Примерный результат реакции

Определение производится в процентах гемолиза и по осадку эритроцитов.

Разведение антигена	1 :10	1 :50	1 :100	1:150	1:200	1 :300	1 :400	1 :500
Разведение 1) сыворотки 2) 3) 4) 5)	0	0	0	0	0	10	20	40
	0 0 10	0 0 10	0 0 10	0 0 0	0 10 10	10 20 40	30 40 60	60 60 100
	10	20	20	10	40	100	100	100

Наибольшая задержка гемолиза в сильно разведённых бруцеллёзных сыворотках произошла с разведением антигена 1 :150. Это разведение и является рабочим титром антигена. Титром антигена считается то разведение его, которое даёт наибольшую задержку гемолиза с разведёнными бруцеллёзными сыворотками разной активности.

Антиген должен быть прозрачным. Результаты титрации антигена записывают в лабораторную книгу. Раз протитрованный антиген можно использовать в реакции в том же титре в течение 2—3 месяцев, в то время как остальные компоненты реакции подтитровываются перед каждой её постановкой.

Главный опыт

Разведение комплемента для главного опыта. Допустим, что надо исследовать 100 пробирок с сывороткой. Титр комплемента в бактериологической системе 0,3 в разведении 1 :20. Следовательно, в каждой пробирке чистого комплемента содержится 0,015 (0,3:20== ===0,015, 0,015Х100== 1,5 см³ чистого комплемента и 48,5 см³ физиологического раствора).

Основные условия постановки главного опыта. Общий объём компонентов реакции 2,5 см³. Исследуемые сыворотки инактивируются в водяной бане (крупного рогатого скота и свиней при 56—57°С, лошадей и овец при 58-59⁰С в течение 30 минут).

Титрацию комплемента в бактериологической системе производят с сыворотками того вида животных, сыворотки которых исследуются в главном опыте.

Испытуемые сыворотки исследуют в дозах 0,1 и 0,05. Контроль без антигена ставят с сывороткой в дозе 0,1. Время связывания в бактериологической системе 20 минут, реакция продолжается 20 минут.

Контроли главного опыта. 1. Нормальная и бруцеллёзная сыворотки с антигеном и без антигена в дозах 0,05.

2. Антиген в двойной дозе без сыворотки.

3. Контроли гемолитической системы.

Оценка результатов реакции

Официальной диагностической дозой сыворотки, по которой даётся результат, является 0,05. Доза сыворотки 0.1 является вспомогательной контрольной. Результат реакции оценивают два раза. Первый раз тотчас после водяной бани, второй—через 12 часов стояния проб при комнатной температуре. Результаты реакции отмечают крестами:

положительная реакция....................................................4 креста (++++),

сомнительная » ....................................................2 и 1 крест (++) и (+)

отрицательная » ....................................................знаком минус (-)

Степень задержки, выраженная крестами, соответствует следующим процентам гемолиза эритроцитов:

1) 4 креста — гемолиз эритроцитов .............................от 0 до 10%

2) 3 » » » ............................. » 10 » 40%

3) 2 » » » ............................. » 40 » 70%

4) 1 крест » » .............................. » 70 » 90%

5) минус » » .............................. » 90 » 100%

Результаты исследования сообщаются словами: положительная, сомнительная, отрицательная реакция с указанием количества крестов. Данные всех титрационных опытов и особенностей реакции заносятся в дневник серологических исследований лаборатории.

Для внесения объективного признака в определение результатов реакции крестами и однообразной оценки её в различных лабораториях, рекомендуется производить оценку в процентах гемолиза. Делают это следующим образом: из реакции выбирается 5 пробирок с полным гемолизом, и жидкость сливают в одну пробирку. Эта жидкость указывает на 100% гемолиз. Из неё готовят разведение с меньшим процентом гемолиза по следующей схеме:

№ пробирок	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Гемолизированная жидкость ........	0,2 1,8 10	0,4 1,6 20	0,6 1,4 30	0,8 1,2 40	1.0 1,0 50	1,2 0,8 60	1,4 0,6 70	1,6 0,4 80	1,8 0,2 90
Физиологический раствор ......
Процент гемолиза . .

Стандартные пробирки готовят перед учётом реакции. Учёт реакции производят тогда, когда эритроциты осели на дно пробирки. Цвет находящейся над осадком жидкости исследуемой пробирки сравнивается со стандартной пробиркой и процент гемолиза переводят на кресты.

Для более наглядного сопоставления реакций со стандартной жидкостью рекомендуется при изготовлении этого стандарта, не изменяя объёма жидкости, добавлять в каждую пробирку кровяных шариков барана в разведении 1 :40 по следующей схеме:

№ пробирок	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Эритроциты 1 : 40 ........	0,45	0,40	0,35	0,30	0,25	0,20	0,15	0,10	0,05
Общий объём гемолизиро- ванной жидкости ....	2,05	2,10	2.15	2,20	2,25	2,30	2,35	2,40	2,45

Сыворотки, давшие сомнительную реакцию, необходимо повторно исследовать. При получении вторично тех же результатов реакцию считают положительной. Если при вторичном исследовании, результат оценивается одним крестом, то реакция считается сомнительной.

При получении сомнительной реакции, вторично берут сыворотку на исследование по РСК через 2—3 недели после первого исследования.