Рецепти приготування реактивів, барвників, поживних середовищ лабораторна робота №2.

1. 3% розчин оцтової кислоти, підфарбований метиленовим синім.

В мірну колбу об’ємом 100 мл внести 3 мл оцтової кислоти і довести об’єм до 100 мл дистильованою водою. Для додання розчину світло-синього кольору необхідно додати 1 кристал метиленового синього. Розчин стійкий.

2. 0,9% (0,15 М) розчин хлориду натрію: 8,78 г хлориду натрію, зважити з точністю до 0,005 г, розчинити в дистильованій воді в мірній колбі об’ємом 1000 мл, долити дистильовану воду до об’єму приблизно 950 мл, ретельно перемішати, долити водою до мітки і ще раз перемішати. Зберігати в холодильнику за температури 8 – 10ºС одну добу.

3. 0,2% розчин трипанового синього: до 100мл забуференого фізіологічного розчину додати 0,065 г азиду натрію (NaN₃), перемішати до повного розчинення та додати 0,2 г трипанового синього барвника. Розчинити при тривалому перемішуванні. Перед застосуванням розчин відцентрифугувати (1500 – 2000 об/хв) для видалення агломератів барвника. Розчин не стерилізувати.

4. Забуферений фізіологічний розчин рН 7,2: в мірну колбу об’ємом 1 л внести наважки 8,015 г натрію хлориду (NaCl), 0,41 г калію дигідрофосфату (KH₂PO₄), 1,78 г натрію гідрофосфату зневодненого (Na₂HPO₄), додати 100 – 200 мл дистильованої води, добре перемішати, перевірити рН. За необхідності довести рН 0,1 М розчином соляної кислоти до 7,2. Долити водою до мітки і ще раз перемішати. Розчин стійкий, зберігати у склянці з притертою пробкою.

Лабораторна робота №3.

1. Приготування розчину фікол-верографіну (ρ = 1,077 г/мл):

1.1. Приготування розчину фіколу:

9 г фіколу (порошку) ретельно розчинити в 100 мл гарячої дистильованої води при постійному перемішуванні. Одержану суміш вилити в пляшку коричневого скла. Зберігати в холодильнику за температури 8 – 10ºС не більше 7 діб.

1.2. Приготування робочого розчину верографіну (33,9%):

60% розчин верографіну + 7,7 мл дист. води

76% розчин верографіну + 12,48 мл дист. води.

Зберігати в холодильнику за температури 8 – 10ºС не більше 7 діб.

1.3. Приготування градієнту фікол-верографіну (ρ = 1,077 г/мл):

24 мл фіколу + 10 мл верографіну (Важливо! Фікол наливати у верографін). Одержану суміш вилити в пляшку коричневого скла. Зберігати в холодильнику за температури 8 – 10ºС не більше 7 діб.

2. Приготування Т-системи. Відмити еритроцити барана (ЕБ) 199 середовищем 3 рази (центрифугуванням по 10 – 15 хв при 1000 об/хв). Надосадову рідину злити. В пробірку об’ємом 10 см³ додати 5 мл середовища 199 та 0,025 мл відмитих центрифугуванням еритроцитів барана. Одержану Т-систему добре перемішати, пробірку закрити гумовою або ватно-марлевою пробкою. Зберігати в холодильнику за температури 6 – 8ºС одну добу.

3. Приготування В-системи.

3.1. Приготування еритроцитів барана. Відмити еритроцити барана (ЕБ) 199 середовищем 3 рази (центрифугуванням по 10 – 15 хв при 1000 об/хв). Надосадову рідину злити.

3.2. Приготування гемолітичної системи. До пробірки №1 внести 3 мл середовища 199 та 0,01 мл гемолітичної сироватки, добре перемішати. До пробірки №2 внести 5 мл середовища 199 та 0,1 мл відмитих еритроцитів барана, обережно перемішати. Вміст пробірки №1 перелити в пробірку №2 (біле в червоне).

3.3. Змішати в однакових кількостях еритроцити барана та гемолітичну систему: 3 мл ЕБ + 3 мл гем. системи. Одержану зависину поставити на 30 хв в термостат за температури 37°С. Через 30 хв одержану суміш дістати з термостату і відмити 3 рази середовищем 199 (центрифугуванням по 10 – 15 хв при 1000 об/хв).

3.4. Надосадову рідину злити, до осаду додати 0,3 мл мишачої сироватки і довести об’єм середовищем 199 до 6 мл. Одержану В-систему добре перемішати, пробірку закрити гумовою або ватно-марлевою пробкою. Зберігати в холодильнику за температури 6 – 8ºС одну добу.

4. Робочий розчин барвника Романовського-Гімзе: концентрований барвник Романовського-Гімзе розвести – 2 краплини барвника на 1 мл дист. води. Розчин приготувати в день проведення занять.