- •Депарпамент образования и науки
- •Оглавление
- •Глава 1. Особенности некоторых методов микроскопии
- •Устройство и принцип работы темнопольного конденсора ои-13
- •1.1.1. Условия работы с темнопольным конденсором
- •1.1.2. Порядок работы с темнопольным конденсором:
- •Принцип и порядок работы с фазово-контрастным устройством кф-4
- •1.2.1.Устройство фазово-контрастной приставки кф-4
- •1.2.2. Порядок работы с фазово-контрастным устройством
- •Глава 2. Методы окраски фиксированных препаратов
- •2.1. Подготовка красителей и реактивов для окраски по методу Грама и техника окрашивания
- •2.1.1. Особенности подготовки красителей
- •2.1.2. Техника окраски по методу Грама
- •2.1.3. Дифференциация бактерий по Граму без окрашивания
- •2.2. Выявление кислотоустойчивости и спиртоустойчивости бактерий
- •2.2.1. Окраска по методу Циля-Нильсена
- •2.2.2. Красители и реактивы для окраски кислотоустойчивых бактерий
- •2.3. Методы окраски спор у бактерий
- •2.3.1. Метод Циля — Нильсена в модификации Мюллера
- •3.3.2. Окраска спор по методу Пешкова
- •2.3.3. Окраска спор по методу Виртца в модификации Саватеева
- •2.3.4. Окраска спор по методу Виртца в модификации Шеффелера и Фултона
- •2.3.5. Окраска спор по Битеру
- •2.3.6. Реактивы и красители для окрашивания спор бактерий:
- •2.4. Методы окраски капсул
- •2.5. Методы окраски жгутиков бактерий
- •2.5.1. Окраска жгутиков по методу Леффлера
- •2.5.2. Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •2.5.3. Окраска жгутиков по методу Грея
- •2.6. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •2.7. Окраска генома бактерий
- •2.7.1. Окраска генома бактерий методом Романовского-Гимза
- •2.7.2. Выявление генома по реакции Фельгена
- •Глава 3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным, морфологическим и физиолого-биохимическим признакам
- •3.1. Морфологические признаки
- •3.2. Культуральные признаки
- •Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
- •3.3.1. Тест на наличие каталазы
- •3.3.2. Тест на наличие оксидазы
- •3.3.3. Окислительно-ферментативный (о/f) тест на использование глюкозы (тест Хью — Лейфсона)
- •3.3.4. Тест на наличие уреазы
- •3.3.5. Тест на наличие протеолитической активности (протеиназы)
- •3.3.6. Тест на наличие диастазы (амилазы)
- •3.3.7. Тест на наличие липазы
- •3.3.8. Тест на использование углеводов и органических кислот
- •Тест на редуцирующую способность микроорганизмов
- •Тест на декарбоксилазы и дегидролазы
- •3.3.11. Тест на образование индола и сероводорода
- •3.3.12. Тест на использование фумарата в анаэробных условиях
- •Список использованной литературы
- •Методы исследований при идентификации микроорганизмов Методическое пособие
2.3.5. Окраска спор по Битеру
Приготовленный и высушенный мазок обрабатывают 10%-ным раствором формалина 10 мин, промывают водой, высушивают. Далее окрашивают аммиачным метиленовым синим в течение 3 мин, нагревая стекло до закипания жидкости. После промывания водой и высушивания докрашивают мазок 0,5%-ным раствором сафранина 3-5 мин. Вновь промывают, высушивают и микроскопируют. Споры наблюдаются окрашенными синим цветом, вегетативные клетки – красные.
2.3.6. Реактивы и красители для окрашивания спор бактерий:
Карболовый фуксин Циля ( см. пункт 2.1 3а).
Метиленовый синий Леффлера (см. пункт 2.2. 2б).
Водный 0,5 %-ный раствор нейтрального красного: 0,5г красителя растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
Хромовая кислота, 5%-ный раствор.
Соляная (или серная) кислота, 1%-ный раствор.
Водный 5%-ный раствор малахитового зеленого: 5 г красителя растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
Водный 0,5%-ный раствор сафранина: 0,5г красителя растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
Аммиачный метиленовый синий: к 20 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего (см. пункт 2.2.2) прибавляют 3 мл крепкого раствора NH4OH и 80 мл дистиллированной воды.
2.4. Методы окраски капсул
Некоторые виды бактерий образуют слизистые капсулы. При обычных методах окраски они остаются бесцветными. Для их выявления применяют специальные негативные методы окраски.
2.4.1. Окраска капсул по методу Бурри-Гинса
На середину предметного стекла наносят каплю туши и смешивают ее петлей с каплей культуры. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть. Далее фиксируют сулемой, метиловым спиртом или на пламени. После фиксации промывают водой и окраиввают 5-10 минут раствором тионина или фуксина. Снова промывают, высушивают и микроскопируют: бактерии красные или фиолетовые, фон – черный, капсулы – неокрашенные.
2.4.2. Окраска капсул по методу Михина
Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 2-3 мин при подогревании (до появления паров). Затем краситель быстро смывают водой и мазок высушивают фильтровальной бумагой. При микроскопии капсулы выглядят светло-розовыми, бактерии – темно-синие.
2.4.3. Окраска капсул методом Кауфмана
Мазок окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 2-3 мин. Краситель смывают водой и мазок погружают в 0,5%-ный раствор азотнокислого серебра на 3-4 мин, затем окрашивают карболовым раствором фуксина, разведенным 1:20, в течение 5-10 сек, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Капсулы выглядят темно-красными, бактерии темно-синие.
2.4.4. Реактивы и красители для окрашивания капсул
1. Приготовление туши: одну часть туши смешивают с девятью частями дистиллированной воды и стерилизуют при 1 атм 30 мин в пробирках, закрытых ватными пробками. Вместо стерилизации можно добавлять к туши несколько капель формалина. Подготовленную таким образом тушь выдерживают две недели, пока все взмученные частицы не осядут на дно. Для приготовления препарата осторожно берут только верхнюю часть отстоявшейся жидкости.
2. Метиленовый синий Леффлера: см. пункт 2.2. 2б.
3. Карболовый фуксин Циля: см. пункт 2.1.3а.
4.Раствор 0,5%-ный азотнокислого серебра: 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды.