- •Депарпамент образования и науки
- •Оглавление
- •Глава 1. Особенности некоторых методов микроскопии
- •Устройство и принцип работы темнопольного конденсора ои-13
- •1.1.1. Условия работы с темнопольным конденсором
- •1.1.2. Порядок работы с темнопольным конденсором:
- •Принцип и порядок работы с фазово-контрастным устройством кф-4
- •1.2.1.Устройство фазово-контрастной приставки кф-4
- •1.2.2. Порядок работы с фазово-контрастным устройством
- •Глава 2. Методы окраски фиксированных препаратов
- •2.1. Подготовка красителей и реактивов для окраски по методу Грама и техника окрашивания
- •2.1.1. Особенности подготовки красителей
- •2.1.2. Техника окраски по методу Грама
- •2.1.3. Дифференциация бактерий по Граму без окрашивания
- •2.2. Выявление кислотоустойчивости и спиртоустойчивости бактерий
- •2.2.1. Окраска по методу Циля-Нильсена
- •2.2.2. Красители и реактивы для окраски кислотоустойчивых бактерий
- •2.3. Методы окраски спор у бактерий
- •2.3.1. Метод Циля — Нильсена в модификации Мюллера
- •3.3.2. Окраска спор по методу Пешкова
- •2.3.3. Окраска спор по методу Виртца в модификации Саватеева
- •2.3.4. Окраска спор по методу Виртца в модификации Шеффелера и Фултона
- •2.3.5. Окраска спор по Битеру
- •2.3.6. Реактивы и красители для окрашивания спор бактерий:
- •2.4. Методы окраски капсул
- •2.5. Методы окраски жгутиков бактерий
- •2.5.1. Окраска жгутиков по методу Леффлера
- •2.5.2. Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •2.5.3. Окраска жгутиков по методу Грея
- •2.6. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •2.7. Окраска генома бактерий
- •2.7.1. Окраска генома бактерий методом Романовского-Гимза
- •2.7.2. Выявление генома по реакции Фельгена
- •Глава 3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным, морфологическим и физиолого-биохимическим признакам
- •3.1. Морфологические признаки
- •3.2. Культуральные признаки
- •Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
- •3.3.1. Тест на наличие каталазы
- •3.3.2. Тест на наличие оксидазы
- •3.3.3. Окислительно-ферментативный (о/f) тест на использование глюкозы (тест Хью — Лейфсона)
- •3.3.4. Тест на наличие уреазы
- •3.3.5. Тест на наличие протеолитической активности (протеиназы)
- •3.3.6. Тест на наличие диастазы (амилазы)
- •3.3.7. Тест на наличие липазы
- •3.3.8. Тест на использование углеводов и органических кислот
- •Тест на редуцирующую способность микроорганизмов
- •Тест на декарбоксилазы и дегидролазы
- •3.3.11. Тест на образование индола и сероводорода
- •3.3.12. Тест на использование фумарата в анаэробных условиях
- •Список использованной литературы
- •Методы исследований при идентификации микроорганизмов Методическое пособие
3.3.12. Тест на использование фумарата в анаэробных условиях
Определение потребности в формиате и фумарате применяют для выявления некоторых анаэробов, которые окисляют формиат и попутно восстанавливают фумарат в сукцинат. Готовят основной формиатно-фумаратный раствор (формиат натрия – 3 г; фумаровая кислота – 3 г; дистиллированная вода – 50 мл). Компоненты смешивают. Добавляют 20 гранул NaOH, размешивают до растворения этих гранул и фумаровой кислоты. Доводят рН смеси до 7, добавляя около 15 капель 4 н. NaOH, и стерилизуют фильтрованием. Добавляют 1 каплю раствора на 1 мл предварительно восстановленного пептонно-дрожжевого бульона: пептон — 5 г; триптиказа — 5; дрожжевой экстракт — 10 г; резазурин 0,25%-ный раствор — 4 мл; солевой раствор (см. ниже) — 40; раствор гемина (см. ниже) — 10; раствор витамина К1 (см. ниже) — 0,2 мл; цистеин – HC1 – 0,5 г; вода дистиллированная – 1 л. Автоклавируют при 0,5 атм.
Солевой раствор (г): безводного СаСl2 — 0,2; MgSO4 · 7H2O — 0,48; К2НРO4 — 1; КН2РО4 — 1; NaHCO3 — 10; NaC1 — 2. СаСl2 и MgSO4 растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Вливают 500 мл дистиллированной воды и, помешивая, добавляют остальные соли. После растворения солей добавляют 200 мл дистиллированной воды.
Раствор гемина: 005 г гемина растворяют в 1 мл 1 н. NaOH. Объем доводят дистиллированной водой до 100 мл. Автоклавируют при 0,5 атм.
Раствор витамина К1: 0,15 мл витамина К1 растворяют в 30 мл 95%-ного этанола в момент его инокуляции в атмосфере очищенной от кислорода двуокиси углерода.
Сравнивают рост на этой среде с ростом на среде без формиатно-фумаратного раствора. Положительная реакция — рост сильно стимулируется формиатно-фумаратным раствором. В некоторых случаях в отсутствие добавок вообще не наблюдается роста.
Положительный результат — Bacteroides соrrodens, Cytophaga sp., отрицательный — Bacteroides oralis, Flavobacterium sp.
Список использованной литературы
Гусев, М.В. Микробиология: Учебник для студ.биол.специальностей вузов / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. – 4-е изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия», 2003. – 464 с.
Ивчатов, А.Л. Малов, В.И. Химия воды и микробиология. –М.: ИНФРА, 2006. – 218 с.
Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия: Учеб. для хим., биол. и мед. спец. вузов. – 2-е изд., пераб. и доп. –М.: Высшая школа, 1998. – 479 с.
Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник. СПб: «Специальная литература», 1998. –592 с.
Медицинская микробиология / Гл.ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев. – М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. – 1200 с.
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / Под ред. А.А. Воробьева. –М.: Медицинское информационное агенство, 2004. – 691 с.
Медицинская микробиология. Часть первая / Под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. –СПб., 1999. – 272 с.
Методы почвенной микробиологии и биохимии /Под ред. Д.Г.Звягинцева. –М.: МГУ, 1998. – 352 с.
Микробиология: руководство к лаборатор.занятиям: Учебное пособие для студентов вузов / И.Л. Дикий, И.И. Сидорчук, И.Ю. Хрлупяк и др. –Киев: ИД «Профессионал», 2004. –594 с.
Микробиология: Учебник для вузов / О.Д. Сидоренко, Е.Г. Борисенко, А.А. Ванькова, Л.И. Войно. –М.: ИНФРА, 2005. – 287 с.
Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: Учебное пособие / Под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещеной. –М.: Медицина, 2004. – 576 с.
Определитель бактерий Берджи. В 2-х томах: Пер. с анг. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уильямса. –М.: Мир, 1997. – 800 с.
Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук и др.; Под ред. А.И. Нетрусова. –М.: Академия, 2005. –608 с.
Равилов, А.З., Гильмутдинов, Р.Я., Хусаинов М.Ш. Микробиологические среды. – Казань: Фэн, 1999. – 398 с.
Руководство к практическим занятиям по микробиологии6 Учеб.пособие / Под ред Н.С. Егорова. – 3-е изд., перераб. и доп. –М.6 Изд-во МГУ, 1995. – 224 с.
Сэги Й. Методы почвенной микробиологии / Пер. с венг. И.Ф. Куренного; Под ред. и с предисл. Г.С. Муромцева. –М.: Колос, 1983. – 296 с.
Тепер, Е.З. Практикум по микробиологии: учебное пособие для вузов / Е.З. Тепер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева; под ред. В.К. Шильниковой. – 6-е изд., стереотип. –М.: Дрофа, 2005. – 256 с.
Учебное издание