Главный опыт

Каждая испытуемая сыворотка инактивируется в течение 30 минут при 56—58° С в водяной бане, поступает в реакцию в разведении 1 :5 и разливается в пробирки: в одной—сыворотка исследуется со специфичным перипневмонийным антигеном и другими компонентами бактериологической и гемолитической системы и в другой—со всеми компонентами без антигена для определения самозадерживающих свойств сыворотки.

Бактериологическая система 0,25 см³ испытуемой сыворотки в разведении 1:5+0,25 см³ перипневмонийного антигена в рабочей дозе + 0,25 см³ комплемента в установленной титрацией рабочей дозе связывается в водяной бане при 37—38° С в течение: 20 минут.

После этого в каждую пробирку прибавляют компоненты гемолитической системы: 0,25 см³ гемолизина в рабочей дозе +0,25 см³ взвеси эритроцитов.

Допускается предварительное смешивание эритроцитов и гемолизина.

Реакция главного опыта продолжается в водяной бане 15 минут, после чего производят первый учёт реакции.

При массовом исследовании допускается постановка реакции без контролей (т. е. сыворотки без антигена), но при обязательном повторении исследования во всех случаях положительных и сомнительных реакций с контролем сыворотки на самозадерживающие свойства.

Учёт реакции

Первый учёт реакции производят сейчас же по окончании её, после изъятия пробирок (главного опыта) из водяной бани. Второй учёт реакции производят через 12—18 часов, причём пробирки остаются это время в прохладном месте. После второго учёта окон-чательно записывают результаты по схеме:

а) положительная реакция . . ++++ +++ ++±

б) сомнительная » ++ +

в) отрицательная » -

Степени задержки, выражаемые крестами, соответствуют следующим процентам гемолиза эритроцитов:

++++ - гемолиз эритроцитов ..... от 0 до 10%

+++ » » ...... » 10 » 40%

++^:±:(2 ½креста) » » ...... » 40 » 50%

++ гемолиз эритроцитов ......... от 50 до 70%

+— » » .......... » 70 » 90 %

— » » . ..,..... » 90 » 100%

Результат исследования сообщают словами—положительная реакция, сомнительная, отрицательная, с указанием крестов.

Данные всех титрационных опытов и особенностей реакций вносятся в дневник серологических работ лаборатории.

Для внесения объективного признака в определение результатов реакции крестами и однообразной оценки её в различных лабораториях, рекомендуется производить оценку в процентах гемолиза. Для этого из реакции выбирают 5 пробирок с полным гемолизом, жидкость сливают в одну пробирку. Цвет этой жидкости указывает на 100°/о гемолиза; из неё приготовляют разведения с меньшими процентами гемолиза следующим образом:

Схема учёта степени гемолиза

Процент гемолиза компле- мента . .
	0	10	20	30	40	50	60	70	80	90	100
3°/о взвесь эритроцитов . . .
	0,25	0,225	0,2	0,175	0,15	0,125	0,1	0,075	0,06	0,025	—
Гемоли- зирован- ная жид- кость . .
	-	0,125	0,25	0,375	0,5	0,625	0,75	9,875	1,0	1,125	1,25
Физиоло-гический раствор .
	1,0	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	—
Общий объём ...
	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25	1,25
Оценка в крестах .
	++++		+++		++±		++		+	—
	положительная						сомнительная			отрица-
										тельная

Стандартные пробирки приготовляют перед учётом реакции. Учёт производят тогда, когда эритроциты осели на дно пробирки. При оценке сравнивают цвет жидкости в испытуемой пробирке с цветом в стандартной, и проценты переводят в кресты.

Во всех случаях положительных и сомнительных результатов сыворотки на следующий день повторно исследуют в разведениях: 1 :10—1 :5 с двумя заведомо активными и проверенными перипневмонийными антигенами.

У животных, сыворотка которых дала сомнительную реакцию, через неделю берут кровь повторно для исследования по РСК.