Порядок виконання роботи

1. Виконати посів за методом Коха суспензії зі зразка ґрунту, що розведений в 1000, 10000 раз на тверде вівсяне живильне середовище, МПА і середовище Гаузе. Результати інокуляції й підрахунок мікроорганізмів зробити на наступному занятті:

• наважку підготовленого ґрунту (1 г) поміщають у чисту ступку з невеликою кількістю стерильної води і розтирають гумовою маточкою чи пальцем у гумовій рукавичці приблизно 5 хвилин. Підготовлену суспензію переносять у колбу з 100 мл стерильної водопровідної води. Готують розведення ґрунтової суспензії, для чого 1 мл суспензії переносять послідовно в ряд пробірок з 9 мл стерильної водопровідної води;

• на поверхню твердого й підсушеного середовища наносять краплю ґрунтової суспензії визначеного розведення й за допомогою стерильного скляного шпателя розподіляють по всьому агару. Якщо висів проводять, починаючи з великих розведень, то використовують нову стерильну піпетку і новий шпатель для кожного розведення;

• засіяні чашки Петрі перевертають нагору дном і поміщають у термостат із визначеною температурою, яка сприятлива для розвитку мікроорганізмів, що враховуються;

• підрахунок колоній, що виросли, проводять через визначений час після посіву (3–5 доби). На МПА звичайно на 2–3 добу інкубації враховують спорові й безспорові форми бактерій. На середовищі Гаузе на 5–7 добу враховують колонії актиноміцетів, на сусло-агарі на 5–7 добу – колонії грибів і дріжджів;

• колонії, як правило, рахують, не відкриваючи чашки Петрі, у прохідному світлі. Для зручності дно чашки поділяють на сектори, підраховують кількість колоній у кожнім секторі, кожну відлічену колонію позначають крапкою (маркером) із нижньої сторони чашки Петрі й результати підсумовують. Для підрахунку колоній зручно користатися спеціальним приладом із лічильником;

• точність методу залежить від числа підрахованих колоній: кращим розведенням вважають те, у висіві якого на твердому живильному середовищі виростає від 50 до 150 колоній;

• підрахувавши кількість колоній на всіх паралельних чашках, обчислюють їхнє середнє число на одній чашці і потім роблять перерахування для визначення вмісту мікроорганізмів в 1 г ґрунту за формулою:

(8.1)

де N – кількість клітин у 1 г ґрунту; a – середня кількість колоній на чашці; b – розведення, із якого зроблено посів; c – кількість крапель у 1 мл суспензії.

2. Приготувати препарат із добової культури дріжджів роду Saccharomyces

і підрахувати кількість клітин у вихідній суспензії:

• мікробіологічною петлею краплю суспензії дріжджів наносять у центр рахункової камери. Рахункову камеру покривають покривним склом, ретельно притираючи його з країв до утворення ньютонівських кілець (кольорових смуг);

• підрахунок клітин дріжджів робити (із збільшенням мікроскопа: окуляр 10–15х, об'єктив 20–40х) у 20 малих квадратах, у 3–4 пробах досліджуваної суспензії. Загальне число підрахованих клітин мікроорганізмів повинне бути не менш 600, тому беруть 3–4 проби з досліджуваної суспензії для монтажу камери;

• потім розраховують середнє число мікробних клітин в одному малому квадраті і роблять перерахування на вміст у 1 мл вихідної суспензії за формулою:

(8. 2)

де N – число клітин у 1 мл суспензії; а – середнє число клітин у малому квадраті сітки; h – глибина камери в мм, s – площа малого квадрата сітки в мм ²; n – розведення вихідної суспензії; 1000 – коефіцієнт перерахування мм³ у мл.

3. Провести дослідження мікрофлори повітря методом Коха. Цей метод заснований на седиментації, зв'язаний з осіданням бактеріальних клітин під впливом сили ваги на поверхню агару відкритої чашки Петрі. Він дає представлення в основному про якісний зміст мікроорганізмів. У залежності від поставленої задачі з дослідження мікрофлори повітря може проводитися як визначення загальної бактеріальної зараженості повітря, так і вивчення вмісту санітарно-показових мікроорганізмів, а також наявності патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів.

Для вивчення мікрофлори повітря зробити посів із повітря на МПА й СА живильні середовища у чашки Петрі.

Загальну кількість бактерій, що зустрічаються в повітрі, вираховують за ростом колоній мезофільних мікроорганізмів на МПА, проби відбирають на рівні подиху сидячої людини.

Чашки з МПА експонують 5–10–15 хвилин у залежності від передбачуваного бактеріального забруднення. Орієнтовно відповідно до перерахунку за Омелянським на поверхню 100 см² агару осідає за 5 хвилин така кількість бактерій, що міститься в 10 л повітря.

Результати всіх посівів розглянути на наступному занятті, та проаналізувати кількісний і якісний склад мікрофлори повітря з різних місць забору.