Титрация сапного антигена

1. Для титрации берут две сапные сыворотки различной силы ( ++++ И ++).

2. Одну нормальную сыворотку.

Сапные сыворотки предварительно разводят следующим образом:

Разведение 10 см³ сыворотки +9,0 см³ физиологического раствора равно 1: 10

0,4 » +9,60 » » » 1:25

0,20 » + 9,80 » » » 1 :50

0,13 » +9,87 » » » 1:75

0,1 » +9,9 » » » 1:100

Комплемент, гемолиэин и эритроциты—в рабочих титрах; температура водяной бани и время— обычные.

Гемолизин .	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Взвесь эритро- цитов ....
	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

20 минут в водяной бане при 38°С.

По этой схеме ставят остальные разведения сыворотки, В случае, если сыворотка даёт +, ++, +++, то достаточно первых трёх разведений.

Нормальную сыворотку берут в (первом и третьем разведении, контроль на антиген, пробирку с антигеном без сыворотки 1 :10.

Примерный результат реакции следующий: (определение произведено в процентах гемолиза и по осадку эритроцитов):

Разведение антигена	1 :10	1 :50	1 :100	1:150	1:200	1 :300	1 :400	1 :500
Разведение 1) сыворотки 2) 3) 4) 5)	0	0	0	0	0	10	20	40
	0 0 10	0 0 10	0 0 10	0 0 0	0 10 10	10 20 40	30 40 60	60 60 100
	10	20	20	10	40	100	100	100

Наибольшая задержка гемолиза у сильно разведённых сывороток получилась с разведением антигена 1 :100. Это разведение и является рабочим титром антигена. Титром антигена считается то разведение его, которое даёт наибольшую задержку гемолиза с разведенными сапными сыворотками разной активности.

Антиген должен быть прозрачным. Результаты титрации заносят подробно в лабораторную книгу.

7. Методика постановки рск при перипневмонии крупного рогатого скота

Реакцию ставят в водяной бане при 37 °С в общем объёме 1,25 см³. В целях экономии компонентов, в особенности антигена, объём каждого компонента реакции составляет 0,25 см³.

Компоненты реакции

а) Сыворотка крупного рогатого скота испытуемая, заведомо негативная и позитивная. Инактивируется нагреванием в водяной бане (при 5б—58°С в течение 30 минут.

б) Антиген—из натуральной перипневмонической лимфы.

в) Комплемент—свежая сыворотка морской свинки (лучше от нескольких).

г) Гемолизин (сыворотка кролика, гипериммунизированного эритроцитами барана). Рабочий титр 1 :1 000 и выше.

д) Эритроциты барана—3 о/о взвесь эритроцитов (из осадка на физиологическом растворе).

е) Физиологический раствор—0,85 о/о химически чистой поваренной соли на дестиллированной воде.

Гемолизин и перипневмонийный антиген изготовляются централизованно на биофабриках.