- •Контроль над воспроизводством стада
- •1. Списки коров под осеменение ( на 1 число каждого месяца).
- •Методы акушерско-гинекологического исследования животных
- •Методы диагностики
- •Лабораторные методы диагностики беременности
- •Диагностика беременности у коров Ректальный метод диагностики
- •Метод ранней диагностики стельности коров по содержанию прогестерона в молоке
- •Ультразвуковая диагностика стельности
- •Признаки беременности у кобыл при ректальном исследовании
- •Диагностика беременности у овец и коз
- •Диагностика беременности у свиней
- •Диагностика беременности у собак и кошек
- •Диагностика беременности у крольчих
- •Симптоматические аборты Скрытый аборт
- •Идиопатические аборты
- •Инфекционные и инвазионные аборты
- •Аборты при бруцеллезе
- •Аборты при лептоспирозе
- •Аборты при листериозе у свиней
- •Аборты при микоплазмозе свиней
- •Аборты при хламидиозе
- •Аборты при трансмиссивном гастроэнтерите свиней
- •Аборты при энтеровирусной инфекции у свиней
- •Аборты при классической чуме свиней
- •Аборты при Болезни Ауески
- •Аборты при репродуктивно-респираторном синдроме свиней (ррсс)
- •Аборты при парвовирусной болезни свиней
- •Аборт паратифозный у кобыл и овец
- •Аборт при кампилобактериозе
- •Аборты при трихомонозе
- •Исход абортов
- •Токсикозы беременных
- •Прочие болезни беременных
- •Предвестники родов
- •Анатомо-топографические данные по расположению плода в отношении к родовым путям
- •Течение родов
- •Видовые особенности течения родов и послеродового периода
- •Патология родов
- •Задержание последа (Retentio placentae, s. Retentio secundinarum)
- •Акушерский инструментарий
- •Правила оказания акушерской помощи животным
- •Акушерская помощь при патологических родах
- •Акушерская помощь при неправильных расположениях головы плода
- •Акушерская помощь при неправильных расположениях
- •Акушерская помощь при неправильных позициях и положениях плода
- •Родовспоможение при двойнях
- •Особенности акушерской помощи при патологических родах у сук
- •Экстирпация матки (Hysterectomia)
- •Послеродовой период
- •Патология послеродового периода
- •Метрит-мастит-агалактия.
- •Гинекологические болезни животных
- •Болезни матки
- •Хронический скрытый эндометрит (Endometritis latens chronica)
- •Функциональные нарушения яичников коров и телок
- •Болезни яйцеводов
- •Болезни матки
- •Лечение свиней с гинекологическими заболеваниями.
- •Гематометра, пиометра, эндометрит, кистозная гландулярная гиперплазия эндометрия
- •Вагиниты и вульвовагиниты
- •Перивульварная пиодермия
- •Бесплодие самки
- •Расстройство половой функции и болезни половых органов самцов
- •Расстройство половой функции, связанное с нарушением обмена веществ (алиментарная импотенция)
- •Расстройство нейроэндокринной регуляции половой функции у быков-производителей
- •Импотенция у быков-производителей при механических повреждениях, воспалительных процессах и новообразованиях в половых органах
- •Профилактика болезней органов размножения и импотенции у быков-производителей
- •Ветеринарно-санитарные требования к искусственному и естественному осеменению коров и телок
- •Гормональный контроль над воспроизводительной функцией коров и телок
- •Классификация маститов
- •Диагностика маститов Морфологическая оценка молочной железы
- •Ориентировочные требования для оценки промеров вымени коров-первотелок
- •Клинические методы исследования молочной железы
- •Лабораторные методы исследования секрета молочной железы
- •Прямые методы подсчета соматических клеток
- •Косвенные методы определения соматических клеток
- •Биохимические методы исследования молока
- •Правила отбора проб молока (секрета)
- •Правила доставки
- •Проведение исследований
- •Определение бактериальной обсемененности молока редуктазным методом
- •Определение ингибирующих веществ в молоке
- •Рецепты питательных сред Рецепт 1 Кровяной агар цитратный
- •Рецепт 3
- •Рецепт 4 Среда Гисса с манитом
- •Среда Карташовой
- •Мпб с желчью
- •Среда Олькеницкого
- •Среда для анаэробной ферментации сахаров
- •Иммунологические методы исследования молока
- •Определение лизоцимов молока по в.И.Мутовину
- •Определение истинного лизоцима (мурамидазы)
- •Определение общих иммуноглобулинов
- •Калибровочная таблица
- •Определение лактоферрина
- •Определение активности лактопероксидазы
- •Обработка результатов:
- •Лечение животных, больных маститом.
- •Физиотерапия
- •Этиотропная терапия
- •Патогенетическая терапия
- •Хирургические методы лечения маститов
- •Маститы разных видов животных
- •Профилактика маститов
Определение истинного лизоцима (мурамидазы)
а) Метод К. Шахани.
Подготовка к анализу:
1)Приготовление молочной сыворотки.
5мл молока разводят равным объемом 0,5%раствора натрия хлорида и центрифугируют 10мин при 2000об/мин. Снимают слой жира, молоко подогревают до 37°С и доводят рН до 4,61н раствором соляной кислоты. Выпавший в осадок казеин отделяют центрифугированием в течение 10мин при 2000об/мин, а сыворотку фильтруют через бумажный фильтр.
2)Построение калибровочных кривых. Для построения калибровочных кривых используют кипяченое молоко, в котором таким способом подавляется лизоцимная активность, а затем из него готовят молочную сыворотку.
В качестве тест-культуры используют убитых ультрафиолетовыми лучами и лиофилизированных клеток Мусгососсus1уsоdеiсticus, из которых готовят суспензию на 1/15М фосфатном буфере с рН 6,2, экстинция которых должна составлять 10-30% против дистиллированной воды (100%).
В два ряда пробирок с сывороткой молока по 3мл вносят разные количества лизоцима (в первый ряд -от 0-20мкг/100 мл, во второй -от 20-200мкг/100 мл),затем добавляют по 3мл свежеприготовленной клеточной суспензии тест-культуры и на спектрофотометре определяют экстинцию (Д0) при длине волны 540нм. После этого смесь инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение20мин и повторно определяют экстинцию (Д20). По разности экстинций (Д0и Д20) смеси отдельных пробирок и соответствия ей концентрации лизоцима строят две калибровочные кривые.
Проведение анализа:
К 3мл сыворотки исследуемого молока добавляют 3мл свежеприготовленной клеточной суспензии тест-культуры и сразу же определяют на спектрофотометре экстинцию (Д0) при длине волны. 540нм. Затем смесь инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 20мин и повторно определяют экстинцию (Д20).
По разности экстинций Д0и Д20по калибровочной кривой определяют концентрацию лизоцима.
б) По методу Парри в модификации Хавигера
Приготовление молочной сыворотки.
5мл молока центрифугируют 10мин при 2000об/мин, снимают слой жира, подогревают до 37°С и осаждают казеин, доводя рН до4,6путем внесения 1нраствора соляной кислоты. Казеин отделяют центрифугированием в течение 10мин при 2000об/мин, а сыворотку фильтруют через бумажный фильтр и разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1.
2)Приготовление суспензии тест-культуры.
Используют ацетоновый порошок убитой культуры Мусгососсus1уsоdеiсticus, который вносят в 1/5М фосфатный буфер с рН 6,2до конечной оптической плотности 0,65-0,70,которая не изменяется при комнатной температуре в течение 30мин.
К 1мл суспензии тест-культуры добавляют 1мл разведенной физиологическим раствором сыворотки молока, быстро перемешивают и измеряют оптическую плотность Д0на спектрофотометре при длине волны 540нм в кювете с рабочей длиной 1см. Затем пробирки ставят в термостат при температуре 37°С на 30мин, после чего снова определяют оптическую плотность (Д30).
Активность лизоцима выражают в условных единицах активности (УЕА) и определяют по формуле:
Д0-Д30
уед = ——————,
30
где Д0 -начальная оптическая плотность образца;
Д30- оптическая плотность через 30мин;
30 -время инкубации образца в термостате, мин.
1УЕА -изменение оптической плотности на 1единицу за 1мин одним мл сыворотки молока.
По данным Н.А. Сапожниковой (1992),в молоке клинически здоровых коров активность мурамидазы составляет 0,56±0,02 УЕ, а больных субклиническим маститом -0,46±0,01 УЕ.
в) Метод П. А. Емельяненко и др.
1)Приготовление агаровых пластинок.
1%раствор агара «Дифко» на 1/15М фосфатном буфере расплавляют 15-20мин на кипящей водяной бане. В охлажденный до 60-70°С раствор вносят ацетоновый порошок тест-микроба Мусгососсus1уsоdеiсticusиз расчета 20мг на 100мл среды и перемешивают до получения однородной смеси. Смесь разливают в прямоугольные кюветы из органического стекла размером 30х17х1,5см так, чтобы получился слой агара толщиной 4см. После застывания в агаре с помощью тонкостенной металлической трубочки с наружным диаметром 5 мм делают луночки на расстоянии 1,5см друг от друга.
2)Приготовление обезжиренного молока.
Пробу молока (2-5мл) выдерживают в холодильнике при температуре 4-6°С в течение 12-14 ч и снимают верхний слой с жиром.
3)Приготовление растворов лизоцима.
Стандартный лизоцим разводят в 1/15М фосфатном буфере до концентрации 1, 3, 5, 10, 20, 40и 70мкг/мл.
Растворы стандартного лизоцима и пробы молока вносят в луночки агаровой пластинки в количестве по 0,05мл. Кюветы с образцами выдерживают 48ч во влажной камере при комнатной температуре 22-24°С и линейкой измеряют диаметры зон лизиса.
Обработка результатов:
По данным зон лизиса растворами стандартного лизоцима строят калибровочную кривую в полулогарифмическом масштабе и с ее помощью определяют концентрацию лизоцима в исследуемых пробах молока.
г) Метод Оссермана в модификации Фараджи
Подготовка к анализу:
1)Приготовление агаровых пластинок.
1%раствор агара «Дифко» на 1/15М фосфатном буфере рН 6,2 расплавляют 15-20мин на водяной бане. В охлажденный до 60~70°С раствор вносят ацетоновый порошок тест-культуры Мусгососсus1уsоdеiсticusиз расчета 50мг на 100мл среды и перемешивают до получения однородной смеси. Смесь разливают в чашки Петри так, чтобы получился слой агара толщиной 4 мм.После застывания агара в нем делают луночки диаметром 1см на расстоянии 1,5см друг от друга.
2)Приготовление обезжиренного молока.
Пробу молока (2-5мл) выдерживают в холодильнике при температуре 4-6°С в течение 24ч, снимают верхний слой с жиром и разводят 1/15М фосфатным буфером в соотношении 1:10.
3)Приготовление растворов лизоцима.
Стандартный лизоцим разводят в 1/15М фосфатном буфере до концентрации 1, 3, 5, 10, 20, 40и 70 мкг/мл.
Растворы стандартного лизоцима и пробы разведенного молока вносят в луночки агаровой пластинки в количестве по 0,1мл, выдерживают в термостате при 37°С в течение 36ч и линейкой измеряют диаметры зон лизиса.
По данным зон лизиса растворами стандартного лизоцима строят калибровочную кривую и с ее помощью определяют концентрацию лизоцима в исследуемых пробах молока.