24. Реакция преципитации.
Р-ция преципитации – осаждение мелкодисперсного или растворимого Аг под действием специфических Ат с образованием преципитата.
Отличия от реакции агглютинации:
Аг мелкий
Р-ция преципитации может проходить в жидкой фазе, тогда образуется кольцо или в геле
Реакция высокой чувствительности
Внизу в пробирке всегда находится Ат или сыворотка
Преципитация в геле (агаре):
А) метод встречной иммунодиффузии по Оухтерлони
Эта реакция проводится в агаровом геле. В слое геля равномерной толщины на определенном расстоянии др. от др. вырезают лунки и заполняют их Аг и иммунной сывороткой соответственно. После этого Аг и Ат диффундируют в гель, встречаются др. с др. и образуют иммунные комплексы, которые определяют как линии преципитации. Эту реакцию можно использовать для определения неизвестных Аг и Ат, а также для проверки сходства между различным Аг: если Аг идентичны – линии преципитации сливаются, если нет - линии преципитации пересекаются, если Аг частично идентичны – формируется «шпора».
Б) радиальная иммунодиффузии (метод Манчини)
В расплавленный агаровый гель (температура его не должна превышать 56 градусов) добавляют Ат и наносят гель равномерным слоем на стекло. В геле вырезают лунки и вносят в них стандартный объем различных по концентрации растворов Аг. Во время инкубации Аг радиально диффундируют из лунки и, встретившись с Ат, образуют кольцо преципитации. До тех пор пока в лунке сохраняется избыток Аг, происходит постепенное увеличение диаметра кольца преципитата. Этот метод используется ждя определения Аг или Ат в исследуемом растворе, например, для определения концентрации разных классов иммуноглобулинов в сыворотки крови.
Иммуноэлектрофорез: предварительно электрофоретически разделяют смесь Аг, затем в канавку, идущую вдоль направления движения белков, вносят преципитирующую антисыворотку. Аг и Ат диффундируют в гель навстречу др. др., взаимодействуя, они образуют дугообразные линии преципитации.
25. Иммунолюминесцентный метод и его применение в диагностике инфекционных заболеваний.
Реакция иммунофлуоресценции(РИФ) – это сложная серологическая реакция с участием Аг (?) и Ат, меченных флюорохромами – ФИТЦ - это флуоресцеин-изотиоцианат.
Прямой метод: обработка материала на предметном стекле меченой флюорохромом диагностической сывороткой. Если на стекле был искомый Аг, Ат фиксируются на Аг и после отмывки стекла от не связавшихся Ат Аг выявляется в люминесцентном микроскопе по свечению
Непрямой метод основан на использовании антивидового Ат (антиглобулиновой сыворотки)
Реакции прямой и непрямой иммунофлуоресценции широко применяются для экспресс-диагностики многих инфекционных заболеваний, в частности, особо опасных инфекций
Используется в основном для обнаружения микробов, светящихся в поле зрения люминесцентного микроскопа, можно выявить и Ат к микробным Аг.
РИФ удачно сочетает быстроту исследования с получением инфориации не только о наличии в материале некого микроба, но и его видовой принадлежности. Этот экспресс-метод серологической индикации и идентификации микробов позволяет исследовать не только чистые культуры, но и различные биологические образцы от больных(кровь, ликвор, гной, моча), в которых могут помимо патогенных содержаться посторонние микроорганизмы.
