Среда Олькеницкого

К 100мл стерильного питательного агара добавляют 1г лакто­зы, 0,02г соли Мора, 0,03г гипосульфита, 1г сахарозы, 0,1г глюкозы, 1г мочевины и 0,4мл 0,4% раствора фенолового красного.

Предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством воды, а в другой -мочевину с углеводами. После растворения содержимое обеих пробирок смешивают с агаром и фильтруют через стерильную марлю. Стерилизуют текучим паром 3дня подряд по 20мин. Горячую среду скашивают, оставляя столбик высотой 2 см. Среда прозрачная, имеет красный цвет с ко­ричневым оттенком.

Рецепт 11

Элективная дифференциально-диагностическая среда

для выделения грибов рода Саndida

18-20г агар-агара растворяют при кипячении в 500мл дистил­лированной воды, затем добавляют до 1л фильтрат сусла, имеющего 6-8% карамели (солод пожаренный при 150-170°С в течение 2,5ч). После установления рН 6,6-6,8среду разливают в колбы и автоклавируют при 1атм. 15мин. для проверки стерильности среду ставят в термостат при температуре 37°С на 24ч. Стерильную среду нагре­вают до 100°С и остывшую до 47-50°С разливают в чашки Петри или пробирки. Чашки со средой хранят в холодильнике до 15-30дней в целлофановых пакетах с целью предотвращения высыхания.

Рецепт 12

Среда для анаэробной ферментации сахаров

Приготовление экстракта дрожжей:

25г дрожжей растворить в 100мл дистиллированной воды, про­кипятить 45мин, затем после охлаждения центрифугировать при 3000 об/мин в течение 45 мин.Слить в колбу и довести до кипения. Раз­лить в стерильные пробирки и поставить в термостат при 37°С на24ч.

На 1л дистиллированной воды внести 10г трипсина Дифко, 1 мл экстракта дрожжей, 10г манита (глюкозы), 2г агар-агара и0,04г бромкрезолпурина, довести до кипения, затем стерилизовать в автоклаве при 0,5атм. в течение 20мин. Разлить в пробирки до высоты 10-12см.

Рецепт 13

Кровяной агар с эскулином

В 1мл МПБ вносят 5г хлорида натрия, 1г эскулина (получают из конского каштана), 20г агар-агара.

В стерилизованную при 121°С среду в течение 15мин с рН 7,4, охлажденную до 45-48°С, добавляют 50мл дефибринированной крови барана, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки со средой выдерживают в термостате при 37°С в течение 24ч с целью просушивания и проверки стерильности. Чашки хранят в холодильнике при температуре 4-б°С и используют в течение 15дней со дня при­готовления.

Рецепт 14

Водный раствор пептона

3г пептона помещают в колбу и доливают до 100мл водопро­водной водой, стерилизуют при 121°С в течение 10мин и хранят в холодильнике при температуре б-8°С в течение 30суток.

Иммунологические методы исследования молока

Иммунологические факторы молока определяют локальную резистентность молочной железы, ее сопротивляемость к развитию воспа­лительных процессов, коррелируют с фактором защиты всего организ­ма и имеют особенности в зависимости от функционального состояния органа.

Определение лизоцимов молока по в.И.Мутовину

В основе выявления лизоцимов положен метод диффузии в агар и образования зоны задержки роста (ЗЗР) тест-культуры микроба. На агаровую пластинку в чашке Петри наносят по 0.2мл суточной буль­онной тест-культуры и равномерно распределяют по всей поверхнос­ти. Выдерживают 20-30мин при комнатной температуре для пропиты­вания агара, а затем с помощью пробойника диаметром 0,8-1см де­лают 4луночки, в которые вносят по 0,01мл (2капли) исследуемо­го молока. Чашки выдерживают при комнатной температуре (18-20°С)30-40мин, а затем 16-18ч в термостате при температуре 36-38°С, после чего измеряют ЗЗР

а) «Лизоцим молока» - ЛМ

В качестве тест-культуры используют золотистый стафилококк штамм ВМ- 57,выделенный из молока здоровой коровы.

Максимальный уровень ЛМ (25мм и более) у здоровых коров на2-6месяцах лактации, у больных -понижен (менее 18мм) или от­сутствует (0).Термостабилен, разрушается при температуре 70°С, в сыром молоке сохраняется до 10дней при температуре 4-6°С.

б) «Лизоцим вымени» - ЛВ

В качестве тест-культуры используют слезный микрококк Фле­минга.

Не коррелирует с ЛМ, повышается уровень в молоке в конце лактации и у больных маститом коров. В сыром молоке сохраняется до 10дней при температуре 4-б°С.

в) «Лизоцим колостральный» -ЛК

В качестве тест-культуры используют белый стрептококк штамм.

Максимальные концентрации ЛК в молозиве, через 10дней после отела его уровень ниже уровня ЛМ.

г) «Лизоцим термостабильный» -ЛТ

В качестве тест-культуры используют золотистый стафилококк штамм ВМ-57.

Выявляется в молоке стародойных коров после прогревания при температуре 70°С в течение 30мин и сохраняется до 1,5-2,0мес., в сыром молоке сохраняется 5-7дней

д) «Лизоцим инверсионный» -ЛИ

В качестве тест-культуры используют розовый стафилококк штамм 56.

Отсутствует в молоке здоровых коров, обнаруживается в секрете пораженных маститом долей вымени.

е) «Лизоцим основной»- ЛО

В качестве тест-культуры используют ацидофильную палочку штамм 17т. Определяют методом серийных разведении. В разведения молока (молозива) вносят в объеме 10% суточную бульонную тест-культуру, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение суток, после чего учитывают рост.

В молозиве ЛО действует бактерицидно в разведении 1:10 000, на 10-й день после отела в молоке его антибактериальное действие проявляется в разведении 1:2-1:4,а у больных маститом коров ЛО несколько повышается.