Помилки при визначенні груп крові

Відсутність аглютинації може спостерігатися внаслідок:

1. Неправильного кількісного співвідношення між досліджуваною кров'ю і стандартною сироваткою.

2. Слабого титру стандартних сироваток.

3. Гемолізу еритроцитів досліджуваного.

4. Визначення при високій температурі навколишнього повітря (вище 25°С і протягом менше, ніж 5 хв).

Поряд з відсутністю аглютинації в деяких випадках можна помічати помилкову аглютинацію. Припустима при підсиханні крапель крайова аглютинація, якщо визначення груп крові триває більше необхідного часу. Холодова аглютинація наступає, коли визначення групової приналежності проводиться при температурі, нижчій 15°С. При додаванні підігрітого до кімнатної температури фізіологічного розчину холодова аглютинація - скупчення еритроцитів навколо бактерій, може спостерігатись за умов роботи з недоброякісною стандартною сироваткою.

Оформити протокол, замалювати таблицю 3.

У висновках вказати, до якої групи за системою АВО належить досліджувана кров.

Робота 7. Використання цоліклонів анти-а і анти-в (діагностичних рідких препаратів) для визначення груп крові людини ав0 (антитіла моноклональні анти-а і анти-в)

Мета роботи: визначити групу крові за допомогою цоліклонів анти-А і анти-В.

Цоліклони анти-А і анти-В використовуються для визначення груп крові АВ0 людини замість стандартних ізогемаглютинових сироваток. Визначення груп крові системи АВ0 вимагає виявлення антигенів А і В в еритроцитах стандартними антитілами і виявлення аглютинінів у сироватці або в плазмі досліджуваної крові стандартними еритроцитами. Антигени А і В визначають за допомогою цоліклонів анти-А і анти-В.

Характеристика і основні властивості цоліклонів анти-а і анти-в

Моноклональні анти-А і анти-В антитіла продукуються двома різними гібридомами. Цоліклони анти-А і анти-В являють собою порошок, що містить специфічні імуноглобуліни, тобто антитіла, аглютиніни, які діють проти групових антигенів А і В. Ці антитіла утворюються одноклональними В-лімфоцитами у мишей при введені в їх організм антигену (А або В) у вигляді злоякісних специфічних клітин.

Цоліклони не містять антитіл другої специфічності і тому не викликають неспецифічної поліаглютинації еритроцитів. Це означає, що вони дають реакцію лише на один антиген, тобто не зумовлюють неспецифічної поліаглютинації еритроцитів. Такі їхні властивості забезпечують перевагу перед стандартними сироватками, які важко очистити від інших антитіл і тому можливі неспецифічні реакції з антигенами досліджуваної крові. Цоліклони не є продуктами клітин людини і тому відсутня контамінація препаратів вірусами гепатиту і СНІДу.

Визначення групи крові системи АВ0 реагентами цоліклонів проводиться звичайними методами виявлення антигенів еритроцитів при масовому визначенні в закладах служби крові на планшетах або в автоматичних системах, а під час індивідуального визначення - на білій фарфоровій або любій іншій пластинці.

Хід роботи: визначення груп крові АВ0 проводиться в нативній крові та в стабілізованій за допомогою консервантів (глюгіцир, цитроглюкофосфат, гепарин тощо).

Визначення груп крові проводиться в приміщенні з добрим освітленням при температурі від 15°С до 25°С. Реагенти не повинні зберігатися відкритими, тому що при їх висиханні активність антитіл понижується. Не слід користуватися реагентами, якщо в них є нерозчинні пластівці або помутніння. Для кожного реагенту використовують свою марковану (анти-А або анти-В) піпетку.

Беручи до уваги високу активність і авідність цоліклонових реагентів, а також повну їх стандартність, для кожного визначення груп крові достатньо застосувати одну серію реагентів анти-А і анти-В. На планшетку або пластинку цоліклони анти-А і анти-В наносять по одній великій краплі (0,1 мл) відповідно до надписів анти-А і анти-В. Поряд з краплями антитіл наносять досліджувану кров по одній маленькій краплі приблизно в десять разів меншої від краплі антитіл (0,01 мл).

При визначенні груп крові на пластинці, антитіла і кров змішують, похитуючи пластинкою або скляною паличкою, яку промивають і насухо витирають перед розмішуванням кожної краплі. Співвідношення крові й цоліклону повинно бути 1:10 (утворена крапля має слабо рожеве забарвлення). Спостереження за протіканням реакції з цоліклонами проводять за легкого похитування пластинки або планшетки протягом 2,5 хв.

Аглютинація з цоліклонами анти-А і анти-В в нормі спостерігається в перші 3-5 с. Остаточний результат встановлюють через 2,5 хв, оскільки можлива затримка аглютинації з еритроцитами, що містять слабкі різновидності антигенів А або В.

Результат реакції в кожній краплі може бути позитивним або негативним. Позитивний результат виявляється в аглютинації (склеюванні) еритроцитів. Аглютинати (результат реакції аглютинації) видно неозброєним оком у вигляді дрібних червоних агрегатів, які швидко зливаються з утворенням пластівців, що поступово перетворюються в один великий аглютинат. При від'ємній реакції крапля залишається рівномірно зафарбованою в червоний колір, аглютинати в ній відсутні.

Оцінка результатів реакції аглютинації з цоліклонами анти-А і анти-В наведені в Табл. 5, в яку також внесені результати визначення аглютинінів в сироватці (плазмі) донорів за допомогою стандартних еритроцитів.

Таблиця 5

	Реакція досліджуваних еритроцитів з цоліклонами Анти-А Анти - В		Реакція досліджуваної сироватки (плазми) зі стандартними еритроцитами групи А (II) В (III)		Досліджувана кров належить до групи
1 2 3 4	-	-	+	+	0 (І) А (ІІ) В (ІІІ) АВ (ІV)
	+	-	-	+
	-	+	+	-
	+	+	-	-

Оформити протокол. Заповнити таблицю згідно отриманих результатів.

У висновках вказати, яка групова приналежність досліджуваної крові.