2.Современные методы специфической иммуно и генодиагностики инфекционных заболеваний. Http://www.Ramld.Ru/userfiles/file/perm/sherbo.Pdf

1.Методы генодиагностики:-гибридизационный анализ нуклеиновых кислот; -амплификационные технологии; -секвенирование нуклеиновых кислот;

РИФ основан на определении в составе анализируемого объекта радиоактивно меченных иммунных комплексов. Применяется для идентификации инфекционных агентов, аутоантител, оценки иммунного статуса (субпопуляции лимфоцитов и других иммунокомпетентных клеток, маркеры активации, молекулы адгезии и др.)

ИФА основан на инструментальной оценке взаимодействия комплексов иммунореагентов-антигенов и антител с использованием индикаторной ферментной метки. Определяют а\т к различным инфекционным агентам, некоторым лекарственным препаратам, аллергенам, аутоантитела, общее содержание иммуноглобулина класса Е. Метод позволяет также определять и антигены, что особенно широко применяется при диагностике онкологических заболеваний при использовании ИФА-тестов на онкомаркеры.

Методы секвенирования днк

определение нуклеотидной последовательности осуществляется следующими методами: сайт-специфического химического расщепления цепи;с помощью терминирующих дидезоксинуклеотидов (ф. сингер);с помощью вектора на основе фага м 13; праймер-опосредованная прогулка (для очень длинных фрагментов днк).

Полимеразная цепная реакция

Определение содержания РНК:- оценка дифференциальной экспрессии генов на уровне Транскрипции;- диагностика РНК содержащих вирусов (гепатит С или ВИЧ). Этапы проведения ОТ ПЦР:- на матрице РНК с помощью обратной транскриптазы синтезируют кДНК;- синтез с помощью обычной ПЦР

Метод прямой иммунофлуоресценции (ПИФ)

Окраска флуоресцирующими моноклональными антителами.

Билет 12

1.Бруциллез. Значение эпидемиологических, клинических данных и лабораторных показателей для диагностики.

2.Специфичекая профилактика бешенства.

БР-з-зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание, склонное к хронизации, протекающее с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной и половой систем.

Этиология:Brucella melitensis, b.suis, b.bovis, b.canis, b.ovis. Шаровидной формы Гр (-) , характеризуется высокой способностью к инвазии и внутриклеточному паразитированию, аэробные и микроаэрофильные неподвижные грамотрицательные. Бруцеллы достаточно устойчивы во внешней среде. В воде сохраняются свыше 2 мес, в сыром мясе - 3 мес, в засоленном - до 30 дней, в брынзе - 2 мес, в шерсти - до 4 мес. Погибают при нагревании до 60 °С через 30 мин, при кипячении - моментально. Чувствительны к действию многих дезинфицирующих средств - 2% раствор карболовой кислоты, 3% раствор креолина и лизола, 0,2-1% раствор хлорной извести и хлорамина убивают их в течение нескольких минут. 

Эпидем-я: Механизм – фекально-оральный; путь передачи – алиментарный или контактный. Факторы передачи – молочные продукты, шерсть(КРС,МРС,олени,свиньи), кожа, выделения больных животных. Постинфекционный иммунитет длится обычно 6-9 мес.

Патогенез: Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или повреждённые кожные покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путём возбудители заносятся в регионарные лимфатические узлы и накапливаются в них- лимфогенная фаза и соответствует инкубационному периоду заболевания.При длительном сохранении бруцелл в лимфатических узлах происходит иммунологическая перестройка организма, накапливаются антитела, выявляемые в серологических реакциях, становится положительной кожная аллергическая проба с бруцеллином, но клинические проявления не развиваются (фаза первичной латенции).  Вслед за ней наступает гематогенная фаза (фаза гематогенного заноса). Развиваются бактериемия и эндотоксинемия, появляется клиническая симптоматика острого бруцеллёза. С током крови возбудители разносятся по органам, богатым ретикулоэндотелием, и фиксируются в них (фаза полиочаговых локализаций). Происходит активация макрофагальной системы, в органах и тканях развиваются диффузные изменения, формируются очаговые скопления макрофагов с внутриклеточно паразитирующими в них бруцеллами.В связи с сенсибилизацией организма развиваются аллергические проявления - реакции гиперчувствительности замедленного типа, а иногда и гиперчувствительности немедленного типа. 

Клиника: Инкубационный период равен 1-4 нед, но может удлиняться до 2-3 мес при развитии латентной инфекции. Начало постепенное, реже острое. Выраженная лихорадка 39-40⁰С, длится 3-7 дней и более. Приступы лихорадки сменяются безлихорадочными периодами в течение 1,5 мес. На высоте лихорадки возбуждение, бессонница, проливные поты. Больные жалуются на недомогание, разбитость, снижение работоспособности, боли в суставах, различных группах мышц и пояснице. 

Подострая форма. Характерно рецидивирующее течение. Лихорадочные периоды с температурной реакцией разной степени выраженности и продолжительности (чаще по несколько дней) чередуются с периодами апирексии. Гораздо чаще, чем при остром бруцеллёзе развиваются полиорганные поражения и аллергические реакции (экзантемы, дерматиты, реакции со стороны поверхностных сосудов кожи и др.). В первую очередь наблюдают поражения опорно-двигательного аппарата: артриты и полиартриты, синовиты, бурситы, тендовагиниты и т.д. Типичны поражения половой сферы - у мужчин орхиты и эпидидимиты, у женщин расстройства менструального цикла, эндометриты, самопроизвольные аборты. Поражения нервной системы могут проявиться в виде плекситов, ишиорадикулитов. 

Специф. лаб. Данные: Серодиагностика – реакция Райта, Хеддельсона. Внутрикожная аллергическая проба с бруцелином (пр.Бюрне). Проба считается положительной при диаметре отёка более 3 см.РКА и РЛА, ИФА, обнаруживающие антигены бруцелл в биологических средах (в первую очередь в крови). 

Для выделения возбудителя проводят посевы крови, пунктатов лимфатических узлов, спинномозговой жидкости, костного мозга.

Лечение: Схемы или или, выбираем одну.

-Рифампицин (по 600-900 мг/сут) и доксициклин (по 200 мг/сут) внутрь непрерывным курсом, длительностью не менее 6 нед. При рецидивах курс лечения повторяют.  - Доксициклин (по 100 мг 2 раза в сутки) курсом на 3-6 нед и стрептомицин (по 1 г внутримышечно 2 раза в сутки) в течение 2 нед. Это сочетание эффективнее предыдущего, особенно при спондилите, но применяемые препараты проявляют высокую токсичность.  - Офлаксацин (по 200-300 мг 2 раза в сутки) внутрь и рифампицин в вышеуказанных дозах.  Дезинтоксикационные средства по общим принципам их применения, АТФ, метионин, мягкие иммуностимуляторы (дибазол, пентоксил, тималин и др.). Противовоспалительные средства - нпвс (индометацин, бруфен и др.). При болях (невриты, невралгии, боли вегетативного характера) проводят симптоматическую терапию в виде новокаиновых блокад 1% раствором новокаина, внутривенные введения 0,25% раствора новокаина в возрастающих дозах.