Санитарный кодекс наземных животных МЭБ том 1

Глава 4.6.– Отбор и обработка семени быков, мелких жвачных и хряков

3.Требования к хранению семени

Экспортное семя хранят отдельно от другого генетического материала, не отвечающего требованиям настоящей главы, в жидком азоте, расфасованным в стерильные/очищенные флаконы.

Пипетки с семенем должны быть запечатаны, промаркированы с помощью кода в соответствии с

международными стандартами Международным комитетом по контролю улучшенного животноводства (CICPE)1.

Перед отправкой на экспорт пипетки и пробирки должны быть этиктованы и вновь помещены в новые или простерилизованные флаконы или контейнеры с жидким азотом под ответственностью

официального ветеринарного врача. Официальный ветеринарный врач обязан проверить содержимое флаконов или контейнеров, после чего опечатать их официальной номерной печатью и сопроводить международным ветеринарным сертификатом с указанием их содержимого и номера официальной печати.

4.Деление спермодоз

Оборудование, используемое для разделения доз, должно подвергаться очистке и дезинфекции при работе с материалом от каждого очередного животного, согласно инструкциям владельца лицензии используемого оборудования.

В случае добавления в семя семенной плазмы или одного из ее составляющих после деления спермодоз перед замораживанием, плазма должна быть получена от животных с равным или более высоким санитарным состоянием.

1 Смотри International agreement of recording practices (с текстом документа можно ознакомиться на веб-сайте: www.icar.org)

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 142

ГЛАВА 4 . 7 .

ОТБОР И ОБРАЩЕНИЕ С ЭМБРИОНАМИ СКОТА И НЕПАРНОКОПЫТНЫХ, ОТОБРАННЫМИ I N

V I V O

Статья 4.7.1.

Цели контроля

Целью официального санитарного контроля эмбрионов, отобранных in vivo, которые предназначены для международной торговли, является гарантия отсутствия в них патогенных организмов, которые эмбрионы могут носить, и недопущение заражения приемных самок и их потомства.

Статья 4.7.2.

Требования, предъявляемые к бригаде по отбору эмбрионов

1.Бригада по отбору эмбрионов – это группа квалифицированных техников, включающая минимум одного ветеринарного врача, функцией которой является сбор, обработка и хранение эмбрионов. Она должна соответствовать следующим требованиям:

2.Бригада должна обладать лицензией на работу, выданной статуарным (лицензирующим) орагном.

Бригада находится под непосредственным руководством входящего в нее ветеринарного врача.

3.Ветеринарный врач бригады несет ответственность за всю работу бригады, в первую очередь в том, что касается проверки зоосанитарного состояния доноров, соблюдения санитарных требований при обращение с донорами, хирургическом вмешательстве, а также при проведении дезинфекционногигиенических процедур.

4.Персонал бригады должен быть хорошо обучен технике и принципам профилактики болезней животных и строго выполнять все полагающиеся правила гигиены в целях недопущения заражения.

5.В распоряжении бригады по отбору должны находиться оборудование и материалы, необходимые для:

а) отбора эмбрионов;

б) обработки эмбрионов в стационарной или передвижной лаборатории;

в) хранения эмбрионов.

Нахождение оборудования в одном месте не обязательно.

6.Бригада по отбору эмбрионов должна вести регистрационный журнал, хранящийся минимум два года с даты экспортирования эмбрионов, предъявляемый при проверках Ветеринарными органами (властями).

7.Бригада по отбору эмбрионов должна ежегодно подвергаться регулярной проверке официальным ветеринарным врачом для контроля соблюдения санитарно-гигиенических процедур при отборе, обработке и хранении эмбрионов.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 143

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

Статья 4.7.3.

Требования, предъявляемые к лабораториям, специализирующимся на манипуляциях с эмбрионами

Лаборатория по работе с эмбрионами, используемая бригадой по отбору эмбрионов, может быть стационарной или передвижной. Она определяется как заведение, где эмбрионы выделяют из среды отбора, подвергают исследованию и другим надлежащим обработкам (как то промывке) и исследованию перед замораживанием и помещением на хранение.

Стационарная лаборатория может представлять собой либо часть единицы, специально созданной для отбора и обработки эмбрионов, либо часть какого-либо корпуса, оборудованную для этой цели. Она может располагаться в пункте, где содержатся самки-доноры. В любом случае лаборатория должна быть физически отделена от животных. Как в стационарной, так и в передвижной лаборатории "чистый" сектор (где ведутся манипуляции с эмбрионами) должен быть надежно изолирован от "грязного" сектора (в котором содержатся животные).

Помимо этого:

1.Лаборатория по работе с эмбрионами должна находиться под постоянным контролем ветеринарного врача бригады и регулярным контролем официального ветврача.

2.Будучи подготовлены для помещения в ампулы, флаконы или пипетки, экспортные эмбрионы не должны более подвергаться манипуляциям низшего санитарного уровня.

3.Лаборатория по работе с эмбрионами должна быть защищена от грызунов и насекомых.

4.Облицовочные материалы, использовавшиеся при внутренней отделке лаборатории, должны позволять проведение эффективной уборки и дезинфекции, которая проводится с регулярной частотой и в обязательном порядке перед началом и по окончанию каждой операции с экспортными эмбрионами.

Статья 4.7.4.

Требования к животным-донороам

1.Самки-доноры

а) Ветеринарные органы (власти) должны располагать сведениями о поголовье / стаде, из которого поступили самки-доноры.

б) самки-доноры не должны поступать из поголовья / стада, на которое наложены ветеринарные ограничения по причине присутствия какой-либо списочной болезни или возбудителя (см. Гл.

1.2.Наземного кодекса), которые не входят в категорию 1 IETS* видов эмбрионов, подвергаемых отбору (см. Ст. 4.7.14. и сноску 1).

в) Перед отбором самки-доноры должны подвергаться клиническому осмотру ветеринарным врачом бригады (или другим ветврачом в присутствии ветврача бригады), по результатам которого быть признаны ветврачом бригады благополучными по клиническим признакам

болезней.

2.Доноры, давшие семя

а) Семя, используемое для искусственного осеменения самок-доноров, должно быть получено и обработано согласно положениям Главы 4.6.

б) В случае смерти донора, давшего семя, использованное для осеменения самок-доноров с целью производства эмбрионов, или когда его санитарное состояние по одной или нескольким определенным инфекционным болезням (от которых требуется защита) не было известно во время отбора семени, могут потребоваться дополнительные исследования осемененных самокдоноров после отбора эмбрионов для удостоверения, что указанные болезни не были им

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 144

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

переданы. Другой метод может заключаться в исследовании аликвотной части семени, отобранного в тот же день.

в) В случае естественной случки или использования свежего семени, самцы должны удовлетворять санитарным требованиям, установленным в Главе 4.6. с учетом вида животных.

Статья 4.7.5.

Управление риском

В плане передачи болезней пересадка эмбрионов, отобранных in vivo, представляет собой метод передачи генетического материала животных, несущий низкий риск. Вне зависимости от вида животных процесс переноса эмбрионов делится на три этапа, определяющих окончательный уровень риска:

1.Первый этап, относящийся к болезням, не входящим в категорию 1 IETS* (см. Ст. 4.7.14.), касается вероятности риска заражения эмбрионов, который зависит от:

а) ветеринарно-санитарного положения экспортирующей страны и/или экспортной зоны;

б) зоосанитарного состояния поголовья / стада и самок-доноров, у которых отбирают эмбрионы;

в) патогенности возбудителей, от которых Ветеринарные органы (власти) импортирующей страны стремятся защититься.

2.На втором этапе ведется снижение риска с помощью международно признанных процедур обработки эмбрионов, которые определены в Руководстве IETS**. Эти процедуры являются следующими:

а) эмбрионы должны промываться минимум десятикратно при минимальном разведении 1/100 между каждой промывкой, а для перенесения эмбрионов между промывками каждый раз должна обязательно использоваться новая пипетка;

б) допускается групповая промывка исключительно эмбрионов, взятых у одной самки, и их число не должно превышать десяти в каждой промывке;

в) в случае, когда требуется проведение операций по инактивации или удалению вирусов (герпесвирус-1 крупного рогатого скота и вирус болезни Ауески, например), стандартная процедура промывки должна быть изменена путем дополнительной промывки раствором трипсина, как то указано в Руководстве IETS**;

г) после промывки пеллюцидную зону каждого эмбриона исследуют по всей поверхности при минимальном увеличении 50Х для признания ее неповрежденной и не имеющей никаких посторонних включений.

[Примечание: при пересылках к эмбрионам должен прилагаться аттестат, подписанный ответственным ветеринарным врачом бригады, в котором подтверждается проведение указанных процедур обработки эмбрионов.]

3.Третий этап, относящийся к болезням, которые не входят в категорию 1 классификации IETS* (см. Ст. 4.7.14.), от которых Ветеринарные органы (власти) импортирующей страны стремятся защититься,

касается средств снижения риска благодаря следующим операциям:

а) надзору после отбора за животными-донорами и поголовьем / стадом их происхождения в течение нормальной длительности инкубационного периода болезней, от которых требуется защититься, с тем чтобы ретроспективно определить санитарное состояние животных-доноров в период хранения эмбрионов в экспортирующей стране (в отношении животных тех видов, по которым возможна эффективная криоконсервация);

б) лабораторное исследование жидкостей отбора эмбрионов (ополаскивания), выбракованных эмбрионов или других образцов (например, крови) на предмет определенных патогенных возбудителей.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 145

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

Статья 4.7.6.

Требования, предъявляемые к отбору и хранению эмбрионов

1.Среды

Все биологические продукты животного происхождения, входящие в состав сред и растворов, которые используются для отбора, обработки, промывки и хранения эмбрионов, не должны содержать патогенных микроорганизмов. Среды и растворы, используемые для отбора и хранения эмбрионов, подвергают стерилизации принятыми способами, описанными в Руководстве IETS**, и подвергают манипуляциям в условиях, гарантирующих поддержание стерильности. Антибиотики следует добавлять в среды, используемые для отбора, манипуляции, промывки и хранения согласно рекомендациям Руководства IETS**.

2.Инвентарь

а) желательно, чтобы все оборудование, используемое для отбора, обработки, промывки, замораживания и хранения эмбрионов, было новым или предварительно простерилизовано согласно рекомендациям Руководства IETS**;

б) оборудование, которое эксплуатировалось, не должно пересылаться в другие страны для последующего использования бригадами по отбору.

Статья 4.7.7.

Дополнительные исследования и обработки

1.Импортирующая страна может потребовать исследования проб для подтверждения отсутствия патогенных организмов, которые могут передаваться через эмбрионы, отобранные in vivo, или удостоверения, что качество контрольных исследований, проведенных бригадой отбора (согласно рекомендациям Руководства IETS**), снижает риск до приемлемого уровня. В число проб могут входить:

а) Невалидные яйцеклетки/эмбрионы

Когда жизнеспособные эмбрионы с неповрежденной зоной пеллюцида, отобранные у одной самки, предназначаются на экспорт, все неоплодотворенные яйцеклетки и дефектные эмбрионы, или же пеллюцидная зона которых нарушена, полученные от той же самки, должны быть промыты (по стандартам Руководства IETS**) и обхединены в группу на случай последующего исследования, если такового потребует импортирующая страна. Допускается одновременная обработка и совместное хранение невалидных яйцеклетоки/эмбрионов, полученных от одной самки-донора.

б) Жидкости отбора

Жидкость помещают в стерильную и закрытую емкость, а если ее объем значителен – оставляют для осаждения на час. Поверхностную часть жидкости сливают, а 10-20 мл осадка, состоящего из осевших частиц, переносят в стерильный флакон. Если при отборе яйцеклеток/эмбрионов используется фильтр, все задержанные им частицы следует перенести в сохраняемую жидкость.

в) Жидкость промывки

Четыре последних слива при промывке яйцеклеток/эмбрионов должны быть собраны в один пул (Руководство IETS**).

г) Образцы

Все вышеперечисленные образцы должны храниться при 4 °С и быть исследованы в течение суток. При невозможности этого их следует хранить при температуре, равной или ниже минус 70 °С.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 146

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

2.В случае, когда процедура обработки жизнеспособных эмбрионов была изменена для проведения дополнительной промывки трипсином (см. пп. 2в Ст. 4.7.5.) – таковая процедура должна быть осуществлена согласно указаниям Руководства IETS**. Энзиматическая обработка требуется только тогда, когда имеется риск наличия патогенных возбудителей, в отношении которых IETS рекомендует проводить дополнительную обработку (напр., с добавлением трипсина). Следует принять к сведению, что эффективность такой обработки не всегда дает благоприятный результат, и трипсин нельзя считать дезинфектантом. Такая обработка может негативно сказаться на жизнеспособности эмбрионов (например, в случае с эмбрионами однокопытных, эмбриональная капсула которых может пострадать от энзимов).

Статья 4.7.8.

Требования, предъявляемые к хранению и транспортировке эмбрионов

1.Экспортные эмбрионы должны храниться в стерильных запаянных ампулах, флаконах или пипетках с соблюдением строгих гигиенических условий, в специально предназначенном для этого хранилище,

сертифицированном Ветеринарными органами (властями) экспортирующей страны, в котором угроза заражения эмбрионов исключена.

2.В случае отбора эмбрионов in vivo в одну и ту же ампулу, флакон или пипетку следует помещать эмбрионы, полученные от одной самки-донора.

3.По возможности и в зависимости от вида животных эмбрионы должны быть заморожены в жидком азоте и храниться в очищенных и продезинфицированных флаконах или жидкоазотных контейнерах с

соблюдением строгих гигиенических условий в сертифицированном хранилище.

4.Ампулы, флаконы или пипетки запаивают в момент замораживания (или непосредственно перед отправкой на экспорт, если криоконсервация невозможна), и этиктуют по стандартам, рекомендованным Руководством IETS**.

5.Перед отправкой в экспортирующую страну жидкоазотные контейнеры должны опечатываться в присутствии официального ветеринарного врача.

6.Эмбрионы не должны поступать на экспортную отправку до окончания заполнения ветеринарного сертификата.

Статья 4.7.9.

Процедуры микроманипулирования

В случае необходимости микроманипулирования эмбрионов, операция должна, по возможности, проводиться после обработок, описанных в пункте 2 Статьи 4.7.5., и согласно процедуре, описанной в Главе 4.9.

Статья 4.7.10.

Особые требования, предъявляемые к эмбрионам свиней

Поголовье происхождения не должно иметь клинических признаков везикулярной болезни свиней и бруцеллеза.

Методы криконсервации эмбрионов свиней с неповрежденной пеллюцидной зоной пока находятся на ранней стадии разработки.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 147

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

Статья 4.7.11.

Особые требования / комментарии, касающиеся эмбрионов однокопытных

Настоящие рекомендации применяются, главным образом, к эмбрионам однокопытных, которые постоянно состоят в национальной популяции. По этой причине они могут быть признаны непригодными в отношении однокопытных, которые регулярно принимают участие в международных состязаниях и показах. Например, когда однокопытные перемещаются в сопровождении международного ветеринарного сертификата (лошади, принимающие участие в состязаниях), они могут иногда не отвечать этому требованию, кроме случаев, когда действует двустороннее соглашение между Ветеринарными органами (властями) стран.

Статья 4.7.12.

Особые требования / комментарии, касающиеся эмбрионов верблюжьих

Эмбрионы южно-американских верблюжьих, изъятые из полости матки классическим (не хирургическим) методом промывки через 6,5-7 дней после овуляции, почти всегда находятся на вылупленной бластоцитарной стадии, в то время как пеллюцидная зона уже исчезла. Поскольку эмбрионы этих животных не проникают в матку и могут быть изъяты только по истечение 6,5-7 дней, является нереальным ограничиться в международной торговле только теми из них, пеллюцидная зона которых не повреждена. При этом следует учесть, что по состоянию на 2008 год разработка методов замораживания, пригодных для эмбрионов верлюдов, находится на начальной стадии, и никаких научных исследований о влиянии патогенных возбудителей на эмбрионы верблюдов не проводилось.

Статья 4.7.13.

Особые требования / комментарии, касающиеся эмбрионов оленьих

Рекомендации применяются главным образом к эмбрионам животных, которые постоянно состоят в национальной популяции домашних или содержащихся в неволе оленьих. По этой причине они могут быть признаны непригодными в отношении оленьих, живущих в диком состоянии, или в ситуациях, при которых преследуются цели сохранения биологического разнообразия и генетического богатства.

Статья 4.7.14.

Рекомендации по риску передачи болезней через эмбрионы, отобранные in vivo

IETS классифицировал ниже следующие болезни и патогенные возбудители в четыре категории. Данная классификация относится исключительно к эмбрионам, отобранным in vivo.

1.Категория 1

а) В категорию 1 включены болезни и патогенные возбудители, в отношении которых имеются надежные доказательства, позволяющие утверждать, что риск передачи незначителен, при условии, что обращение с эмбрионами проводилось надлежащим образом, а трансплантация проводилась по стандартам Руководства IETS**.

б) В категорию 1 включены следующие болезни и патогенные возбудители:

–Brucella abortus (крупный рогатый скот)

–губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота

–ящур (крупный рогатый скот)

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 148

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

–катаральная лихорадка (крупный рогатый скот)

–энзоотический лейкоз крупного рогатого скота

–болезнь Ауески (свиньи): требует обработки трипсином

–инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота: требует обработки трипсином

–скрепи (овцы)

2.Категория 2

а) В категорию 2 включены болезни и патогенные возбудители, в отношении которых имеются доказательства, достаточные, чтобы утверждать, что риск передачи незначителен, при условии, что обращение с эмбрионами проводилось надлежащим образом, а трансплантация проводилась по стандартам Руководства IETS**, но в отношении которых имеющиеся данные должны быть перепроверены в ходе новых трансплантаций.

б) В категорию 2 включены следующие болезни и патогенные возбудители:

–артрит/энцефалит коз

–катаральная лихорадка овец (овцы)

–классическая чума свиней

3.Категория 3

а) В категорию 3 включены болезни и патогенные возбудители, в отношении которых имеются определенные доказательства, позволяющие утверждать, что риск передачи незначителен, при условии, что обращение с эмбрионами проводилось надлежащим образом, а трансплантация проводилась по стандартам Руководства IETS**, но в отношении которых эти определенные доказательства должны быть подкреплены дополнительными экспериментальными результатами в ходе новых трансплантаций in vivo или in vitro.

б) В категорию 3 включены следующие болезни и патогенные возбудители:

–легочный аденоматоз овец

–Campylobacter fetus (овцы)

–губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (козы)

–ящур (свиньи, овцы, козы)

–Haemophilus somnus (крупный рогатый скот)

–меди-висна (овцы)

–везикулярная болезнь свиней

–Micobacterium paratuberculosis (крупный рогатый скот)

–Neospora caninum (крупный рогатый скот)

–чума крупного рогатого скота (крупный рогатый скот)

–репродуктивно-респираторный синдром свиней

–вирус иммунодефицита крупного рогатого скота

–вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (крупный рогатый скот)

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 149

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

4.Категория 4

а) В категорию 4 включены болезни и патогенные возбудители, в отношении которых проведены или проводятся исследования, показавшие:

i)что пока никаких заключений о риска передачи сделат, нельзя, или

ii)что риск передачи путем пересадки эмбрионов не может быть незначительным, даже если обращение с эмбрионами проводилось надлежащим образом, а трансплантация была проведена по стандартам Руководства IETS**.

б) В категорию 4 включены следующие болезни и патогенные возбудители:

–Анаплазмоз крупного рогатого скота

–Chlamydia psittaci (крупный рогатый скот, свиньи)

–Цирковирус свиней 2 типа (свиньи)

–Энтеровирус (крупный рогатый скот, свиньи)

–заразный узелковый дерматит

–Эпидидимит овец (Brucella ovis)

–Escherichia coli O9:K99 (крупный рогатый скот)

–Катаральная лихорадка (козы)

–Герпес-вирус-4 крупного рогатого скота

–Leptospira borgpetersenii серовар hardjobovis (крупный рогатый скот)

–Leptospira sp. (свиньи)

–Болезнь Бордера (овцы)

–Контагиозный метрит лошадей

–Mycobacterium bovis (крупный рогатый скот)

–Mycoplasma spp. (свиньи)

–парвовирус (свиньи)

–африканская чума свиней

–ринопневмония лошадей

–везикулярный стоматит (крупный рогатый скот, свиньи)

–скрепи (козы)

–Trichomonas foetus (крупный рогатый скот)

–Ureaplasma / Mycoplasma spp. (крупный рогатый скот, козы)

–вирус Акабане (крупный рогатый скот)

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 150

Глава 4.7. – Отбор и обращение с эмбрионами скота и непарнокопытных, отобранными in vivo

–вирус параинфлюэнцы-3 (крупный рогатый скот)

*Основываясь на научных данных и практике, Подкомитет по науке Консультативного комитета по здоровью и безопасности (HASAC) Международного общества пересадки эмбрионов категоризировал ряд болезней в зависимости от риска их передачи через эмбрионы, отобранные in vivo и надлежащим образом обработанные и хранившиеся. В настоящей главе содержится полный список болезней, расклассифицированных IETS (Ст. 4.7.14.).

**Руководство Международного общества пересадки эмбрионов.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 151