- •Депарпамент образования и науки
- •Оглавление
- •Глава 1. Особенности некоторых методов микроскопии
- •Устройство и принцип работы темнопольного конденсора ои-13
- •1.1.1. Условия работы с темнопольным конденсором
- •1.1.2. Порядок работы с темнопольным конденсором:
- •Принцип и порядок работы с фазово-контрастным устройством кф-4
- •1.2.1.Устройство фазово-контрастной приставки кф-4
- •1.2.2. Порядок работы с фазово-контрастным устройством
- •Глава 2. Методы окраски фиксированных препаратов
- •2.1. Подготовка красителей и реактивов для окраски по методу Грама и техника окрашивания
- •2.1.1. Особенности подготовки красителей
- •2.1.2. Техника окраски по методу Грама
- •2.1.3. Дифференциация бактерий по Граму без окрашивания
- •2.2. Выявление кислотоустойчивости и спиртоустойчивости бактерий
- •2.2.1. Окраска по методу Циля-Нильсена
- •2.2.2. Красители и реактивы для окраски кислотоустойчивых бактерий
- •2.3. Методы окраски спор у бактерий
- •2.3.1. Метод Циля — Нильсена в модификации Мюллера
- •3.3.2. Окраска спор по методу Пешкова
- •2.3.3. Окраска спор по методу Виртца в модификации Саватеева
- •2.3.4. Окраска спор по методу Виртца в модификации Шеффелера и Фултона
- •2.3.5. Окраска спор по Битеру
- •2.3.6. Реактивы и красители для окрашивания спор бактерий:
- •2.4. Методы окраски капсул
- •2.5. Методы окраски жгутиков бактерий
- •2.5.1. Окраска жгутиков по методу Леффлера
- •2.5.2. Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •2.5.3. Окраска жгутиков по методу Грея
- •2.6. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •2.7. Окраска генома бактерий
- •2.7.1. Окраска генома бактерий методом Романовского-Гимза
- •2.7.2. Выявление генома по реакции Фельгена
- •Глава 3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным, морфологическим и физиолого-биохимическим признакам
- •3.1. Морфологические признаки
- •3.2. Культуральные признаки
- •Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
- •3.3.1. Тест на наличие каталазы
- •3.3.2. Тест на наличие оксидазы
- •3.3.3. Окислительно-ферментативный (о/f) тест на использование глюкозы (тест Хью — Лейфсона)
- •3.3.4. Тест на наличие уреазы
- •3.3.5. Тест на наличие протеолитической активности (протеиназы)
- •3.3.6. Тест на наличие диастазы (амилазы)
- •3.3.7. Тест на наличие липазы
- •3.3.8. Тест на использование углеводов и органических кислот
- •Тест на редуцирующую способность микроорганизмов
- •Тест на декарбоксилазы и дегидролазы
- •3.3.11. Тест на образование индола и сероводорода
- •3.3.12. Тест на использование фумарата в анаэробных условиях
- •Список использованной литературы
- •Методы исследований при идентификации микроорганизмов Методическое пособие
Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
При изучении физиолого-биохимических признаков микроорганизмов исследуют: их отношение к источникам углерода и азота; продукты жизнедеятельности, накапливающиеся в среде (кислоты, спирты, газы); отношение к кислороду, щелочам и другим факторам внешней среды.
Среди биохимических свойств культуры особенно важно определение ее ферментативной активности. Ферменты являются обязательными участниками разнообразных биохимических реакций, лежащих в основе процессов дыхания, питания, размножения. Биохимическая активность бактерий строго специфична для данного вида, что дает возможность его идентификации. Выделяясь во внешнюю среду, ферменты разлагают сложные органические вещества на более простые компоненты, удобные для усвоения бактериальной клеткой. Сапрофитные бактерии, приспособившиеся существовать за счет мертвых органических субстратов внешней среды, для расщепления которых необходимы все группы ферментов, обладают большей биохимической активностью в отличие от патогенных бактерий, которые имеют в своем составе лишь строго определенные ферменты.
Ферменты являются высокомолекулярными биологически активными веществами белковой природы, синтезируемые микробной клеткой. В отличие от катализаторов химической природы ферменты катализирует только одну реакцию: например, лактаза расщепляет только лактозу, сахараза – сахарозу.
Считаем уместным напомнить общую классификацию ферментов. Ферменты объединены в шесть основных классов.
Оксидоредуктазы – участвуют в окислительно-восстановительных реакциях, осуществляя перенос электронов или атомов водорода к акцептору. К ним относятся дегидрогеназы, оксидазы (цитохромоксидаза, каталаза, пероксидаза).
Трансферазы – катализируют процессы межмолекулярного переноса химических элементов. К ним относят фосфотрансферазу, аденозинтрансферазу и др.
Гидролазы – катализируют гидролитическое расщепление пептидных, эфирных, гликозидных и других связей. К относят:
эстеразы (фосфатаза, ДНКаза, РНКаза);
карбогидразы, расщепляющие углеводы (β-галактозидаза);
протеазы (амипептидазы, протеиназы, трипсин);
амидазы (уреаза, аргиназа).
Липазы – катализаторы реакции с присоединением по двойным связям и обратных реакций с отрывом этих групп. К ним относят декарбоксилазы, дезаминазы, альдолазу, фумаразу.
Изомеразы – каталируют процессы изомеризации при внутренней конверсии разных изомеров. К ним относят глюкозо-6-фосфатизомеразу, рацемазу.
Лигазы (синтетазы) – катализируют связывание (реакции конденсации или присоединения) между собой молекул в реакциях расщепления пирофосфатной связи, например в молекуле АТФ. К ним относят глутаминсинтетазу, аспарагинсинтетазу, карбоксилазу и др.
Ферменты, постоянно образуемые в бактериальной клетке в определенной концентрации, независимо от веществ субстрата называют конститутивными. Эти ферменты связаны в основном с клеточным обменом (протеаза, уреаза, липаза, крбогидраза). Индуцибельными называют ферменты, интенсивность синтезе которых резко увеличивается при наличие субстрата (β-лактамаза, разрушающая пенициллин, β-галактозидаза, амилаза, расщепляющая крахмал, нитратредуктаза).
Для проведения родовой или видовой идентификации микроорганизмов (прокариот) почти во всех случаях имеет значение наличие или отсутствие таких ферментов как: каталаза, оксидаза, инвертаза, амилаза, протеаза, уреаза.