм – ботулотоксин, попадая в ЖКТ, проникает в кровь, поражает нервную систему, действуя на мотонейроны спинного мозга и ядра продолговатого мозга (III, IY, YI пары черепномозговых нервов), вызывая нарушение передачи возбуждения с нерва на мышцу, действуя на сосуды (сужение с последующим парезом и повышение ломкости).

Инкубационный период: от нескольких часов до 8-10 дней.

Клиника: заболевание может начинаться с жалоб на «туман» или «сетки» пред глазами, двоение предметов (диплопия), боли в животе, ощущение тяжести в желудке, рвота, общая интоксикация, возможно расстройство стула, жалобы нарушение глотания, осиплость и потеря голоса, головная боль, паралич дыхательного центра, смерть. Летальность 60-80 %.

Иммунитет.

Постинфекционный иммунитет не формируется, так как иммунная доза токсина превышает летальную.

Микробиологическая диагностика.

Исследуемый материал:

*	для определения возбудителя – рвотные массы, промывные воды желудка,
кал, секционный материал, остатки пищевых продуктов;
*	для определения ботулотоксина – кровь, моча, рвотные массы, промывные

воды желудка, пищевые продукты.

1.Бактериоскопический метод.

2.Бактериологичекий метод.

3.Биологический метод – определение ботулотоксина в РБН.

4.Серологический метод – РПГА, ИФА.

Профилактика.

Неспецифическая: соблюдение технологии обработки продуктов (консервы автоклавируют 3040 мин при температуре 1200C), в продукты вносятся ингибиторы (нитриты).

Специфическая: по экстренным показаниям лицам, употреблявшим в пищу зараженные продукты, но еще не заболевшим, назначают поливалентную противоботулиническую сыворотку и ботулинический анатоксин, затем типовые противоботулинические сыворотки по мере установление типа токсина.

Активная иммунизация проводится работникам лабораторий, военнослужащим и лицам, чья профессия связана с контактом с ботулотоксином.

Лечение.

Неспецифическое: промывание желудка, дезинтоксикационные мероприятия, антибиотики (пенициллин, тетрациклин).

Специфическое: срочное введение поливалентной противоботулинической (А, В, Е) сыворотки в дозе 5-10 тыс. МЕ, внутривенно или внутримышечно, после установления типа токсина – моносыворотки.

ТЕМА ЛЕКЦИИ: «Возбудители дифтерии и коклюша.»

Дифтерия (от греч. diphtheria – кожа, пленка) – острое инфекционное заболевание, характеризующееся токсическим поражением сердечно-сосудистой и нервной систем, а также специфическим фибринозным (дифтеритическим) воспалением в месте входных ворот.

Историческая справка.

Возбудитель дифтерии был открыт в 1883 г. Э. Клебсом в срезах дифтерийных пленок. В 1884 г. Ф. Леффлер выделил его в чистой культуре. В 1888 г. Э. Ру и А. Йерсен получили дифтерийный

токсин, а в 1895 г. Э. Беринг и Э. Ру независимо друг от друга получили противодифтерийную сыворотку, которую впервые для лечения дифтерии применил в 1897 г. П. Эрлих. В 1923 г. Г. Рамон разработал технологию получения дифтерийного анатоксина. В России Г.Н. Габричевский применил противодифтерийную сыворотку с лечебной целью и организовал ее производство.

Таксономия.

Семейство – Corynebacteriaceae Род – Corynebacterium

Вид – C. diphtheriae

Помимо возбудителя дифтерии в род Corynebacterium входят 20 видов, которые широко распространены в окружающей среде – воздухе, почве, воде, пыли, пищевых продуктах, а также большинство из них являются облигатными паразитами кожи, слизистых оболочек верхних дыхательных путей, ЖКТ и мочеполового тракта, условно-патогенными для человека и животных. Наиболее часто со слизистой оболочки носоглотки, с эпителия влагалища, а также из различных ран выделяют следующие виды: C. pseudodiphthericum (палочка Хофманна), С. хerosis и C. ulcerans (общее название дифтероиды=ложные дифтерийные палочки).

Морфология и тинкториальные свойства.

Прямые или слегка изогнутые палочки размером 0,3-0,8×1-6 мкм, спор не образуют, неподвижны, имеют микрокапсулу (в ее состав входит корд-фактор). Характерно взаимное расположение бактерий в мазке – под углом друг к другу в виде букв V, X, L, Y (неполное расхождение при делении). Ложные дифтерийные палочки располагаются параллельно друг другу. В толстых мазках располагаются в виде «пучка булавок» (от сюда произошло название коринебактерий: от греч. kоryne – булава). Булавидные утолщения на концах связаны с наличием зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста) – гранулы полиметафосфата. Могут образовывать фильтрующиеся и L-формы.

Грамположительные микроорганизмы. При окраске по методу Нейссера цитоплазма окрашивается в желтый цвет, а зерна волютина – в синий. По методу Леффлера (метиленовым синим) цитоплазма – голубая, зерна волютина – синего цвета. Также используется окраска флюорохромом – корифосфином с последующей люминисцентной микроскопией (цитоплазма дает желто-зеленое свечение, а зерна волютина – коричнево-красное).

Культуральные свойства.

Возбудители дифтерии – факультативные анаэробы, оптимальная температура их культивирования 370С, рН 7,3-8,0, длительность (8)12-24 часа.

Требовательны к питательным средам (не способны расщеплять белки до аминокислот), для роста необходимо наличие аминокислот, минеральных веществ и металлов.

Для культивирования применяются следующие среды:

Среда Ру (свернутая лошадиная сыворотка) и Леффлера (свернутая лошадиная сыворотка с добавлением глюкозы) – рост в виде серовато-кремовых сухих морщинистых колоний по типу «шагреневой кожи».

Среда Бучина с хинозолом – рост в виде плоские темно-синие колонии.

Дифференциально-диагностическими являются среды с теллуритом (растут медленнее – 24-48 часов):

Наиболее часто используют глицериновокровяную среду с теллуритом (Клауберг II).

Сывороточно-теллуритовый агар с цистином (Тиндаль) и другие.

На теллуритовых средах C. diphtheriae образует серовато-черные колонии, что обусловлено восстановлением теллурита до металлического теллура, имеющего черный цвет. Дифтероиды теллурит не восстанавливают.

Биохимическая активность.

Дифтерийный палочки малоактивны. Каталазоположительны. Сбраживают с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу, некоторые варианты ферментируют декстрин, крахмал и гликоген, не разлагают сахарозу, лактозу и маннит. Не гидролизируют мочевину (проба Закса отрицательная). Разлагают цистеин с образованием сероводорода (проба Пизу положитеьная – коричневый ореол вокруг посева «уколом» за счет образования сернистого свина). Индол не образуют.

На основании комплекса культуральных, биохимических и патогенетических свойств вид C. diphtheriae разделяется на 4 биовара: mitis, belfanti, gravis, intermedius.

Биовар mitis (легкий) характеризуется свойствами:

Не ферментирует крахмал, гликоген и декстрин;

Восстанавливает нитраты в нитриты;

На средах с теллуритом образует мелкие (1-2 мм) гладкие блестящие полупрозрачные черные колонии с ровным краем;

На жидкой среде дает равномерное помутнение и порошкообразный осадок;

На кровяных средах дает зону гемолиза;

Малотоксичен;

Вызывает легкую спородическую заболеваемость.

Биовар belfanti:

Сходен с биоваром mitis, но не восстанавливает нитраты (однако этот тест необязателен для идентификации, поэтому редко выделяют данный биовар)

Биовар gravis (грубый) характеризуется следующими свойствами:

Ферментирует крахмал, гликоген и декстрин;

Восстанавливает нитраты в нитриты;

На средах с теллуритом формирует крупные (2-3 мм) сухие матовые плоские серо-черные колонии, приподнятые в центре, с радиальной исчерченностью и неровным краем (напоминают маргаритку);

На жидкой среде образуется пленка и крупнозернистый осадок (надосадочная жидкость прозрачная);

На кровяных средах не дает гемолиз;

Обладает выраженными токсигенными свойствами;

Выделяется от больных с тяжелой формой дифтерии, вызывает групповые вспышки.

Биовар intermedius трудноотличим от gravis, т.к. по биохимическим и культуральным свойствам сходен с биоваром gravis:

Не ферментирует крахмал (поэтому некоторые считают больше похожим на биовар mitis);

Расщепляет гликоген и декстрин;

На средах с теллуритом образует мелкие (< 1 мм) сухие матовые серо-черные колонии с неровным краем;

На жидкой среде дает помутнение с последующим образованием мелкозернистого осадка;

Гемолиз на кровяных средах отсутствует.

Дифференциация дифтерийной палочки от дифтероидов.

Вид	Гл	Сах	Кр	Ге		П	П	Восстанов
коринебак	юкоза	ароза	ахмал	молиз	роба		роба	ление нитратов
терий					Пизу		Закса
C.	+	–	–	+		+	–	+
diphtheriae mitis
belfanti	+	–	–	+		+	–	–
gravis	+	–	+	–		+	–	+
intermedius	+	–	–	–		+	–	+
C. pseudo-	–	–	–	–		–	+	+
diphthericum
С. хerosis	+	+	–	–		–	+	+
C. ulcerans	+	–	+	+		+	+	–

Антигенная структура.

О-антиген – групповой, липополисахарид клеточной стенки, термостабильный.

К-антиген – типовой (около 58 сероваров), представлен капсульными нуклеопротеидами, термолабильный.

На практике серотипирование не применяется, чаще применяется фаготипирование.

Факторы патогенности.

Токсины. Дифтерийная палочка выделяет мощный экзотоксин (гистотоксин), по силе занимающий 3-е место после ботулинического и столбнячного. Дифтерийный токсин оказывает цитотоксическое действие, а также обладает дермонекротическими и гемолитическими свойствами. Токсин синтезируется в виде неактивного предшественника – единого полипептида с молекулярной

массой 61-63 кД. Активируется под действием собственной протеазы (либо протеаз макроорганизма), которая разрезает полипептид на два связанные между собой пептида: А (21 кД) и В (39 кД). Пептид В выполняет акцепторную функцию – распознает рецептор, связывается с ним, формирует внутримембранный канал, через который проникает в клетку пептид А. Пептид А – это фермент, который блокирует белковый фактор элонгации ЕF-2, что приводит к подавлению синтеза белка на рибосомах (клеток миокарда, ЦНС, почек и надпочечников). Подавление белкового синтеза

вклетках миокарда и нервной системы приводит к демиелинизации нервных волокон и развитию парезов и параличей. Дифтерийный токсин синтезируют только C. diphtheriae, лизогенные toxпрофагом, несущим ген, кодирующий структуру токсина. Утрата клеткой профага или мутации в toxопероне делают клетку малотоксичной.

Ферменты: гиалорунидаза, нейроминидаза, фибиринолизин, лецитиназа – факторы инвазии.

Структурные и химические компоненты клетки: пили I порядка (способствуют адгезии на чувствительных клетках), микрокапсула (обеспечивает устойчивость к фагоцитозу), Cor-фактор (нарушает фосфорилирование на митохондриях) и бактериоцины (корицины) – синтез кодируется плазмидами.

Резистентность.

Для дифтерийных палочек характерна значительная устойчивость во внешней среде Хорошо сохраняется в высохших пленках– 3-4 месяца, на мягких игрушках – 3 месяца, в пыли – до 5 месяцев,

вводе и молоке – 20 дней, на предметах обихода и одежде – до 15 дней. Под действием прямого

солнечного света палочки выживают несколько часов. Чувствительны к повышенной температуре (при нагревании до 600С погибают за 10 минут, при кипячении наступает мгновенная гибель), дезсредствам в рабочих концентрациях (5% раствор карболовой кислоты обеспечивает инактивацию

через 1 минуту, Н2О2 – 10 минут), пенициллину, тетрациклину, эритромицину.

Эпидемиология.

Антропоноз.

Источник инфекции – больной человек или бактерионоситель токсигенных C. diphtheriae.

Механизмы передачи инфекции:

Аэрогенный (пути – воздушно-капельный и воздушно-пылевой);

Контактный (путь – непрямой контактный);

Фекально-оральный (путь – алиментарный – чаще через молочные продукты).

Входные ворота: слизистые оболочки носа, зева, гортани, трахеи, бронхов, конъюктивы, наружных половых органов, раневая поверхность.

Инкубационный период – 2-10 дней.

Патогенез и клинические особенности.

Возбудители адсорбируются на чувствительных клетках, колонизируют эпителий и секретируют дифтерийный экзотоксин, который инициирует развитие фибринозного воспаления: некроз эпителия, расширение сосудов с нарушением их проницаемости, отек тканей и выход фибриногена из сосудов. Фибриноген под влиянием тканевого тромбопластина, некротизированных тканей и атмосферного кислорода свертывается. На поверхности образуется фибринозная пленка. На многослойном плоском эпителии (слизистая зева, небных дужек, язычка, твердого и мягкого неба, миндалин) – плотная белая или серовато-белая, спаянная с подлежащими тканями, трудно снимается, обнажая кровоточащую поверхность. Процесс сопровождается регионарными лимфаденитами и повышением температуры до 38-400С. Системное действие токсина приводит к развитию токсический миокардита, поражению канальцевого аппарата почек, некрозу коркового слоя, в нервной системе – цитолиз нервных клеток с развитием параличей (мягкого неба, диафрагмы, сердца, блуждающего нерва). Смерть при дифтерии может наступить от раннего или позднего паралича сердца и диафрагмы, а также в результате истинного крупа (закупорка дыхательных путей оторвавшимися пленками).

Иммунитет.

Приобретенный иммунитет – стойкий напряженный антитоксический.

Микробиологическая диагностика.

Исследуемый материал – слизь из зева и носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь.

1.Бактериоскопический метод.

2.Бактериологический метод (основной). Определение токсигенности C. diphtheriae:

A.биологическая проба на животных – при внутрикожном введение морским свинкам культуры дифтерийной палочки – некроз в месте введения, последующая гибель животного;

B.заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);

C.внесение в культуру клеток (оказывает ЦПД);

D.ИФА;

E.использование ДНК-зондов для обнаружения tox-оперона в геноме;

F.РДП по Илеку и Оухтерлони – основывается на способности токсина и антитоксина диффундировать в агар и образовывать по ходу диффузии усы, полосы, стрелы преципитации.

3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, проба Шика. 4. Экспресс-диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.

5. Молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена).

Проба Шика – внутрикожное введение микродоз дифтерийного токсина (1/40 Dlm 0,2 мл). Через 48 часов появляется покраснение и инфильтрат, что свидетельствует об отсутствии антитоксических антител, при их наличии реакция не возникает.

Специфическая профилактика.

Проводится плановая вакцинация в соответствии с национальным календарем прививок вакцинами АКДС и анатоксинами АДС, АДС-М.

Вакцинация проводится АКДС трехкратно в возрасте 3-4,5-6 месяцев. Первая ревакцинация поводится АКДС в 18 месяцев.

Вторая ревакцинация – в 7 лет АДС, АДС-М.

Третья – в 14 лет АДС, АДС-М.

Последующие ревакцинации АДС, АДС-М – каждые 10 лет до 56-летнего возраста. Экстренная профилактика – введение АД или АД-М одновременно с противодифтерийной

антитоксической сывороткой.

Специфическое лечение.

Внутримышечное введение противодифтерийной антитоксической сыворотки или Ig, содержащих не менее 2000 МЕ в 1 мл, в дозе 10000-40000 МЕ в зависимости от тяжести заболевания. При применении лошадиной сыворотки обязательно предварительное проведение кожной пробы и

последующее введение противодифтерийной сыворотки по Безредке.

(В Нью-Йорке стоит памятник собаке Балто, которая за 6 дней при 400С морозе преодолела расстояние в 700 миль и доставила сыворотку больным дифтерией детям).

Коклюш (от франц. coqueluche – петушиный крик, от лат. pertussis – сильный кашель) – это острое антропонозное инфекционное заболевание, характеризующееся катаральным воспалением верхних дыхательных путей и приступами спазматического кашля.

История открытия.

Возбудитель коклюша впервые выделили из мокроты больного ребенка бельгийский бактериолог Ж. Борде и французский ученый О. Жангу в 1900 г., в 1906 г. была получена чистая культура. 1911 г. Н. Ферри открыла В. bronchiseptica. В 1937 г. Эльдеринг и П. Кендрик и независимо от них У. Брэнфорд и Б. Славин выделили и изучили В. parapertussis.

Таксономия.

Семейство – Alcaligenaceae Род – Bordetella

Виды – B. рertussis (возбудитель коклюша) B. рarapertussis (возбудитель паракоклюша)

B.bronchiseptica (возбудитель бронхосептикоза у молодняка собак, кошек, кроликов, редко ОРЗ

учеловека)

B.avium (вызывает заболевания только у животных)

B. hinzii, B. holmesii (могут вызывать заболевания у больных СПИДом)

B. petrii

B. thrematum

Морфология и тинкториальные свойства.

Кокковидные палочки, мелкие (размеры 0,2-0,5×0,5-2 мкм), неподвижные (B. bronchiseptica – перитрихи), спор не образуют, B. рertussis имеют нежную микрокапсулу. В мазках располагаются

поодиночке или попарно. Грамотрицательные, характерно биполярное окрашивание при окраске толуоидиновым синим (наличие на полюсах гранул, содержащих липоиды).

Культуральные свойства.

Строгие аэробы, хемоорганогетеротрофы, оптимальные условия роста: температура 370С, рН 6,8-7,4, повышенная влажность. B. рertussis требовательны к питательным средам, не растут на МПА, так как рост ингибируется жирными кислотами, для их нейтрализации в среды добавляют адсорбенты (древесный и активированный уголь, ионообменные смолы, кровь, альбумин). B. pertussis – гемоглобильнофильный микроорганизм, поэтому хорошо растет на картофельно- глицериново-кровяном агаре (среда Борде-Жангу) и полусинтетическом казеиново-угольном агаре (КУА). В ЖПС B. pertussis образуют равномерное помутнение с последующим выпадением осадка (могут образовывать пленку). Колонии B. pertussis появляются через 72 часа (в среднем растут 3-5 дней) – сероватые мелкие, круглые с ровными краями, блестящие напоминают «капельки ртути» или «жемчуг», вязкой консистенции (рассматривают их с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа – выявляются колонии с характерным световым конусом). Через 3-4 суток культивирования на кровяном агаре появляется слабая зона гемолиза. При культивировании коклюшной палочки различают 4 фазы состояния с определенными морфологическими и биологическими свойствами:

I фаза (S-форма) – колонии круглые, выпуклые, влажные, вырастают Грам– овоидные палочки (содержат специфический О-АГ, коклюшный токсин и гемагглютинины);

II и III фазы – переходные к R-формам, колонии плоские, слизистые с желтоватым оттенком, определяется полиморфизм микроорганизма – овоидные и кокки (О-АГ сохранены, но их количество снижено);

IV фаза (R-формы) – колонии уплотнены с желтым или зеленым пигментом, крупные до 3 мм (О-АГ утрачен, отсутствуют вирулентные свойства).

B. bronchiseptica и B. parapertussis растут на МПА, для них характерен быстрый рост (24-48 часов) и для B. parapertussis образование коричневого пигмента.

Биохимические свойства.

Малоактивны, каталазоположительные, оксидаза ±, B. pertussis не ферментируют сахара (остальные расщепляют глюкозу и лактозу до кислоты), не образуют индол, не восстанавливает нитраты (исключение, B. bronchiseptica), не содержат тирозиназу и уреазу (исключение, B. parapertussis: разлагает тирозин, при этом среда окрашивается в коричневый цвет, и мочевину – проба Закса положительная).

Антигенная структура.

О-АГ – соматический термостабильный, родо-, видо- и типоспецифический, состоит из 14 компонентов:

* родовой – 7 фактор;

* видовые – B. pertussis 1, B. parapertussis 14 и B. bronchiseptica 12 факторы.

*типовые – B. pertussis 2, 3, 4, 5, 6, 13 (наиболее часто встречаются серовары 2,0; 3,0; 2,3; 0,0);

B. parapertussis 8, 9, 10 и B. bronchiseptica – 8, 9, 10, 11, 13.

К-АГ у B. pertussis – термолабильный, агглютиногены.

Факторы патогенности.

Токсины:

Пертуссин-токсин (коклюшный токсин=гистаминсенсибилизирующий фактор= лимфоцитозстимулирующий фактор) – термолабильный белок, представлен двумя субъединицами –

А(активный центр) и В (связывающий центр), взаимодействие с клеточной стенкой происходит при помощи субъединицы В, опосредующей проникновение субъединицы А в цитоплазму – увеличивает содержание аденилатциклазы в клетках респираторного тракта, что приводит к неконтролируемому синтезу цАМФ (ингибированию активности клеточных факторов, извращенное функционирование клеток), также вызывает повышение проницаемости сосудов, увеличение чувствительности к гистамину и серотонину, гипогликемию (за счет повышения синтеза инсулина), стимулирует миграцию лимфоцитов, моноцитов и подавляет фагоцитоз.

Внеклеточная аденилатциклаза – гемолизин, еще более усиливает синтез цАМФ, также подавляет хемотаксис фагоцитов и фагоцитоз (внутриклеточное переваривание).

Трахеальный цитотоксин вызывает гибель и десквамацию мерцательного эпителия дыхательного тракта, тем самым раздражая нервные окончания.