82 Болезни органов пищеварения

мазки высушиваются и окрашиваются по методу Романовского-

Гимзы. Хеликобактерии располагаются в слизи, имеют спирале-

видную, изогнутую форму, бывают S-образной формы.

Выделяют три степени обсемененности хеликобактериями:

• слабая (+) — до 20 микробных тел в поле зрения;

• средняя (++) — до 50 микробных тел в поле зрения;

• высокая (+++) — более 50 микробных тел в поле зрения.

Используемое увеличение микроскопа х 360.

Уреазный тест

Уреазный тест определения хеликобактерий основан на сле-

дующем принципе.

Хеликобактерии выделяют фермент уреазу, под влиянием ко-

торой мочевина, содержащаяся в желудке, разлагается с выделени-

ем аммония:

NH2 | уреаза

С = 0 2Н20 + Н+ *-2NH4

+ + НС03-

I

NH2

Образующийся в результате реакции ион аммония значительно

увеличивает рН среды, что можно констатировать с помощью ин-

дикатора, а, значит, и отметить визуально по изменению ее окра-

ски.

Для выявления хеликобактерной инфекции применяется экс-

пресс-уреазный метод. Экспресс-набор содержит мочевину, бакте-

риостатический агент и фенол-рот в качестве индикатора рН (ин-

дикатор меняет цвет от желтого к малиновому при сдвиге реакции

в щелочную сторону).

Биоптат слизистой оболочки желудка, полученный при гастро-

скопии, помещают в среду экспресс-набора.

При наличии в биоптате хеликобактерий среда приобретает

малиновую окраску. Время появления малиновой окраски косвен-

но указывает на количество хеликобактерий.

(+) — незначительная инфицированность (малиновое окраши-

вание к концу суток);

(++) — умеренная инфицированность (малиновое окрашивание

в течение 2 ч);

(+++) — значительная инфицированность (малиновое окрашива-

ние появляется в течение первого часа);

(—) — результат отрицательный (малиновое окрашивание на-

ступает позже, чем через сутки).

Зарубежные фирмы выпускают тест-системы для определения

хеликобактерий уреазным методом (де-нол-тест фирмы ≪Яману-

чи≫, CLO-тест — Австралия и др.).

Хронический гастрит 83_

С-уреазный дыхательный тест

Метод основан на том, что принятая внутрь мочевина, мечен-

ная 13С, под влиянием уреазы хеликобактерий разлагается с обра-

зованием аммиака и СО2- В выдыхаемом СС>2 определяется содер-

жание 13С и по его уровню делается заключение об инфицирован-

ности хеликобактериями.

Исследование поводится натощак. Вначале в пластиковые про-

бирки с интервалом в 1 минуту берутся две фоновые пробы выды-

хаемого воздуха. Затем больной принимает внутрь легкий пробный

завтрак (молоко, сок) и тестовый субстрат (водный раствор моче-

вины, меченной 13С). Затем в течение 1 ч с интервалами 15 минут

берут 4 пробы выдыхаемого воздуха.

Содержание 13С в выдыхаемом воздухе определяется с помо-

щью масс-спектрометра. В зависимости от процентного содержа-

ния изотопа 13С в выдыхаемом воздухе различают 4 степени ин-

фицированности хеликобактериями:

• менее 3.5% — легкая;

• 3.5-6.4% — средняя;

• 6.5-9.4% — тяжелая;

• более 9.5% — крайне тяжелая.

В норме содержание 13С в выдыхаемом воздухе не превышает

1 % от общего количества СО2-

Метод чрезвычайно дорог и пока мало доступен.

Микробиологический метод

Посевы для определения хеликобактерий производят с биопта-

тов слизистой оболочки желудка. Инкубация посевов осуществля-

ется в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода не

более 5%. Для создания такой среды применяются специальные

газогенераторные химические пакеты. Для роста хеликобактерий

используются специальные кровяные питательные среды. Через

3-5 суток на питательной среде появляются мелкие, круглые, про-

зрачные, росинчатые колонии хеликобактерий. Затем производит-

ся идентификация выделенной культуры.

Гистологический метод

Материалом служат биоптаты слизистой оболочки желудка в

местах наиболее выраженного воспаления.

Готовятся тонкие срезы и препараты окрашиваются гематокси-

лином и эозином или по методу Романовского-Гимзы. Хеликобак-

терий выявляются в виде спиралеобразных, S-образных бактерий.

В последние годы появились наиболее точные методы иденти-

фикации хеликобактерий. К ним относится иммунохимический

метод с моноклональными антителами. В настоящее время суще-

ствуют коммерческие наборы, позволяющие использовать обыч-

ный биопсийный материал, фиксированный в формалине и зали-

тый в парафин. Моноклональные антитела, входящие в эти набо-