Титрация компонентов реакции

Титрация гемолизина. При титрации гемолизина переменной величиной является количество гемолитической сыворотки. Рекомендуется применять разведение гемолизина 1 :100 (основное), из которого готовят разведения: 1 :1000, 1 ; 1 500, 1 :2000, 1 :2500, 1:3000, 4:3500; 1:4000 и т. д. до 1:6000.

Если гемолизин консервирован карболовой кислотой, то берут 0,1см³ гемолизина на 9,9 см³ физиологического раствора (1:100); если же он консервирован глицерином, то следует брать 0,2 см³ гемолизина на 9,8 см³ физиологического раствора.

Обычно на фабрике принято консервировать гемолизин глицерином (в отношении 1:1).

Комплемент употребляется в разведении 1 :20 и эритроциты (3о/о взвесь из осадка) поступают в пробирку по 0,25 см³.

Взамен перипневмонийного, антигена и сыворотки испытуемого рогатого скота в пробирку добавляют 0,5 см³ физиологического раствора. Контролями опыта титрации гемолизина являются:

1) контроль гемолизина,

2) „ комплемента,

3) „ эритроцитов в физиологическом растворе.

Опыт ведётся в (водяной бане при температуре 37—38° С в течение 10 минут.

Титром гемолизина считается наименьшее количество (наибольшее разведение) его в 1,25 см³, потребное для полного гемолиза 0,25 см³ 3 о/о взвеси эритроцитов при комплементе в разведении 1:20 в течение 10 минут в водяной бане при 37—38°С.

Рабочей дозой гемолизина для дальнейших титрации, а также для реакции при испытании подозрительных сывороток (главного опыта) считается удвоенный титр гемолизина.

Пример: Если титр гемолизина 1:3000, то рабочей дозой его считается 1 :1 500.

При точно установленном титре гемолнзина определённой серии, титрация его не обязательна при каждой постановке реакции с испытуемыми сыворотками рогатого скота и проводится через 2- и 3-недельные промежутки.

Титрация комплемента в гемолитической системе

Переменной величиной при титрации является количество комплемента, которое исследуют в таких дозах: 0,05; 0,1; 0,12; 0,15; 0,18; 0,20; 0,22; 0,25 комплемента в разведении 1 :10.

Схема титрации комплемента в гемолитической системе

Комплемент в разведении 1:10	0,05	0,1	0,12	0,15	0,18	0,20	0,22	0,25
Недостающее количество фи- зиологического раствора . .
	0,20	0,15	0,13	0,1	0,07	0,05	0,03	—
Гемолизин в двойном титре .	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
Эритроциты барана .....	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
Физиологический раствор вме- сто антигена и сыворотки .	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

Титром комплемента в гемолитической системе считается наименьшее количество его, потребное для полного гемолиза 0,25 см³ взвеси эритроцитов при вытитрованной дозе гемолиздна в течение 10 минут в водяной бане при 37—38°С.