26. Реакция связывания комплемента. Реакция иммунного гемолиза. На неизестные антитела. Если гемолиза нет то реакция положительная и человек болен.

Реакция связывания комплемента (РСК) за­ключается в том, что при соответствии друг другу антигены и антитела образуют иммун­ный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т. е. происходит связывание комплемента комп­лексом антиген—антитело. Если же комплекс антиген—антитело не образуется, то комп­лемент остается свободным.  Специфическое взаимодействие АГ и AT сопровождается адсорб­цией (связыванием) комплемента. Поскольку процесс связыва­ния комплемента не проявляется визуально, Ж. Борде и О. Жангу предложили использовать в качестве индикатора гемолитическую систему (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка), кото­рая показывает, фиксирован ли комплемент комплексом АГ-АТ. Если АГ и AT соответствуют друг другу, т. е. образовался иммунный комплекс, то комплемент связывается этим комплексом и гемоли­за не происходит. Если AT не соответствует АГ, то комплекс не образуется и комплемент, оставаясь свободным, соединяется со второй системой и вызывает гемолиз. Компоненты. Реакция связывания комплемента (РСК) относится к слож­ным серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система).  Антигеном для РСК могут быть культуры различных убитых микроорганизмов, их лизаты, компоненты бактерий, патологи­чески измененных и нормальных органов, тканевых липидов, ви­русы и вирусосодержащие материалы. В качестве комплемента используют свежую или сухую сыво­ротку морской свинки.

27. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип, применение для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.

Иммуноферментный анализ — выявление ан­тигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интен­сивность окраски прямо пропорциональна количеству свя­завшихся молекул антигена и антител.

ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных бо­лезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепати­та В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекар­ственных препаратов и других биологически активных ве­ществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях. Твердофазный ИФА— вариант теста, когда один из компо­нентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или анти­генов. При положительном результате изменяется цвет хромоге­на.  I. При определении антител в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сы­воротку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, ме­ченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента. II. При определении антигена в лунки с сорби­рованными антителами вносят антиген (напр. сыворотку кро­ви с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыво­ротку против него и вторичные антитела (против диагностиче­ской сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хро­моген для фермента.

28. Методы оценки иммунного статуса организма.

Иммунный статус — это комплексный показатель состояния иммунной системы, это количественная и качественная характеристика состояния функциональной активности органов иммунной системы и некоторых неспецифических механизмов противомикробной защиты.

Клинико-лабораторный этап:

1. 1.Сбор и оценка иммунологического анамнеза

2. 2.Оценка результатов общего клинического анализа крови

3. 3.Выявление с помощью бактериологических, вирусологических и серологических исследований бактерионосительства и вирусоносительства.

Лабораторно-иммунологический этап:

Ориентировочный уровень

На этом уровне выявляются грубые нарушения деятельности иммунной системы. Они включают в себя определение: общего и относительного числа  лимфоцитов; основных субпопуляций (Т- и В-клетки); фагоцитарной активности лейкоцитов; концентрации иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови.

Для определения количественного отношения между различными группами лимфоцитов используются меченые моноклональные флюоресцирующие сыворотки к специфическим поверхностным антигенным маркерам, обозначаемым символами CD

Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов крови определяют количество фагоцитирующих клеток и фагоцитарный показатель, то есть среднее количество микробных клеток, поглощенных одним лейкоцитом.

Концентрацию (уровень) иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови определяют в реакции преципитации в геле с антиглобулиновыми сыворотками.

Аналитический уровень. На этом уровне проводится более глубокий анализ состояния иммунной системы. На этом уровне осуществляется определение отдельных субклассов иммуноглобулинов и В-лимфоцитов, регуляторных и эффекторных клеток. Также на этом этапе можно определить концентрации отдельных цитокинов — главных регуляторных молекул, определяющих тип иммунного ответа.