6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Лабораторная_диагностика_туберкулеза_Ерохин_В_В_ред_

	ламентирующих молекулярно-генетические исследования и ра-
	боту с патогенами III–IV группы.
	Рекомендуемая литература
	1.	Методические указания (МУ 1.3.1888-04) «Организация работы
		при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного
		патогенными биологическими агентами III–IV групп патоген-
		ности».
	2.	Методические указания (МУ 3.5.5.1034-01) «Обеззараживание
		исследуемого материала, инфицированного бактериями I–IV
		групп патогенности, при работе методом ПЦР» – М., 2001.
	3.	Организация работы лабораторий, использующих методы ам-
		плификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, со-
		держащим микроорганизмы I–IV групп патогенности. МУ 1.3.
		2569-09 Москва, 2009
	4.	ПРИКАЗ МЗ РФ от 07.02.2000 №45 «О системе мер по повы-
		шению качества клинических лабораторных исследований в уч-
		реждениях здравоохранения Российской Федерации
	5.	Руководство "Использование ультрафиолетового бактерицид-
		ного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях" Р
		3.5.1904-04. – М.: 2005.
	6.	Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы
		с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и
		возбудителями паразитарных болезней" СП 1.3.2322-08, Феде-
		ральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
		и благополучия человека, 2008.
	7.	Санитарные правила и нормы "Правила сбора, хранения и уда-
		ления отходов лечебно-профилактических учреждений" Сан-
		ПиН 2.1.7.728-99, Минздрав России, 1999.
	8.	Черноусова Л.Н. Алгоритм микробиологических исследований
		для диагностики туберкулезной инфекции. Методическое по-
СЛУШАТЕЛЯ		собие для врачей (сокращенный вариант) // Туберкулез и бо-
		лезни легких. Нью-терра. – 2011. – №11. – С. 58–67
	9.	Черноусова Л.Н., Севастьянова Э.В., Андреевская С.Н., Ларио-
		нова Е.Е., Смирнова Т.Г. Алгоритм микробиологических иссле-
ТЕТРАДЬ		дований для диагностики туберкулезной инфекции. Методиче-
		ское пособие для врачей №УМО-17-28/248 от 12.07.2011 М. –
		2011. – С. 52
РАБОЧАЯ	10.Шухов B.C., Рюмина И.И. Безопасность на рабочих местах в ле-
		чебно-профилактических учреждениях/Профилактика риска про-

628

фессионального инфицирования вирусами гепатитов В, С, ВИЧ // Пособие для медицинских работников. – М., 2008. – 79 с.

Тема 12.4. «Соблюдение правил биологической безопасности при работе в лаборатории молекулярно-генетических исследований»

Количество аудиторных часов – 1 Вопросы, прорабатываемые на семинаре:

•Правила организации безопасной работы лаборатории

•Правила соблюдения личной безопасности

Цель семинара – ознакомление с правилами биологической безопасности при работе в лаборатории молекулярно-генетиче- ских методов исследований.

Семинар будет проведен в интерактивной форме. При обсуждении темы семинара ведущий и слушатели используют материалы методических указаний и санитарно-эпидемических правил, регламентирующих молекулярно-генетические исследования и работу с патогенами III–IV группы.

	Рекомендуемая литература
	1.	Методические указания (МУ 1.3.1888-04) «Организация работы
		при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного
		патогенными биологическими агентами III–IV групп патоген-
		ности».
	2.	Методические указания (МУ 3.5.5.1034-01) «Обеззараживание	СЕМИНАРАМ
		плификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, со-
		исследуемого материала, инфицированного бактериями I–IV
		групп патогенности, при работе методом ПЦР» – М., 2001.
	3.	Организация работы лабораторий, использующих методы ам-
		держащим микроорганизмы I–IV групп патогенности. МУ 1.3.	К
			МАТЕРИАЛЫ
		2569-09 Москва, 2009
	4.	Руководство "Использование ультрафиолетового бактерицид-
		ного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях" Р
		3.5.1904-04. – М.: 2005.	МЕТОДИЧЕСКИЕ
	5.	Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы
		с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и
		возбудителями паразитарных болезней" СП 1.3.2322-08, Феде-
		ральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
		и благополучия человека, 2008.	3.
	6.	Санитарно-эпидемиологические правила "Порядок учета, хра-
			Раздел
		нения, передачи и транспортирования микроорганизмов I–IV

629

РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ СЛУШАТЕЛЯ

групп патогенности" СП 1.2.036-95, Госкомсанэпиднадзор России, 1995.

15.Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность». – М., 2010.

16.Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». – М., 2010.

17.Санитарные правила и нормы "Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений" СанПиН 2.1.7.728-99, Минздрав России, 1999.

18.Семина Н.А., Ковалева Е.П., Акимкин В.Г., Храпунова И.А., Селькова Е.П. Профилактика внутрибольничного инфицирования медицинских работников. Практическое руководство // М.: Издательство РАМН, 2006. – 152 с.

19.Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения», (В редакции ФЗ от 30 декабря 2001, №196ФЗ). – М.: 2002. – 48 С.

20.Шухов B.C., Рюмина И.И. Безопасность на рабочих местах

влечебно-профилактических учреждениях/Профилактика риска профессионального инфицирования вирусами гепатитов В, С, ВИЧ // Пособие для медицинских работников. – М., 2008. – 79 с.

Тема 12.5. «Контроль качества работы молекулярно-генетических лабораторий»

Количество аудиторных часов – 1 Вопросы, прорабатываемые на семинаре:

•Внутренний контроль качества

•Участие в системе внешнего контроля качества (ФСВОК) Цель семинара – ознакомление с комплексом мероприятий по

контролю качества работы лабораторий, использующих молеку- лярно-генетические методы исследования.

Семинар будет проведен в интерактивной форме. При обсуждении темы семинара ведущий и слушатели используют материалы методических указаний и санитарно-эпидемических правил, регламентирующих молекулярно-генетические исследования и работу с патогенами III–IV группы.

630

Рекомендуемая литература
1.	"Методические указания по детекции патогенной микрофлоры
	в клиническом материале, пищевых продуктах, объектах внеш-
	ней среды и генетической идентификации клеток с помощью
	полимеразной цепной реакции" № 01-19/123-17 от 18.10.96,
	Госкомсанэпиднадзор России, 1996.
2.	ГОСТ Р ИСО 15189-2006 Лаборатории медицинские. Частные
	требования к качеству и компетентности
3.	Руководство "Использование ультрафиолетового бактерицид-
	ного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях" Р
	3.5.1904-04. – М.: 2005.
4.	Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы
	с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и
	возбудителями паразитарных болезней" СП 1.3.2322-08, Феде-
	ральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
	и благополучия человека, 2008.
5.	Санитарно-эпидемиологические правила "Порядок выдачи са-
	нитарно-эпидемиологического заключения о возможности
	проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний
	человека I–IV групп патогенности (опасности), генно-инже-
	нерно-модифицированными микроорганизмами, ядами био-
	логического происхождения и гельминтами" СП 1.2.1318-03,
	Минздрав России, 2003.
6.	Санитарно-эпидемиологические правила "Порядок учета, хра-
	нения, передачи и транспортирования микроорганизмов I–IV		СЕМИНАРАМК
	ления отходов лечебно-профилактических учреждений" Сан-
	групп патогенности" СП 1.2.036-95, Госкомсанэпиднадзор Рос-
	сии, 1995.
7.	Санитарные правила и нормы "Правила сбора, хранения и уда-		МАТЕРИАЛЫМЕТОДИЧЕСКИЕ3.Раздел
	ПиН 2.1.7.728-99, Минздрав России, 1999.

631

Раздел 4. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

Очная часть

Модуль 2. Микроскопические методы диагностики кислотоустойчивых микобактерий

Тема 2.1. Световая, люминесцентная, LED-микроскопия

Количество аудиторных часов – 2 Практическое занятие проводится в интерактивной форме.

Учитываются знания, полученные на лекциях, семинарских занятиях, а также базовые знания, полученные на этапе самоподготовки модуля 2 «Микроскопические методы диагностики кислотоустойчивых микобактерий» тема 2.1. «Световая, люминесцентная и LED-микроскопия», а также модуля 1. «Основные биологические характеристики микроорганизмов рода Mycobacterium» темы 1.4 « Обзор микробиологических методов изучения микроорганизмов рода Mycobacterium и их место в диагностике туберкулеза».

Входе практического занятия планируется разобрать:

•Технику приготовления препаратов для микроскопии

•Особенности приготовления реагентов для окраски

•Правила оценки результатов исследования и разбор типичных ошибок при микроскопировании; Цель – дать слушателям практические навыки приготовления

препаратов, красителей, проведения микроскопических исследований на КУМ.

	Рекомендуемая литература
СЛУШАТЕЛЯ	1.	Определитель бактерий Берджи. Под ред. Дж. Хоулта. – М.,
		Здравоохранения. – Женева: 1994. – 146 с.
		1997. – Девятое издание. – Т.2. – С. 606–612.
	2.	Практическое руководство по биологической безопасности в
		лабораторных условиях. 2–ое изд. – Всемирная Организация
ТЕТРАДЬ	3.	Приказ МЗ РФ от 12.01.1999г. № 8 «О введении в действие По-
		ложения о порядке инспекционного контроля за деятельностью
		клинико-диагностических и экспертных лабораторий в здраво-
РАБОЧАЯ		охранении».

632

4.Приказ МЗ РФ от 21.03.2003г. №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации», Приложение 10.

5.Приказ МЗ РФ от 25.12.1997г. №380 «О состоянии и мерах по совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в учреждениях здравоохранения Российской Федерации».

6.Приказ МЗСР РФ от 2.10.2006г. № 690 «Об утверждении учетной документации по выявлению туберкулеза методом микроскопии».

7.Приказ МЗСР РФ от 29.12.2010 г. №1224н «Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи больным туберкулезом в Российской Федерации».

8.Пузанов В.А., Николаева Г.М. Тинкториальные особенности микобактерий при использовании стандартных и нетрадиционных методов окраски // Проблемы туберкулеза. – 1994. – № 1.

– С. 31–35.

9.Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» (СП1.3.2322-08).

10.Фтизиатрия. Национальное руководство. Под ред. М.И. Перельмана. – М., 2007.

11.Ba F., Rieder H.L. A comparison of fluorescence microscopy with the Ziehl-Neelsen technique in the examination of sputum for acidfast bacilli // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. – 1999. – V. 3(12). – P. 1101– 1105.

12.Collins C.H., Grange J.M., Yates M.D. Tuberculosis Bacteriology. 2nd ed. Organization and Practicе. Oxford: Butterworth-Heinemann, 1997.

13.Enarson D.A., Rieder H.L., Arnadottir T. – Technical Guide for Sputum Examination for Tuberculosis by Direct Microscopy. IUATLD, 1994. – P. 49–64.

14.Laboratory services in tuberculosis control. Part I: Organization and management. – 1998. – 64 pp.

15.Laboratory services in tuberculosis control. Part II: Microscopy. – 1998. – 62 pp.

16.Neelsen P. Zentralblatt fur de Medizinischen Wissenschafen – 1883.

– V.21. – P. 497.

17.Shekarabi M., Oormazdi M., Ghamchili A., Razavi S.M. A comparative study on the two methods of direct fluorescent antibody and Kynion acid-fast staining techniques on the laboratory diagnosis of

Раздел 4. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

633

РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ СЛУШАТЕЛЯ

cryptosporidiosis // J. of Iran Un. of Med. Sc. – 2001. – V.8(25). – P. 300–307.

18.Smithwick R.W. Laboratory Manual for Acidfor Acid-fast Microscopy. 2nd ed. Atlanta: Centers for Disease Control, 1976.

19.The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. France, Paris, IUATLD.

–1998.

20.Ziehl F. Zur Farbung des Tuberkelbacillum // Deut. Med. Wochenschrift. – 1882. – V.8. – P. 451.

Тема 2.3. Настройка и эксплуатация микроскопов. Вспомогательное лабораторное оборудование

Количество аудиторных часов – 2 Практическое занятие проводится в интерактивной форме.

Учитываются знания, полученные на лекциях, семинарских занятиях, а также базовые знания слушателей, полученные на этапе самоподготовки модуля 2 «Микроскопические методы диагностики кислотоустойчивых микобактерий» тема 2.1. «Световая, люминесцентная и LED-микроскопия» и тема 2.2. «Обеспечение качества микроскопических исследований», а также модуля 1. «Основные биологические характеристики микроорганизмов рода Mycobacterium» темы 1.4 «Обзор микробиологических методов изучения микроорганизмов рода Mycobacterium и их место в диагностике туберкулеза».

Входе практического занятия планируется разобрать:

•Правила настройки микроскопов для световой микроскопии в проходящем свете с иммерсионными объективами

•Правила настройки микроскопов для люминесцентной микроскопии с ртутной лампой и с LED-источником света;

Цель – дать слушателям практические навыки настройки мик-

роскопов для выявления кислотоустойчивых микобактерий

Рекомендуемая литература

1.Приказ МЗ РФ от 21.03.2003г. №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации», Приложение 10.

2.Унифицированный метод микроскопического выявления кислотоустойчивых микобактерий: Руководство для клинико-диаг- ностических лабораторий лечебно-профилактических учреждений / В.В.Ерохин, В.И.Голышевская, С.А.Попов, В.А.Пузанов,

634

Г.В.Евгущенко, Э.В.Севастьянова, Л.П.Мартынова, О.А.Иртуганова. – М.–Тверь: Триада, 2008. – 132 с.

3.AFB microscopy training. A.Fujiki. – Tokyo. – 2005. – 84P.

4.Laboratory services in tuberculosis control. Part I: Organization and management. – 1998. – 64 pp.

5.Laboratory services in tuberculosis control. Part II: Microscopy. – 1998. – 62 pp.

Тема 3.3. Правила посева, культивирования, идентификации и интерпретации результатов

Количество аудиторных часов – 2 Практическое занятие проводится в интерактивной форме.

Учитываются знания, полученные на лекциях, семинарских занятиях, а также полученные базовые знания слушателей на этапе самоподготовки изложенные в темах модуля 1. «Основные биологические характеристики микроорганизмов рода Mycobacterium» темы 1.3. «Характеристика и таксономия микроорганизмов рода Mycobacterium» и темы 1.4 « Обзор микробиологических методов изучения микроорганизмов рода Mycobacterium и их место в диагностике туберкулеза», а также модуля 3. «Культуральные методы выявления и идентификации возбудителя туберкулеза и микобактериозов» тема 3.1 «Правила сбора, транспортировки, обработки и хранения диагностических материалов», тема 3.2. «Питательные среды: характеристики и правила приготовления» и тема 3.3. «Правила посева, культивирования, идентификации и интерпретации результатов».

В ходе практического занятия планируется разобрать следующие вопросы:

•Кросс-контаминация при проведении культуральных исследований и правила работы в шкафах биологической безопасности;

•Посев и особенности культивирования микобактерий;

•Интерпретация и учет результатов посева диагностического материала;

•Первичная идентификация МБТ на основе культуральных свойств.

•Видовая дифференциация M.tuberculosis complex от нетуберкулезных микобактерий (например, методом иммунохроматографии).

Цель – продемонстрировать слушателям практические навыки

работы при осуществлении процедур посева, культивирования,

Раздел 4. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

635

РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ СЛУШАТЕЛЯ

биохимических методов идентификации микобактерий различных видов, интерпретации и учета результатов. Знакомство с алгоритмом проведения исследований. Разбор наиболее частых ошибок при осуществлении перечисленных процедур и методов.

Рекомендуемая литература

1.Вейсфеллер Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерии. – Изд. Академия Наук Венгрия. Будапешт. – 1975. – 335 с.

2.Оттен Т.Ф., Васильев А.В. Микобактериоз.– СПб: Медицинская пресса, 2005.–224 с.

3.Приказ МЗ РФ от 21.03.2003г. №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации», Приложение 11.

4.Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» (СП1.3.2322-08).

5.Фтизиатрия. Национальное руководство. Под ред. М.И. Перельмана. – М., 2007.

6.Collins C.H., Grange J.M., Yates M.D. Tuberculosis Bacteriology. 2nd ed. Organization and Practicе. Oxford: Butterworth-Heinemann, 1997.

7.Kantor I.N., Kim S.J., Frieden T. et al. Laboratory Services in Tuberculosis Control. Parts I–II. – 1998. – Switzerland, Geneva, WHO.

8.Kent P.T., Kubica G.P. Public Health Mycobacteriology. A Guide for the Level III Laboratory. USA, Atlanta, Centers for Disease Control (CDC). – 1985 & 1995.

9.Laboratory services in tuberculosis control. Part III: Culture. – 1998.

– 96 pp.

10.Mykobacterien und mykobacterielle Krankheiten/ G.Meissner. – Veb G.Fischer Verlag Jena. – 1980. – 377s.

11. The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. IUATLD. – 1998. – 110 pp.

Модуль 4. Лекарственная чувствительность микобактерий и методы ее определения

Тема 4.3. Правила разведения препаратов и приготовление питательных сред

Количество аудиторных часов – 1

636

Практическое занятие проводится в интерактивной форме. Разбираются примеры приготовления питательных сред для постановки тестов на лекарственную чувствительность выделенных культур МБТ. Даются лабораторные ситуационные задачи.

Учитываются знания, полученные на семинарских занятиях, а также полученные базовые знания слушателей на этапе самоподготовки: Модуль 4. «Лекарственная чувствительность микобактерий и методы ее определения» тема 4.3. «Правила разведения препаратов и приготовление питательных сред».

В ходе практического занятия планируется разобрать следующие вопросы:

•Правила расчета разведений ПТП для приготовления питательных сред;

•Примеры расчетов разведения и приготовления питательных сред для постановки тестов на лекарственную чувствительность МБТ.

Цель практического занятия – дать навыки по приготовлению

питательных сред с конкретными противотуберкулезными препаратами.

Рекомендуемая литература

1.Приказ МЗРФ № 109 от 21 марта 2003 г. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».

2.Guidelines for drug susceptibility testing for second-line anti-tubercu- losis drugs for dots-plus. WHO/CDS/TB/2001.288. – 2001. – 12 pp.

3.Policy guidance on drug-susceptibility testing (DST) of second-line antituberculosis drugs/ WHO/HTM/TB/2008.392. – 2008. – 20 pp.

Модуль 5. Методы выявления возбудителя туберкулеза и определения лекарственной чувствительности с использованием автоматизированных и полуавтоматизированных систем

Тема 5.1. Пробоподготовка, особенности культивирования, выделения и идентификации культур на автоматизированных и полуавтоматизированных системах

Количество аудиторных часов – 2.

Практическое занятие проводится в интерактивной форме. Учитывается знания, полученные на лекциях, семинарских занятиях, а также базовые знания слушателей, полученные на этапе самоподготовки модуля 5 «Методы выявления возбудителя туберкулеза и определения лекарственной чувствительности с

Раздел 4. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

637