3.1.3. Исследование компонентов сигнальных систем, участвующих в рецепции цинеола

При стимуляции обонятельной выстилки цинеолом, имеющего запах душистого эвкалипта, интенсивность флуоресценции усиливалась (n=38), что связано с повышением кальций-аккумулирующей способности мембран обонятельных клеток. Усиление сигнала достигало 100 отн. ед. (рис. 28 а), его максимальное значение устанавливалось через 10 с, а через 15 – 20 с он снижался, но не возвращался к исходному уровню даже спустя минуту после своего начала. Эту особенность реагирования обонятельного эпителия на цинеол отмечали и другие авторы (Dione, 1998; Reisert, Matthews, 1998). Регистрируя электрические ответы одиночных клеток, они показали, что реакция на цинеол длится и после того, как стимуляция прекращалась.

С флуоресцентной реакций на цинеол коррелирует изменение ЭОГ (рис. 28 б). При сопоставлении продолжительности светового и электрического сигналов видно, что они совпадали и длились около 20 с. Этот факт позволяет предположить, что изменения интенсивности флуоресценции комплекса: Са²⁺ХТЦ-КМ, как и динамики ЭОГ, обусловливаются реагированием рецепторных клеток на стимуляцию цинеолм.

Роль ионов кальция из внеклеточной среды мы выявляли с помощью ЭГТА. Данные представлены на рис. 29. Видно, что на фоне ЭГТА (2 мМ) уровень светового сигнала под воздействием цинеола (n=17) не изменялся, что свидетельствует об участии внеклеточного кальция в реакции на цинеол (рис. 29).

Участие циклонуклеотид-зависимых кальциевых каналов в рецепции цинеола мы исследовали посредством дилтиазема. Как показали реультаты, после пятиминутной инкубации ольфакторного эпителия в 100 мкМ растворе дилтиазема (n=17) обдувание препарата цинеолом не изменяло уровень светового сигнала по сравнению с исходным (рис. 30). Дилтиазем, как известно, блокирует Са²⁺каналы, зависимые от циклических нуклеотидов. Следовательно, усиление кальций-аккумулирующей способности клеточных мембран в ответ на цинеол обусловливалось входом ионов кальция из внеклеточной среды в цитозоль через цАМФ-зависимые каналы.

Чтобы определить, активируется ли аденилатциклаза под действием цинеола, мы ингибировали ее с помощью 2,5,-дидеоксиаденозина (10 мкМ), которым обрабатывали препарат перед стимуляцией одорантом (n=10). Как показали результаты наших исследований, при действии цинеолом на фоне заингибированной аденилатциклазы флуоресценция комплекса: Са²⁺-ХТЦ-КМ не изменялась (рис. 31). Это означает, что кальцийсвязывающая способность мембран обонятельных клеток зависит от активности аденилатциклазы.

Цинеол вместе с камфорой входят в одну группу химических соединений и обладают сходным влиянием на некоторые клеточные процессы (Abrahim et al., 2000). Поэтому мы предположили, что в рецепции этого одоранта, как и камфоры, могут участвовать тирозинкиназы. Для доказательства данного предположения обонятельную выстилку обрабатывали 100 мкМ раствором генистейна, а затем стимулировали одорантом. При действии на препарат цинеолом на его фоне (n=12) интенсивность свечения не менялась (рис. 32). Очевидно, в реакцию на цинеол вовлекается тирозинкиназа.

Таким образом, результаты исследования позволяют сделать вывод о том, что рецепция цинеола осуществляется с участием системы цАМФ, причем этот вторичный мессенджер синтезируется благодаря активации аденилатциклазы, сопряженной с тирозинкиназой.