24Серологический метод исследования. Реакция агглютинации (ра), механизм и методы постановки. Ингредиенты для их получение. Использование ра в диагностике инфекционных заболеваний.

Методы изучения антигенов или антител в биологическом материале больных, основанные на определенных реакциях иммунитета. Обнаружение в биологическом материале антител к возбудителю инфекции или антигенов позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования не обладают 100% специфичностью и чувствительностью при диагностике инфекционных заболеваний. Поэтому оценивать их результаты нужно с учетом клинической картины заболевания. Этим обусловлена необходимость использования для диагностики инфекции нескольких тестов, а также применение методов Western-blot, подтверждающих результаты скрининговых методов.

Реакции агглютинации В этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроциты и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок. Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента: 1) антиген (агглютиноген); 2) антитело (агглютинин) и 3) электролит (изотонический раствор натрия хлорида). Аг    +    АТ    +    электролит    =     агглютинат

Постановка ориентировочной реакции агглютинации (РА) на стекле с целью идентификации  бактерий кишечной группы.

На предметное стекло наносят каплями:

1-ая капля: - агглютинирующая сыворотка к возбудителям дизентерии; 2-ая капля: - агглютинирующая сыворотка к возбудителям брюшного тифа; 3-ья капля: - физиологический раствор (контроль). Добавляют в каждую каплю исследуемую чистую культуру бактерий. Перемешивают.

Примечание: положительный результат - наличие хлопьев агглютината, отрицательный - отсутствие хлопьев агглютината                                          

25 О- и H-диагностикумы.Диагностические сыворотки.

Иммунные диагностические сыворотки - препараты, содержащие известные антитела для определения родовой, видовой и типовой принадлежности антигена. Диагностикумы - препараты, содержащие известный антиген в виде взвеси живых или убитых бактерий, продуктов их расщепления, токсины, вирусы.

Если микробные клетки убивают высокой температурой, то получают О-диагностикум (О-антиген), если же ее обрабатывают формалином, то получают Н-диагностикум (Н-антиген).

Примеры диагностикумов: сальмонеллезный диагностикум, бруцеллезный диагностикум, туляремийный диагностикум.

Получение агглютинирующих сывороток.

Животным (чаще кроликам) 5 – 7 раз через промежутки времени парентерально вводят в возрастающих дозах микробные диагностикумы (проводят гипериммунизацию), а затем у них отбирают сыворотку крови, в которой содержатся антитела к тем микробам, из которых приготовлен диагностикум. Если иммунизацию проводят О-диагностикумом, то получают О-агглютинирующие сыворотки (содержат О-антитела), если Н-диагностикумом – Н-агглютинирующие сыворотки.

Агглютинирующие сыворотки могут быть неадсорбированными или нативными и адсорбированными.

Неадсорбированные сыворотки содержат групповые антитела к нескольким близкородственным видам микробов.

Адсорбированные сыворотки содержат антитела к одному или нескольким антигенам одного вида микроба. Если сыворотки содержат антитела только к одному антигену, они называются монорецепторными или моновалентными,  если к нескольким антигенам – групповыми адсорбированными сыворотками.

Примеры агглютинирующих сывороток: сальмонеллезная монорецепторная Н-агглютинирующая сыворотка, сальмонеллезная групповая адсорбированная О-агглютинирующая сыворотка, противохолерная О-агглютинирующая сыворотка и др.

Титр агглютинирующей сыворотки – наибольшее разведение сыворотки, при котором еще обнаруживается реакция агглютинации с антигеном (титр зависит от количества антител в крови: чем больше антител, тем выше титр сыворотки).