8. Методика постановки реакции связывания комплемента при случной болезни

Реакция ставится в водяной бане в общем объёме 2,5 см³ всех компонентов при 37—38° С.

Компоненты реакции:

а) гемолизин— рабочий титр не менее 1 :1 000,

б) трипанозомный антиген,

в) комплемент—свежая сыворотка морской свинки,

г) испытуемые сыворотки и сыворотки нормальная и позитивная, инактивированные в день постановки реакции при 56-58 ºС в течение 30 минут.

д) 2,5о/о взвесь эритроцитов от осадка в физиологическом растворе (1 :40),

е) физиологический раствор (0,85%) химически чистой поваренной соли на дестиллированной воде.

Титрация компонентов реакции

Перед реакцией производят титрацию гемолизина, комплемента в гемолитической системе и комплемента на сыворотках.

Титрация гемолизина

При титрации гемолизина делают следующие разведения (1:100-основное разведение): 1 :500; 1 :1 000; 1 :1 500; 1 :2 000; 1 :2 500; 1 :3000. Каждое разведение испытывается в дозе 0,5.

Если гемолизин консервирован карболовой кислотой, то берут 0,1 см³ гемолизина на 9,9 см³ физиологического раствора (1:100); если же он консервирован глицерином, то следует брать 0,2 см³ гемолизина на 9,8 см³ физиологического раствора (обычно на фабрике

принято консервировать гемолизин глицерином).

Комплемент берут по 0,5 см³ из разведения 1 : 20 и эритроциты по 0,5 см³ на 2,5 о/о взвеси из осадка. Взамен трипанозомного антигена и сыворотки лошади в пробирки прибавляют 1,0 см³ физиологического раствора. Время течения реакции 10 минут в водяной бане при 37-38° С.

При титрации гемолизина ставят следующие контроли: 1) контроль гемолизина (т. е. гемолизин + эритроциты -|- физиологический раствор до объёма 2,5 см³ при отсутствии комплемента), 2) комплемента (т. е. комплемент + эритроциты + физиологический раствор до объёма 2,5 см³ при отсутствии гемолизина) и 3) физиологического раствора (т. е. эритроциты + физиологический раствор до объёма 2,5 см³ при отсутствии гемолизина и комплемента). Во всех контрольных пробирках гемолиз эритроцитов отсутствует. Титр гемо-

лизина—наименьшее количество его, потребное для полного гемолиза 0,5 см³ взвеси эритроцитов при комплементе 0,5 см³ разведения 1 :20 при 37—38° С в течение 10 минут.

Для рабочего титра гемолизина при дальнейшей титрации комплемента, а также для реакции при испытании сывороток (главного опыта) берут удвоенный титр гемолизина. Для дальнейшей работы допускается смешивание гемолизина и эритроцитов в одинаковых объёмах.

Титрация комплемента в гемолигической системе

Комплемент исследуется с интервалами по 0,03 в следующих дозах: 0,1; 0.13; 0.16; 0,19; 0,22 и т. д. до 0,49 комплемента из разведения 1 ;20. В каждую пробирку вместо недостающего количеств до объёма 0,5 см³ доливают физиологический раствор (в первую пробирку 0,4 см³ физиологического раствора, во вторую—0,37 и т. д.).

Схема титрации комплемента в гемолитической системе

Комплемент 1 :20 Недостаю-щее количес- тво физио- логического раствора	0,1 0,4 0,5 0,5 1,0	0,13 0,37 0,5 0,5 1,0	0,16 0,34 0,5 0,5 1,0	0,19 0,31 0,5 0,5 1,0	0,22 0,28 0,5 0,5 1,0	0,25 0,25 0,5 0,5 1,0	0,28 0,22 0,5 0,5 1,0	0,31 0,19 0,5 0,5 1,0	0,34 0,16 0,5 0,5 1,0	0,37 0,13 0,5 0,5 1,0	0,4 0,1 0,5 0,5 1,0	0,43 0,07 0,5 0,5 1,0	0,46 0,04 0,5 0,5 1,0	0,49 0,01 0,5 0,5 1,0
Гемолизин в рабочем титре . . . Эритроциты бара- на 1:40 . . . . Физиологический раствор вместо антигена сыворотки .....

Водяная баня 10 минут при 37—38° С.

Титром комплемента в гемолитической системе считается наименьшее количество, потребное для полного гемолиза 0,5 см³ взвеси эритроцитов при рабочем титре гемолизина в течение 10 минут в водяной бане при 37—38° С.