28.Цитогенетический метод: суть, этапы, назначение.

Цитогенетический метод. Применяют с 1956 г.

Развитие современной цитогенетики человека связано с именами цито­логов Д.Тио и А.Левана. В 1956 г. они первыми установили, что у человека 46 (а не 48, как думали раньше) хромо­сом, что положило начало широкому изучению митотических и мейотических хромосом человека.

Суть: микроскопическое изучение хромосомных комплексов в клетках человека; материалом для кариотипирования служат клетки крови, амниотической жидкости и т.д.

Кроме того, этот метод применяют при исследовании мутагенного действия различных химических веществ, пестицидов, инсектицидов,лекарственных препаратов и др.

В период деления клеток на стадии метафазы хромосомы имеют более четкую структуру и доступны для изучения. 

Обычно исследуют лейкоциты периферической крови человека, которые помещают в специальную питательную среду, где они делятся. Затем готовят препараты и анализируют число и строение хромосом. Разработка специальных методов окраски значительно упростила распознавание всех хромосом человека, а в совокупности с генеалогическим методом и методами клеточной и генной инженерии дала возможность соотносить гены с конкретными участками хромосом. Комплексное применение этих методов лежит в основе составления карт хромосом человека.

Цитологический контроль необходим для диагностики хромосомных болезней, связанных с анеуплоидией и хромосомными мутациями. Наиболее часто встречаются болезнь Дауна (трисомия по 21-й хромосоме), синдром Клайнфелтера (47 XXY), синдром Шерешевского — Тернера (45 ХО) и др. Потеря участка одной из гомологичных хромосом 21-й пары приводит к заболеванию крови — хроническому миелолейкозу.

При цитологических исследованиях интерфазных ядер соматических клеток можно обнаружить так называемое тельце Барри, или половой хроматин. Оказалось, что половой хроматин в норме есть у женщин и отсутствует у мужчин. Он представляет собой результат гетерохроматизацииодной из двух Х-хромосом у женщин. Зная эту особенность, можно идентифицировать половую принадлежность и выявлять аномальное количество Х-хромосом.

Метод пренатальной диагностики заключается в получении околоплодной жидкости, где находятся клетки плода, и в последующем   биохимическом   и цитологическом определении возможных наследственных аномалий. Это позволяет поставить диагноз на ранних  сроках   беременности  и принять решение о се продолжении или прерывании.

29.Молекулярно — генетический метод : суть и назначение. Основные этапы пцр.

Более 500 заболеваний

Предрасположенность к вирусам, использование любых тканей и клеток c ДНК

Проведение анализа на любой стадии онтогенеза

ПРЯМАЯ: использ для уже известных заболеваний; наследст заболевания, имеющие клонированные гены c известной последовательностью нуклеотидов

Мутации в гене

Высокая точность, нед надобности в анализе всей семьи

КОСВЕННАЯ: если мутации в гене не выявлены, использование маркеров, находящихс рядом c изучаемым геном, точная!

В основе всей диагностики – ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР) – селективная амплиификация (клонирование) фрагмента ДНК ин витро.

Полимеразная цепная реакция . 1993 г. Кэрри Мюмме.

Модель репликации ДНК: выделение ДНК Денатурация ДНК  отжиг, гибридизация праймеров c матричной ДНК, амплификация – получение множест копий участков ДНК  достраивание (удлинение, элонгация), электрофорез ДНК – распределение ДНК в спец геле.

МЕТОДИКИ:

• Гибридизация ДНК с использованием ДНК-зондов.

• Секвенирование – точная последовательность генов (точковые мутации, делеции и инверсии)

Значение: