- •Депарпамент образования и науки
- •Оглавление
- •Глава 1. Особенности некоторых методов микроскопии
- •Устройство и принцип работы темнопольного конденсора ои-13
- •1.1.1. Условия работы с темнопольным конденсором
- •1.1.2. Порядок работы с темнопольным конденсором:
- •Принцип и порядок работы с фазово-контрастным устройством кф-4
- •1.2.1.Устройство фазово-контрастной приставки кф-4
- •1.2.2. Порядок работы с фазово-контрастным устройством
- •Глава 2. Методы окраски фиксированных препаратов
- •2.1. Подготовка красителей и реактивов для окраски по методу Грама и техника окрашивания
- •2.1.1. Особенности подготовки красителей
- •2.1.2. Техника окраски по методу Грама
- •2.1.3. Дифференциация бактерий по Граму без окрашивания
- •2.2. Выявление кислотоустойчивости и спиртоустойчивости бактерий
- •2.2.1. Окраска по методу Циля-Нильсена
- •2.2.2. Красители и реактивы для окраски кислотоустойчивых бактерий
- •2.3. Методы окраски спор у бактерий
- •2.3.1. Метод Циля — Нильсена в модификации Мюллера
- •3.3.2. Окраска спор по методу Пешкова
- •2.3.3. Окраска спор по методу Виртца в модификации Саватеева
- •2.3.4. Окраска спор по методу Виртца в модификации Шеффелера и Фултона
- •2.3.5. Окраска спор по Битеру
- •2.3.6. Реактивы и красители для окрашивания спор бактерий:
- •2.4. Методы окраски капсул
- •2.5. Методы окраски жгутиков бактерий
- •2.5.1. Окраска жгутиков по методу Леффлера
- •2.5.2. Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •2.5.3. Окраска жгутиков по методу Грея
- •2.6. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •2.7. Окраска генома бактерий
- •2.7.1. Окраска генома бактерий методом Романовского-Гимза
- •2.7.2. Выявление генома по реакции Фельгена
- •Глава 3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным, морфологическим и физиолого-биохимическим признакам
- •3.1. Морфологические признаки
- •3.2. Культуральные признаки
- •Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
- •3.3.1. Тест на наличие каталазы
- •3.3.2. Тест на наличие оксидазы
- •3.3.3. Окислительно-ферментативный (о/f) тест на использование глюкозы (тест Хью — Лейфсона)
- •3.3.4. Тест на наличие уреазы
- •3.3.5. Тест на наличие протеолитической активности (протеиназы)
- •3.3.6. Тест на наличие диастазы (амилазы)
- •3.3.7. Тест на наличие липазы
- •3.3.8. Тест на использование углеводов и органических кислот
- •Тест на редуцирующую способность микроорганизмов
- •Тест на декарбоксилазы и дегидролазы
- •3.3.11. Тест на образование индола и сероводорода
- •3.3.12. Тест на использование фумарата в анаэробных условиях
- •Список использованной литературы
- •Методы исследований при идентификации микроорганизмов Методическое пособие
3.3.8. Тест на использование углеводов и органических кислот
Подобного рода тесты основаны на способности микробов при утилизации углеводов и органических кислот образовывать кислоты и газы и изменять цвет индикатора среды. Следует помнить, что во избежание ложных реакций, при постановке тестов, основанных на изменении окраски среды, необходимо ставить контрольные тесты со стерильными средами и тесты с эталонными штаммами культур микроорганизмов, дающих как положительный, так и отрицательный результаты.
Водные растворы (10%-ные) испытуемых веществ стерилизуют при 0,5 атм и добавляют к основной минеральной среде Смита до конечной концентрации 0,5 — 1%. Минеральная основа среды Смита содержит (г/л): (NН4)2НРО4 — 1; КСl — 0,2; MgSO4 · 7Н2O — 0,2; дрожжевой экстракт — 0,2; агар — 15. Перед стерилизацией устанавливают рН 7.
До стерилизации вносят индикатор — бромтимоловый пурпурный в количестве 25 мл 0,04%-ного спиртового раствора на 1 л среды. Об использовании сахаров или кислот, а также других субстратов судят по подкислению среды, выявляемому по изменению цвета индикатора до желтого при изменении рН в интервале 6,8 — 6,2. При образовании газа из субстратов наблюдается как подкисление среды, так и разрывы столбика агара.
Для обнаружения газов используют также жидкую среду с поплавками (трубки Дюрхема). Поплавок представляет собой небольшую узкую микропробирку (3 — 40,5 см). Его опускают вверх дном в обычную пробирку с жидкой средой, которая при стерилизации заполняет поплавок. При развитии микроорганизмов, образующих газы, последние вытесняют жидкость из поплавка, где появляется пузырек и он поднимается вверх.
В микробиологической практике для обнаружения сахаролитических ферментов широкое применение имеют среды Гисса (жидкие или полужидкие, содержащие 0,2-0,5 % агара), называемые также «пестрым рядом»: к 100 мл дистиллированной воды прибавляют 1 г пептона и 0,5 г хлорида натрия. Пептон и соль растворяют при нагревании в течение нескольких минут, фильтруют через бумажный фильтр (для прозрачности раствора), устанавливают рН 7,2. Прибавляют нужный для исследования углевод в количестве 0,5-1 г на 100 мл среды и индикатор. Разливают в пробирки по 3 мл и стерилизуют автоклавированием при 0,5 атм 20 мин.
Из углеводов наиболее часто используют моно- и олигосахариды: глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, раффинозу, маннозу, трегалозу, целлобиозу, фруктозу; полисахариды: крахмал, инулин; многоатомные спирты: сорбит, дульцит, манит, глицерин, адонит, инозит; гликозиды: эскулин, салицин.
Чаще всего используют короткий «пестрый ряд», содержащий пять углеводов: глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу и манит.
Из индикаторов в средах Гиса используют или индикатор Андреде с кислым фуксином, которого вносят 1 мл на 100 мл среды или бромтимоловый синий – 0,1 мл 1,6% -ного раствора на 100 мл среды. В случае образования кислот микробной культурой при использовании индикатора Андреде цвет питательной среды изменяется от бесцветного при рН 7,2 до розового и интенсивно-красного в кислой среде; при использовании бромтимолого синего цвет среды изменяется от сине-зеленого при рН 7,2 до бледно-зеленого и желтого при рН 6,0.