Завдання на виконання:

Завдання №1. Вивчення поглинальної здатності фагоцитів.

1. До пробірки з антикоагулянтом (0,2 мл 2% розчину натрію лимоннокислого або 0,2 мл гепарину в концентрації 50 од/мл) вносять 0,1 мл крові, ретельно перемішують.

2. Додають 0,05 мл зависини тест-мікробної культури. Як тест-мікроб використовують добову агарову культуру Е. соlі (або іншу придатну мікробну культуру) у фізіологічному розчині в концентрації 500 млн мікробних тіл в 1 мл (5×10⁸ кл/мл).

3. Витримують у термостаті за 37°С упродовж 30 хв.

4. Центрифугують при 2000 – 3000 об/хв 15 хв до розшарування рідини на верхній (плазма), нижній (еритроцити) та середній (лейкоцити) шари.

5. Пастерівською піпеткою відсмоктують середній шар і роблять мазок.

6. Мазок підсушують на повітрі 2 – 3 год.

7. Фіксують фарбою-фіксатором Мая-Грюнвальда упродовж 2 – 3 хв. Фарбу змивають дистильованою водою, мазки підсушують на повітрі та залишають до наступного заняття.

Завдання №2. Вивчення перетравлювальної здатності фагоцитів.

1. До пробірок №1 та №2 вносять 0,2 мл антикоагулянту(0,2 мл 2% розчину натрію лимоннокислого або 0,2 мл гепарину в концентрації 50 од/мл).

2. До пробірки №1 з антикоагулянтом вносять 0,1 мл крові, 0,2 мл середовища 199 і 0,1 мл 0,1% розчину нітросинього тетразолію (спонтанний НСТ-тест).

3. До пробірки №2 з антикоагулянтом вносять 0,1 мл крові, 0,2 мл середовища 199 і 0,1 мл 0,1 зависини E. coli знешкодженої нагріванням (1 млрд кл/мл) (стимульований НСТ-тест).

4. Проби ретельно перемішують.

5. Проби інкубують у термостаті за 37ºС упродовж 30 хв.

6. Після закінчення інкубування до пробірки №1 додають 3,0 мл дистильованої води для гемолізу еритроцитів. Добре перемішують.

7. Після закінчення інкубування до пробірки №2 додають 0,2 мл 5% розчину формаліну. Ретельно перемішують. Пробу залишають на 10 – 15 хв за кімнатної температури. Через 15 хв додають 3,0 мл дистильованої води. Пробу добре струшують.

8. Проби центрифугують при 1500 об/хв упродовж 5 – 7 хв.

9. Надосадову рідину зливають, до осаду додають 0,1 мл фіз. розчину і вміст пробірки виливають на знежирене предметне скло.

10. Мазок підсушують на повітрі і залишають до наступного заняття.

11. Оформити протокол заняття, зробити висновки.

Контрольні запитання:

1. Які клітини крові належать до фагоцитувальних клітин?

2. Які Вам відомі механізми оксигензалежного та оксигеннезалежного знищення мікроорганізмів?

3. Охарактеризуйте основні етапи фагоцитозу.

4. Для яких імунологічних досліджень використовується НСТ-тест?

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 6

ДОСЛІДЖЕННЯ ФАГОЦИТАРНОЇ ЛАНКИ ІМУНІТЕТУ

(ЗАКІНЧЕННЯ). ВИЗНАЧЕННЯ ПОГЛИНАЛЬНОЇ ЗДАТНОСТІ ФАГОЦИТІВ

Мета роботи: вивчити явище фагоцитозу, визначити активності нейтрофільних гранулоцитів (закінчення).

План:

1. Поняття про комплімент

2. Шляхи активації комплементу: класичний та альтернативний.

3. Біологічна активність комплементу.

4. Фагоцити і комплімент.

5. Поняття про імунну відповідь.

6. Етапи розвитку імунної відповіді організму.

7. Первинна та вторинна імунна відповідь.

8. Взаємодія клітин при імунній відповіді.

9. Участь фагоцитів в імунній відповіді.

Матеріали та обладнання: мазки виготовлені під час виконання лабораторної роботи №5, етиловий спирт, метанол, 0,1%-ий спиртовий розчин нейтрального червоного барвника на ацетатному буфері, фарба Романовського-Гімзе, фарба Мая-Грюнвальда, світловий мікроскоп, імерсійне масло.