Робота 4. Визначення групи крові за системою сde (резус-належність) експрес-методом при допомозі стандартної сироватки анти-d

Антигени, що належать до системи СDE позначаються як СDE cde, а імунні (тобто ті, що утворюються лише в процесі онтогенезу) антитіла до них - с'd'е' с"d"е". Якщо у крові людини містяться D антиген, то така кров вважається резус-позитивною. Вона спостерігається у 86% людей. Проте у 14% людей у крові немає D антигену, такі люди мають резус-негативну кров.

Отже, система СDЕ відрізняється від системи АВ0 тим, що в ній нема негативних антитіл, а імунні антитіла утворюються у випадках неправильного переливання крові, коли резус-позитивну кров, що містить антигени системи СDЕ, переливають людині, у якої цих антигенів нема. Такий самий наслідок може відбутися за умов імунологічного конфлікту (еритроцитарної сенсибілізації) під час вагітності в системі мати-плід, коли жінка має резус-негативну кров, а плід - резус-позитивну.

Для виявлення антигенів у реакції аглютинації з імунними антитілами звичайно потрібні особливі умови, наприклад, температурні тощо. Це потребує додаткових умов для перебігу реакції та дублювання контролю. Визначення резус-належності крові експрес-методом при допомозі стандартної сироватки анти-D застосовується в екстремальних умов при необхідності швидкої ідентифікації.

Мета роботи: оволодіти експрес-методом визначення групи крові за системою СDЕ (резус-належність).

Хід роботи: на пластинку для визначення групової належності крові наносять одну краплю антирезусної стандартної сироватки, а потім справа одну краплю контрольної сироватки (без резус-антитіл). Поряд з сироватками розмістити однакові за розміром краплі крові. Скляною паличкою змішують сироватки з кров'ю. Похитуючи пластинку, чекають на результат. Через 3-4 хв в обидві краплі додати по одній краплі фізіологічного розчину для уникнення неспецифічної аглютинації. Через 5 хв з моменту змішування крові з сироватками оцінюють результат реакції.

Про резус-від'ємну належність крові свідчить відсутність аглютинації в обох краплях. Отже, можна стверджувати, що кров не має антигенів системи СDЕ, резус-негативна. Якщо аглютинація пройшла зі стандартною антирезусною сироваткою, значить кров має антигени системи СDЕ, резус-позитивна.

Оформити протокол.

У висновках вказати, що означає наявність (відсутність) аглютинації в краплях крові при досліджуванні; резус-позитивна чи резус-негативна досліджувана кров.

Визначення резус-належності донора проводиться більш точними методами: наприклад, методикою конглютинації з використанням желатини (модифікований метод Фіксо і Мокгі), методикою конглютинації в сироватковому середовищі (на чашці Петрі). Широко використовують прилад «РЕЗУС-1», в якому автоматично створюється температура, необхідна для нормального проходження реакцій.

РОБОТА 5 Визначення групи крові (резус-залежності) за системою СDЕ

Для визначення резус-належності також використовують метод Зотіхова - Донського. Сироватки, що містять імунні антитіла, одержують із крові донорів групи IV (АВ), що були імунізовані антигенами резус-системи (особливо D- антигеном). До сироваток додають розчин альбуміну, щоб прискорити аглютинацію. Це дозволяє проводити пробу при кімнатній температурі. Розроблено й модифікації цієї проби, за якою можна не лише виявити антигени системи СDЕ, а й ідентифікувати, які саме. За системою СDЕ у клініці прийнято розрізняти лише 2 групи людей: до першої - особи з резус-позитивною кров'ю Rh(+); до другої - з резус-негативною кров'ю Rh(-).

Мета роботи: визначити Rh - належність крові за системою СDЕ.

Хід роботи: розділити тарілку склографом на дві половини. На одну половину тарілки нанести 1 краплю стандартної антирезусної сироватки (діаметром не менше ніж 2 см). Кров обстежуваного помістити на предметне скло, іншим предметним склом перенести частину крові в краплю сироватки і розмішати. Співвідношення крові і сироватки повинно бути 1:10. Тарілку необхідно легко похитувати. Можливі два варіанти реакції:

1. Якщо аглютинація відбудеться, то це означатиме, що в крові є антигени системи СDЕ, тобто кров резус-позитивна. На другу половину тарілки нанести 2 краплі сироватки і за допомогою предметних шкелець розмішати в них стандартні еритроцити Rh(+) та Rh(-). Якщо аглютинації не буде в краплі з Rh(-) еритроцитами, а буде з Rh(+) еритроцитами, то це означає, що сироватка реагує добре. Отже, результати дослідження свідчать, що кров має антигени системи СDЕ.

2. Якщо аглютинації у краплі нема, то після проведеного контролю можна стверджувати, що кров не має антигенів системи СDЕ. Тобто вона резус-негативна.

Оформити протокол.

У висновках вказати на належність досліджуваної крові за системою СDЕ (резус-належність).