26. Р-ции связывания комплимента. Р-ции иммунного гемолиза.
Р-ция связывания комплимента (РСК) – сложная серологическая реакция, в которой участвует 2 системы:
а) опытная (тест-система) – может быть неизвестен как Аг, так и Ат
б) индикаторная = гемолитическая, состоит из Аг – эритроциты барана (3% взвесь) и гемолитическая сыворотка
Механизм РСК:
Тест-система Аг? Ат? Индикаторная
Аг+гонококовый Аг Аг – эритроциты барана
Ат? Ат- гемолитическая сыворотка
Комплимент («С»)
Результаты:
В пробирках наблюдается гемолиз, следовательно комплимент находится в индикаторной гемолитической системе, т.е. в 1 опытной системе нет комплимента Аг-Ат, у пациента нет Ат, не болеет
Наблюдается задержка гемолиза, т.е. комплимент не попал до индикаторной системы, т.к. весь связался в 1 опытной системе, у пациента есть Ат, слндователно он болен. Отсутствие гемолиз –
«+» РСК
Титр «С»(комплимент) - такое максимальное его развидение или минимальное кол-во, при котором происходит гемолиз эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки, температура 37 градусов, время 1 час
Рабочая доза «С»(комплимент) на 25-30% выше титра
Реакции иммунного гемолиза: в результате разрушения эритроцитов из них выходит гемоглобин, образуется прозрачная красная жидкость, которая называется «лаковой кровью». Если не гемоглобина – в пробирке осадок эритроцитов
Компоненты реакции:
Аг – эритроциты барана
Ат – гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана
Комплимент – свежевзятая сыворотка крови морской свинки или сухой препарат в ампуле.
Практическое применение реакции гемолиза:
-для определения титра комплимента исследуемых сывороток при излучении иммунного статуса пациента
-как индикаторная система в РСК
27. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип, применение для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний (ифа)
Реакция иммуноферментного анализа - это сложная серологическая реакция с участием Ат и Аг, меченных ферментами
Твердофазный ИФА проводят в полистироловых планшетах (так называемая «твердая фаза» - 96 лунок в каждой планшете), при постоновке реакции необходимо на каждом этапе отмывать непрореагировавшие компоненты
При определении Ат в лунки, на которых сорбированы Аг, вносят исследуемую сыворотку крови, затем антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом. После добавления каждого компонента тест-системы инкубируют, затем их содержимое удаляют и промывают лунки специальными растворами. Проявляют реакцию, добовляя субстрат для фермента. В присутствии фермента цвет субстрата изменяется, для чего фермент-субстратный комплекс подбирают так, чтобы образующийся в реакции продукт был бесцветен. Т.о. при положительной реакции наблюдается изменение цвета раствора.
Для определения Аг твердофазный носитель сенсебилизируется, т.е. дно лунок покрывают слоем Ат, затем в эти лунки последовательно вносятся исследуемый материал (Аг) и сыворотка к Аг, меченная ферментом. Интенсивность окрашивания обратно пропорциальна концентрации определяемого Аг или Ат.
